| 文献综述 枯草杆菌表达系统及生物素生物合成研究进展 | 第1-28页 |
| 第一章 枯草杆菌穿梭载体研究进展 | 第14-21页 |
| 第二章 生物素生物合成研究进展 | 第21-28页 |
| 论文正文 | 第28-84页 |
| 前言 | 第28-29页 |
| 第一部分 大肠杆菌-枯草杆菌小型穿梭载体的构建 | 第29-52页 |
| 引言 | 第29-30页 |
| 1 材料与方法 | 第30-40页 |
| ·材料 | 第30-33页 |
| ·方法 | 第33-40页 |
| 2 结果 | 第40-48页 |
| ·大肠杆菌质粒复制功能区PCR扩增产物检测 | 第40页 |
| ·pE3的筛选与鉴定 | 第40-42页 |
| ·pGDVM的筛选与鉴定 | 第42-44页 |
| ·pGDVM1与pGDVM2的构建与筛选鉴定 | 第44-47页 |
| ·pF1的构建与筛选 | 第47页 |
| ·pF4的构建与筛选 | 第47页 |
| ·pF10的构建与筛选 | 第47-48页 |
| ·质粒稳定性检测 | 第48页 |
| 3 讨论 | 第48-50页 |
| ·PCR引物设计及扩增结果 | 第48页 |
| ·质粒复制的功能区 | 第48页 |
| ·PCR快检方法在筛选重组质粒上的应用 | 第48-49页 |
| ·pE3 | 第49页 |
| ·以pGDV1为基本骨架的穿梭载体的构建 | 第49页 |
| ·从DH5α转化菌分离出来的pGDVM上的BclI位点不被识别 | 第49-50页 |
| ·以pBC16和pUB110为基本骨架的穿梭载体的构建 | 第50页 |
| ·实验中的污染问题 | 第50页 |
| 4 小结 | 第50-52页 |
| 第二部分 枯草杆菌生物素操纵子基因在大肠杆菌中的功能表达研究 | 第52-84页 |
| 引言 | 第52-54页 |
| 一. 枯草杆菌生物素基因bioW的克隆及其在大肠杆菌中的功能表达研究 | 第54-67页 |
| 1 材料与方法 | 第54-59页 |
| ·材料 | 第54页 |
| ·方法 | 第54-59页 |
| 2 结果 | 第59-64页 |
| ·枯草杆菌AS1.1094基因组DNA的提取 | 第59页 |
| ·bioW的PCR扩增产物检测 | 第59-60页 |
| ·重组质粒pEXT20bioW的筛选与鉴定 | 第60-61页 |
| ·枯草杆菌生物素基因bioW功能表达检测 | 第61-64页 |
| 3 讨论 | 第64-66页 |
| ·引物设计与扩增 | 第64页 |
| ·bioW表达载体的构建 | 第64页 |
| ·bioW与大肠杆菌生物素缺陷株的遗传互补 | 第64-65页 |
| ·bioW诱导表达产物对菌生长的影响 | 第65-66页 |
| 4 小结 | 第66-67页 |
| 二. 枯草杆菌生物素基因bioB的克隆及其在大肠杆菌中的功能表达研究 | 第67-75页 |
| 1 材料与方法 | 第67-70页 |
| ·材料 | 第67页 |
| ·方法 | 第67-70页 |
| 2 结果 | 第70-73页 |
| ·bioB的PCR扩增产物检测 | 第70页 |
| ·重组质粒pEXT20bioB的筛选与鉴定 | 第70-72页 |
| ·枯草杆菌生物素基因bioB在大肠杆菌中的功能表达检测 | 第72-73页 |
| 3 讨论 | 第73-74页 |
| ·引物设计与PCR扩增 | 第73页 |
| ·bioB诱导型表达载体构建 | 第73页 |
| ·bioB与大肠杆菌生物素缺陷株的遗传互补 | 第73-74页 |
| ·bioB诱导表达未对菌体生长产生抑制 | 第74页 |
| 4 小结 | 第74-75页 |
| 三. 枯草杆菌生物素基因bioWAFDB的克隆及在大肠杆菌中的功能表达分析 | 第75-84页 |
| 1 材料与方法 | 第75-80页 |
| ·材料 | 第75页 |
| ·方法 | 第75-80页 |
| 2 结果 | 第80-82页 |
| ·bioWAFDB的PCR扩增产物检测 | 第80页 |
| ·重组质粒pEXT20bioWAFDB的筛选与鉴定 | 第80-81页 |
| ·枯草杆菌生物素基因bioWAFDB功能表达检测 | 第81-82页 |
| 3 讨论 | 第82-83页 |
| ·引物设计与PCR扩增 | 第82页 |
| ·bioWAFDB与大肠杆菌生物素缺陷株的遗传互补分析 | 第82-83页 |
| ·bioWAFDB诱导表达对大肠杆菌受体菌的生长抑制 | 第83页 |
| 4 小结 | 第83-84页 |
| 结论 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-94页 |
| 附录1 常用试剂的配制 | 第94-96页 |
| 附录2 细菌基因组DNA提取(试剂盒法) | 第96页 |
| 附录3 质粒DNA提取(试剂盒法) | 第96-97页 |
| 附录4 PCR产物的回收与纯化(试剂盒法) | 第97页 |
| 附录5 DNA凝胶纯化回收(试剂盒法) | 第97页 |
| 附录6 大肠杆菌2×TSS转化贮存液转化 | 第97-98页 |
| 附录7 电穿孔转化感受态细胞的制备 | 第98-99页 |
