| 致谢 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 目录 | 第10-12页 |
| 第一部分 绪论 | 第12-22页 |
| ·Dmrt基因的相关综述 | 第12页 |
| ·Dmrt基因家族的表达 | 第12-13页 |
| ·Dmrt基因家族的功能 | 第13-17页 |
| ·Dmrt基因在性腺中的功能 | 第13-15页 |
| ·Dmrt基因家族在生殖腺以外的功能 | 第15-17页 |
| ·热带爪蟾是发育生物学和功能生物学的良好模式生物 | 第17页 |
| ·爪蟾神经版前端的发育 | 第17-19页 |
| ·本研究的内容、目的和意义 | 第19-22页 |
| ·实验的目的 | 第19页 |
| ·实验研究的内容 | 第19-20页 |
| ·本实验研究的意义 | 第20-22页 |
| 第二部分 材料和方法 | 第22-38页 |
| ·实验材料 | 第22-25页 |
| ·实验方法 | 第25-38页 |
| ·引物设计 | 第25-26页 |
| ·爪蟾胚胎的获取 | 第26页 |
| ·胚胎总RNA抽提 | 第26-27页 |
| ·RNA逆转录-第一链cDNA的合成 | 第27页 |
| ·PCR反应体系 | 第27-28页 |
| ·PCR产物的割胶回收 | 第28页 |
| ·载体连接反应T载体 | 第28页 |
| ·E.coli TG1感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| ·转化 | 第29页 |
| ·质粒的抽提(试剂盒购买于Axygen公司) | 第29-30页 |
| ·酶切鉴定 | 第30页 |
| ·探针的制备 | 第30-31页 |
| ·模板的制备 | 第30-31页 |
| ·探针的合成 | 第31页 |
| ·探针的纯化 | 第31页 |
| ·胚胎的整体原位杂交 | 第31-33页 |
| ·原位杂交第一天(以下所用的步骤都是在摇床上进行) | 第31-32页 |
| ·原位杂交第二天 | 第32页 |
| ·原位杂交第三天 | 第32页 |
| ·原位杂家第四天 | 第32-33页 |
| ·原位杂交第五天 | 第33页 |
| ·石蜡切片 | 第33-34页 |
| ·RNA的合成 | 第34-35页 |
| ·模板的制备(同探针的模板制备一样) | 第34页 |
| ·正义RNA的合成 | 第34-35页 |
| ·RNA纯化(按照MEGAclear~(TM) Kit) | 第35页 |
| ·胚胎的显微注射 | 第35页 |
| ·“动物帽”的分离 | 第35-36页 |
| ·Affymetrix基因芯片的制作 | 第36页 |
| ·荧光定量PCR | 第36-38页 |
| 第三部分 实验结果与分析 | 第38-58页 |
| ·Dmrt3、4、5在嗅觉原基中的表达 | 第38-49页 |
| ·Dmrt3、Dmrt4、Dmrt5的表达比较 | 第38-39页 |
| ·Dmrt3、Dmrt4、Dmrt5各自调控谱的分析 | 第39-43页 |
| ·Dmrt3、Dmrt4、Dmrt5之间调控谱的比较 | 第43-48页 |
| ·Dmrt5基因芯片筛选结果的细化 | 第48-49页 |
| ·Dmrt5在嗅觉神经形成过程中的功能 | 第49-54页 |
| ·Dmrt5的过表达在离体条件下可以诱导嗅觉神经的形成 | 第49-50页 |
| ·Dmrt5体内过表达引起嗅觉神经形成标记表达范围的扩大 | 第50页 |
| ·Dmrt5对嗅觉神经形成是必需的 | 第50-54页 |
| ·Morpholino反义寡核苷酸介导的Dmrt5基因敲落引起嗅觉神经形成缺陷 | 第51-53页 |
| ·Dmrt5敲落后引起Ngn2的表达变化可以被Dmrt5/Dmrt4挽救 | 第53-54页 |
| ·Dmrt5对嗅觉神经形成的调控可能是通过Dmrt4实施的 | 第54-57页 |
| ·体内过表达Dmrt5可以引起Dmrt4表达范围扩大 | 第54-55页 |
| ·体外过表达Dmrt5可以诱导Dmrt4基因的表达 | 第55-56页 |
| ·Dmrt5可以挽救由Dmrt5-MO引起的Dmrt4的表达的缺陷 | 第56-57页 |
| ·Dmrt4对于Dmrt5参与的嗅觉神经形成的调控是必须的 | 第57-58页 |
| 第四部分 讨论 | 第58-64页 |
| ·Dmrt5在热带爪蟾嗅觉神经形成中的调控模式 | 第58-60页 |
| ·过表达Dmrt5可以导致胚胎发育异常 | 第60页 |
| ·Dmrt5对胚胎头部发育的影响 | 第60-62页 |
| ·Dmrt3在嗅觉神经形成过程中与Dmrt4和Dmrt5的区别 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 作者简历 | 第70页 |
