| 致谢 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-22页 |
| ·植物中山梨醇的研究 | 第10页 |
| ·山梨醇在植物中的分布 | 第10页 |
| ·山梨醇在植物体内的功能 | 第10-12页 |
| ·是蔷薇科植物主要的光合产物和同化运输物质 | 第10-11页 |
| ·是蔷薇科植物主要的代谢贮藏物质 | 第11页 |
| ·山梨醇在植物体内的积累可提高植物的抗逆性 | 第11-12页 |
| ·山梨醇代谢相关酶的研究进展 | 第12-18页 |
| ·6-磷酸山梨醇脱氢酶（sorbitol-6-phosphate dehydrogenase,S6PDH） | 第12-15页 |
| ·6-磷酸山梨醇脱氢酶在植物中的研究 | 第12-13页 |
| ·6-磷酸山梨醇脱氢酶的定位 | 第13-14页 |
| ·6-磷酸山梨醇脱氢酶的分布和酶活性变化 | 第14页 |
| ·6-磷酸山梨醇脱氢酶的活性、蛋白与转录之间的关系 | 第14-15页 |
| ·6-磷酸山梨醇脱氢酶（S6PDH）的酶学特征 | 第15页 |
| ·醛糖-6-磷酸还原酶(alditol-6-phosphate reductase,A6PRD) | 第15页 |
| ·山梨醇-6-磷酸磷酸脂酶（sorbitol-6-phosphate phosphatase,S6PPP） | 第15页 |
| ·山梨醇脱氢酶（sorbitol dehydrogenase,SDH） | 第15-18页 |
| ·山梨醇脱氢酶（SDH）的酶学特征 | 第16-17页 |
| ·山梨醇脱氢酶的分布及其活性变化 | 第17页 |
| ·山梨醇脱氢酶活性、蛋白与转录之间的关系 | 第17-18页 |
| ·山梨醇氧化酶（Sorbitol Oxidase,SOX） | 第18页 |
| ·S6PDH 与SDH 基因的克隆及其转基因植物的研究进展 | 第18-21页 |
| ·S6PDH 基因的克隆及同源性分析 | 第18-19页 |
| ·SDH 基因的克隆及序列分析 | 第19页 |
| ·S6PDH 与SDH 基因的植物遗传转化研究 | 第19-21页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 第二章 烟草山梨醇脱氢酶基因（NAD-SDH）的克隆与序列分析 | 第22-30页 |
| ·植物材料和菌株 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-24页 |
| ·烟草叶片总RNA 的提取 | 第22页 |
| ·烟草NAD-SDH 全长cDNA 的克隆 | 第22-23页 |
| ·引物设计 | 第22页 |
| ·RT-PCR | 第22-23页 |
| ·PCR 产物的回收、连接和转化 | 第23-24页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第23页 |
| ·回收产物与pMD-18 T 载体的连接、转化 | 第23-24页 |
| ·阳性克隆的筛选鉴定 | 第24页 |
| ·结果与分析 | 第24-29页 |
| ·烟草NAD-SDH 的克隆 | 第24-27页 |
| ·烟草NAD-SDH 与其它植物山梨醇脱氢酶氨基酸序列比较 | 第27-29页 |
| ·小结与讨论 | 第29-30页 |
| 第三章 NAD-SDH-MBP 融合蛋白的原核表达 | 第30-36页 |
| ·菌株和原核表达载体 | 第30页 |
| ·方法 | 第30-32页 |
| ·烟草NAD-SDH 编码区cDNA 序列的扩增 | 第30页 |
| ·回收产物NAD-SDH 与pMD-18 T simple 载体的连接、转化和鉴定 | 第30-31页 |
| ·回收产物NAD-SDH 与pMD-18 T simple 载体的连接和转化 | 第30页 |
| ·酶切鉴定 | 第30-31页 |
| ·原核表达载体pMAL-C_2X+SDH 的构建 | 第31页 |
| ·NAD-SDH-MBP 融合蛋白的原核表达 | 第31-32页 |
| ·SDS- PGAE 电泳 | 第32页 |
| ·结果与分析 | 第32-34页 |
| ·原核表达载体pMAL-C_2X+SDH 的构建 | 第32-34页 |
| ·NAD-SDH-MBP 融合蛋白的原核表达 | 第34页 |
| ·小结与讨论 | 第34-36页 |
| 第四章 烟草NAD-SDH 蛋白的亚细胞定位 | 第36-41页 |
| ·植物材料 | 第36页 |
| ·瞬时表达载体E3025-GFP 的构建（pSAT6-RFP-N1 载体的改造） | 第36-37页 |
| ·瞬时表达载体E3025-GFP 的构建 | 第36页 |
| ·洋葱表皮细胞瞬时表达(基因枪法) | 第36-37页 |
| ·材料的准备 | 第36页 |
| ·金粉悬液的准备 | 第36页 |
| ·高纯度大量质粒的提取 | 第36页 |
| ·金粉-DNA 复合体的制备 | 第36-37页 |
| ·基因枪法转化E3025-GFP 瞬时表达载体 | 第37页 |
| ·GFP 荧光观察 | 第37页 |
| ·烟草NAD-SDH-GFP 融合蛋白亚细胞定位 | 第37页 |
| ·瞬时表达载体E3025-GFP+NAD-SDH 的构建 | 第37页 |
| ·NAD-SDH-GFP 融合蛋白的亚细胞定位 | 第37页 |
| ·结果与分析 | 第37-40页 |
| ·PSATS-RFP-N1 载体的改造 | 第37-39页 |
| ·利用E3025-GFP 在洋葱表皮细胞瞬时表达GFP | 第39页 |
| ·烟草NAD-SDH-GFP 融合蛋白亚细胞定位 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-41页 |
| 第五章 拟南芥T-DNA 敲除NAD-SDH 纯合突变体的鉴定 | 第41-45页 |
| ·植物材料 | 第41页 |
| ·方法 | 第41-42页 |
| ·拟南芥的种植 | 第41页 |
| ·拟南芥NAD-SDH 基因T-DNA 敲除突变纯合体的鉴定 | 第41-42页 |
| ·植物基因组DNA 的小量提取（SDS 法） | 第41页 |
| ·拟南芥T-DNA 敲除纯合突变体的PCR 鉴定 | 第41-42页 |
| ·结果与分析 | 第42-44页 |
| ·讨论 | 第44-45页 |
| 第六章 NAD-SDH 植物表达载体的构建和转基因拟南芥的获得 | 第45-53页 |
| ·材料 | 第45页 |
| ·实验方法 | 第45-47页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第45页 |
| ·拟南芥遗传转化 | 第45-46页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第45页 |
| ·重组质粒p1305.1+SDH 和p1302 +SDH 的农杆菌转化 | 第45-46页 |
| ·PCR 验证及菌种保存 | 第46页 |
| ·拟南芥遗传转化 | 第46页 |
| ·转基因拟南芥的筛选鉴定 | 第46-47页 |
| ·拟南芥T_0代种子的潮霉素筛选 | 第46页 |
| ·转基因拟南芥组织基因组DNA PCR 鉴定 | 第46-47页 |
| ·转基因拟南芥和T –DNA 敲除NAD-SDH 突变纯合体拟南芥表型观察与初步抗旱试验 | 第47页 |
| ·结果与讨论 | 第47-53页 |
| ·植物表达载体p1302+SDH 的成功构建 | 第47-48页 |
| ·植物表达载体p1305.1+SDH 的成功构建 | 第48-50页 |
| ·重组质粒p1305.1+SDH 和p1302+SDH 的农杆菌转化结果 | 第50页 |
| ·转基因拟南芥的筛选 | 第50页 |
| ·转基因拟南芥的PCR 验证 | 第50-52页 |
| ·转基因拟南芥和T-DNA 敲除NAD-SDH 突变纯合体拟南芥的表型观察与初步抗旱试验 | 第52-53页 |
| 第七章 小结 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| Abstract | 第61-63页 |
| 附录 | 第63-65页 |
