| 摘要 | 第1-4页 |
| Summary | 第4-6页 |
| 缩略词表 | 第6-10页 |
| Ⅰ文献综述 | 第10-22页 |
| 1 农杆菌介导的玉米遗传转化技术研究进展 | 第12-14页 |
| ·农杆菌介导的玉米遗传转化发展历程 | 第12页 |
| ·农杆菌介导玉米遗传转化的受体 | 第12-14页 |
| ·农杆菌介导玉米遗传转化的菌株及载体 | 第14页 |
| 2 转基因植物安全性策略研究进展 | 第14-18页 |
| ·使用安全的选择标记基因 | 第15-16页 |
| ·糖类代谢酶基因 | 第15页 |
| ·化合物解毒酶基因 | 第15-16页 |
| ·植物抗逆相关基因 | 第16页 |
| ·去除选择标记基因 | 第16-18页 |
| ·共转化法 | 第16-17页 |
| ·转座子系统 | 第17页 |
| ·位点特异性重组系统 | 第17页 |
| ·染色体内重组系统 | 第17-18页 |
| 3 植物抗真菌基因工程研究进展 | 第18-20页 |
| ·主要的抗真菌病害基因 | 第18-19页 |
| ·几丁质酶基因和β-1,3-葡聚糖酶基因 | 第18-19页 |
| ·核糖体失活蛋白基因 | 第19页 |
| ·植物抗毒素基因 | 第19页 |
| ·几丁质酶、β-1,3-葡聚糖酶融合蛋白基因的应用 | 第19-20页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 5 研究技术路线 | 第21-22页 |
| Ⅱ材料与方法 | 第22-33页 |
| 1 材料 | 第22-24页 |
| ·菌种和质粒 | 第22页 |
| ·玉米材料 | 第22页 |
| ·工具酶和试剂 | 第22页 |
| ·主要仪器设备 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22-24页 |
| 2 方法 | 第24-33页 |
| ·抗真菌双 T-DNA 植物表达载体构建 | 第24-30页 |
| ·载体 pCAMBIA1300-EPSPS 基础载体质粒 DNA 的提取 | 第24-25页 |
| ·pCAMBIA1300-EPSPS/HE、pCAMBIA1300-EPSPS/HX 构建 | 第25-26页 |
| ·LB-HindⅢ-RB 线性片段的扩增及回收 | 第26-27页 |
| ·pCAMBIA1300-EPSPS/HE-2T 载体的构建 | 第27-28页 |
| ·pCAMBIA1300-EPSPS-2T-Chi-linker-Glu 的构建 | 第28页 |
| ·植物表达载体 pCAMBIA1300-bar-2T-Chi-linker-Glu 的构建 | 第28-29页 |
| ·植物表达载体转化根癌农杆菌及其鉴定 | 第29-30页 |
| ·农杆菌介导的玉米茎尖遗传转化 | 第30-33页 |
| ·农杆菌工程菌的制备 | 第30页 |
| ·除草剂筛选浓度的选定 | 第30页 |
| ·农杆菌转化玉米茎尖 | 第30-31页 |
| ·转化苗的移栽和除草剂筛选 | 第31页 |
| ·农杆菌介导的玉米茎尖转化体系优化 | 第31页 |
| ·转基因玉米植株的分子检测 | 第31-33页 |
| Ⅲ结果与分析 | 第33-45页 |
| 1 抗真菌双 T-DNA 植物表达载体构建 | 第33-39页 |
| ·pCAMBIA1300-EPSPS/HE、pCAMBIA1300/HX 构建 | 第33-34页 |
| ·pCAMBIA1300-EPSPS-2T 的构建 | 第34-37页 |
| ·抗真菌双 T-DNA 植物表达载体构建 | 第37-38页 |
| ·植物表达载体转化根癌农杆菌及其鉴定 | 第38-39页 |
| 2 农杆菌介导的玉米茎尖遗传转化 | 第39-45页 |
| ·转化玉米植株对 Basta 的抗性及适宜筛选浓度的确定 | 第39-40页 |
| ·农杆菌介导玉米茎尖遗传转化条件的选择 | 第40-42页 |
| ·菌液浓度对转化率的影响 | 第40页 |
| ·侵染时间对转化效率的影响 | 第40-41页 |
| ·不同菌株对遗传转化效率的影响 | 第41页 |
| ·乙酰丁香酮浓度对转化效率的影响 | 第41-42页 |
| ·真空渗透对转化效率的影响 | 第42页 |
| ·抗性植株的获得 | 第42-43页 |
| ·转基因玉米植株分子检测 | 第43-44页 |
| ·T1代转基因植株种子的获得 | 第44-45页 |
| Ⅳ讨论 | 第45-47页 |
| 1 通过双 T-DNA 载体系统培育安全转基因作物 | 第45页 |
| 2 除草剂最佳筛选浓度的确定 | 第45页 |
| 3 玉米茎尖遗传转化条件的选择 | 第45-46页 |
| 3 转基因植株的分子检测 | 第46页 |
| 4 抗性植株的后期管理 | 第46-47页 |
| Ⅴ结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 作者简介 | 第55-56页 |
| 导师简介 | 第56页 |
