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小黑杨(Populus simonii×P.nigra)花粉植株转耐盐基因(betA)的研究

中文摘要第1-4页
英文摘要第4-9页
1 前言第9-23页
   ·课题研究的目的及意义第9-10页
   ·林木遭受盐害机制第10-12页
     ·离子过量第10-11页
     ·水分胁迫第11页
     ·养分离子不平衡第11页
     ·盐胁迫对膜结构的影响第11页
     ·盐胁迫诱导的氧化胁迫对植物的影响第11-12页
   ·林木耐盐机理第12-13页
     ·渗透调节第12页
     ·清除活性氧的膜保护体系第12-13页
     ·水孔蛋白的调节作用第13页
     ·LEA蛋白第13页
   ·耐盐基因工程研究进展第13-18页
     ·抗氧化酶系与活性氧的清除基因工程第13-14页
     ·与渗透调节有关的基因工程第14-16页
       ·mtID基因和gutD基因第14页
       ·otsBA基因和TPS基因第14页
       ·P5CS基因第14页
       ·甘氨酸甜菜碱第14-16页
     ·大分子蛋白类基因工程第16-17页
       ·水通道蛋白第16页
       ·调渗蛋白第16-17页
     ·与离子区域化有关的基因工程第17-18页
   ·林木耐盐基因工程存在的问题及展望第18-19页
   ·农杆菌介导的林木遗传转化概况第19-21页
     ·受伤植物器官的直接感染法第20页
     ·整体植株接种共感染法第20页
     ·体细胞胚或胚性细胞转化法第20-21页
     ·原生质体转化法第21页
     ·附体腋芽转化法第21页
     ·与基因枪结合共转化法第21页
   ·林木遗传转化存在的问题及展望第21-23页
2 材料和方法第23-34页
   ·试验材料第23-25页
     ·外植体来源第23页
     ·菌种和质粒第23页
     ·主要生化试剂第23页
     ·主要仪器设备第23-24页
     ·基本培养基第24页
     ·常用溶液配制第24-25页
   ·实验方法第25-34页
     ·菌种的活化保存第25页
     ·大肠杆菌质粒pRBA的小量制备(碱解法)第25-26页
     ·三亲交配法将中间载体(含betA基因)转入根癌农杆菌EHA105第26-27页
     ·抗生素浓度的确定第27页
     ·工程菌悬浮液的制备及转化程序第27-28页
     ·根癌农杆菌介导的小黑杨花粉植株的遗传转化第28-29页
       ·共培养时间对转化率的影响第28页
       ·脱菌实验第28页
       ·菌液浓度与侵染时间对转化率的影响第28页
       ·不同浓度CaCl_2处理对转化率的影响第28-29页
     ·转化植株的叶片再分化实验第29页
     ·转化植株的生根第29页
     ·转化植株的PCR检测第29-30页
       ·植物总DNA的提取(CTAB法)第29-30页
       ·转化植株PCR检测第30页
     ·转化植株Southern斑点杂交第30-32页
     ·转化植株Southern印迹杂交第32-33页
     ·转化植株的耐盐试验第33页
     ·转化植株的移栽第33-34页
3 结果与分析第34-50页
   ·根癌农杆菌介导的小黑杨花粉植株的遗传转化第34-50页
     ·卡那霉素浓度的确定第34-35页
     ·抑菌抗生素及最佳浓度的确定第35-38页
     ·共培养时间对转化率的影响第38-39页
     ·不同的脱菌方法的比较第39-40页
     ·菌液浓度与侵染时间对转化率的影响第40-41页
     ·不同浓度CaCl_2处理对转化率的影响第41页
     ·转化植株叶片再分化第41-42页
     ·转化植株的生根第42页
     ·转化植株的PCR检测第42-43页
     ·转化植株Southern斑点杂交第43-44页
     ·转化植株Southern印迹杂交第44页
     ·转基因株系耐盐性比较第44-49页
     ·转基因株系的移栽第49-50页
4 讨论第50-57页
   ·农杆菌介导的遗传转化体系的优化第50-53页
     ·预培养与转化率的关系第50页
     ·共培养与转化率的关系第50-51页
     ·除菌抗生素与转化率之间的关系第51-52页
     ·其他因素对转化率的影响第52-53页
   ·转基因植株的检测第53-54页
   ·转基因株系的耐盐效果第54-55页
   ·问题及展望第55-57页
5 结论第57-58页
参考文献第58-62页
图版第62-63页
致谢第63页

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