| 致谢 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-20页 |
| ·人防御素研究进展 | 第9-14页 |
| ·人防御素的分布 | 第9页 |
| ·人防御素的分子生物学特征 | 第9-13页 |
| ·人防御素的分子结构 | 第9-11页 |
| ·人防御素在染色体上的定位及基因结构 | 第11页 |
| ·人防御素的抗菌活性 | 第11-13页 |
| ·人防御素基因的表达调控 | 第13页 |
| ·人防御素的作用机理 | 第13-14页 |
| ·人防御素的基因工程 | 第14页 |
| ·人防御素在原核细胞中的表达 | 第14页 |
| ·人防御素在真核细胞中的表达 | 第14页 |
| ·乳腺生物反应器 | 第14-20页 |
| ·乳腺生物反应器的构建 | 第15-17页 |
| ·表达载体的构建 | 第15-17页 |
| ·常用的基因转移技术 | 第17-18页 |
| ·显微注射法 | 第17页 |
| ·反转录病毒感染技术 | 第17-18页 |
| ·胞内精子微注射技术 | 第18页 |
| ·ES细胞介导技术 | 第18页 |
| ·乳腺生物反应器的应用现状 | 第18-19页 |
| ·问题与展望 | 第19-20页 |
| 2 引言 | 第20-21页 |
| 3 人β防御素3基因的克隆及序列分析 | 第21-28页 |
| ·材料与方法 | 第21-25页 |
| ·材料 | 第21-22页 |
| ·实验方法 | 第22-25页 |
| ·PCR引物的设计与合成 | 第22页 |
| ·PCR反应 | 第22-23页 |
| ·PCR产物的回收和纯化 | 第23页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第23-24页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第24页 |
| ·重组质粒的转化 | 第24页 |
| ·重组质粒pMD18-hBD3的筛选与鉴定 | 第24-25页 |
| ·结果与分析 | 第25-27页 |
| ·hBD3的PCR扩增结果 | 第25-26页 |
| ·重组质粒pMD18-hBD3的筛选与鉴定 | 第26-27页 |
| ·PCR 鉴定 | 第26页 |
| ·酶切鉴定 | 第26-27页 |
| ·测序鉴定 | 第27页 |
| ·结论与讨论 | 第27-28页 |
| 4 牛β酪蛋白基因5′端的克隆及序列测定 | 第28-33页 |
| ·材料与方法 | 第28-29页 |
| ·材料 | 第28页 |
| ·方法 | 第28-29页 |
| ·PCR引物的设计与合成 | 第28页 |
| ·牛血液DNA的提取 | 第28页 |
| ·PCR反应 | 第28-29页 |
| ·PCR产物的回收和纯化 | 第29页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第29页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第29页 |
| ·重组质粒的转化 | 第29页 |
| ·转化菌的筛选与鉴定 | 第29页 |
| ·结果与分析 | 第29-31页 |
| ·提取血液基因组DNA | 第29页 |
| ·牛β-CN基因5′调控区的PCR扩增 | 第29-30页 |
| ·重组质粒pMD18-βCN与鉴定 | 第30-31页 |
| ·PCR鉴定 | 第30页 |
| ·酶切鉴定 | 第30页 |
| ·测序鉴定 | 第30-31页 |
| ·结论与讨论 | 第31-33页 |
| 5 hBD3基因真核表达载体的构建及在小鼠乳腺中的初步表达 | 第33-38页 |
| ·材料与方法 | 第33-35页 |
| ·材料 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-35页 |
| ·人β防御素3基因片段的制备 | 第33页 |
| ·双酶切产物的纯化和回收 | 第33-34页 |
| ·表达载体pcDNA3.1（+）-hBD3 的构建 | 第34页 |
| ·表达载体pcDNA3.1（+）-hBD3的筛选与鉴定 | 第34页 |
| ·注射用质粒DNA的制备 | 第34-35页 |
| ·注射小鼠乳腺 | 第35页 |
| ·乳汁的采取 | 第35页 |
| ·乳汁中人β防御素3的检测 | 第35页 |
| ·结果与分析 | 第35-36页 |
| ·重组表达质粒pcDNA3.1-hBD3的构建 | 第35页 |
| ·重组质粒pcDNA3.1（+）-hBD3的鉴定 | 第35-36页 |
| ·人β防御素3基因的表达和活性检测 | 第36页 |
| ·结论与讨论 | 第36-38页 |
| 本文小结 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-47页 |
| ABSTRACT | 第47-49页 |
| 附件1 克隆的人防御素3与GenBank公布序列比对结果 | 第49-51页 |
| 附件2 克隆的牛β-酪蛋白基因5′端调控序列与GenBank公布的序列比对结果 | 第51-54页 |
