| 致谢 | 第1-8页 |
| 主要符号对照表 | 第8-10页 |
| 摘要 | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-25页 |
| ·植物在逆境胁迫下的基因表达 | 第11-13页 |
| ·ABRE 介导的ABA 依赖的信号通路 | 第11页 |
| ·依赖ABA 的信号通路中的其它顺式作用元件 | 第11-12页 |
| ·在非生物胁迫中的不依赖于ABA 的信号通路 | 第12页 |
| ·胁迫应答反应中不同顺式作用元件介导的信号交叉 | 第12-13页 |
| ·AP2/EREBP 类转录因子 | 第13-18页 |
| ·ERF/AP2 结构域的发现 | 第13-14页 |
| ·AP2/EREBP 转录因子的结构特征 | 第14-15页 |
| ·ERF/AP2 结构域的分类 | 第15-17页 |
| ·ERF/AP2 结构域的起源与进化 | 第17-18页 |
| ·DREB 类转录因子及DRE 介导的信号通路 | 第18-22页 |
| ·DRE 元件及DREB 转录因子 | 第18页 |
| ·受DRE81/CBF 调控的下游基因 | 第18-19页 |
| ·DRE81/CBF 基因表达的上游调控 | 第19页 |
| ·DRE81/CBF 基因表达的自身调控 | 第19页 |
| ·ICE1-CBF 信号通路的负调控 | 第19-20页 |
| ·ICE1-CBF 信号通路的转录后调控 | 第20-21页 |
| ·DREB 转录因子的DNA 结合活性分析 | 第21页 |
| ·DREB 转录激活机制的研究 | 第21-22页 |
| ·其它植物系统中的DREB 转录调控 | 第22页 |
| ·DREB 提高植物抗逆性的研究 | 第22-23页 |
| ·烟草研究概述 | 第23-25页 |
| 2 引言 | 第25-27页 |
| ·研究的目的和意义 | 第25-26页 |
| ·研究的内容及思路 | 第26-27页 |
| ·烟草NtDREB 基因的克隆和表达模式分析 | 第26页 |
| ·酵母单杂交和凝胶滞留分析NtDREB 基因的功能 | 第26页 |
| ·DRE81A 类转录调控区起转录激活作用的关键氨基酸确定 | 第26页 |
| ·ERF/AP2 结构域中与DRE 元件结合的关键氨基酸鉴定 | 第26-27页 |
| 3 材料与方法 | 第27-40页 |
| ·实验材料和仪器 | 第27页 |
| ·实验材料 | 第27页 |
| ·植物材料 | 第27页 |
| ·菌株和载体 | 第27页 |
| ·试剂 | 第27页 |
| ·实验仪器 | 第27页 |
| ·实验方法 | 第27-40页 |
| ·植物材料的处理 | 第27-28页 |
| ·CTAB 法提取烟草基因组DNA | 第28页 |
| ·试剂配制 | 第28页 |
| ·基因组DNA 的粗提 | 第28页 |
| ·基因组DNA 的纯化 | 第28页 |
| ·Trizol 法提取烟草总RNA | 第28-29页 |
| ·试剂和耗材 | 第28-29页 |
| ·提取RNA 的实验步骤 | 第29页 |
| ·RT-PCR | 第29页 |
| ·Genome Walking | 第29-31页 |
| ·基因克隆中所用的引物 | 第31-32页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第32-33页 |
| ·酵母单杂交实验 | 第33-36页 |
| ·酵母细胞的转化 | 第33-35页 |
| ·Colony-lift Filter Assay | 第35-36页 |
| ·PDI 融合蛋白表达载体的构建 | 第36页 |
| ·蛋白的诱导表达检测 | 第36-37页 |
| ·His-Tag 融合蛋白的表达纯化 | 第37页 |
| ·凝胶滞留（EMSA）分析 | 第37-38页 |
| ·转录调控区激活关键氨基酸的突变 | 第38-39页 |
| ·ERF/AP2 区与DRE 元件结合关键氨基酸的突变 | 第39-40页 |
| 4 结果与分析 | 第40-58页 |
| ·烟草NTDREB 基因的克隆 | 第40-45页 |
| ·从EST 库中BLAST 得到烟草EST 序列 | 第40-41页 |
| ·NtDREB 基因ERF/AP2 结构域的克隆 | 第41-42页 |
| ·5’-Genome Walking 扩增基因5’端序列 | 第42-43页 |
| ·3’-Genome Walking 克隆基因3’端序列 | 第43-44页 |
| ·NtDREB 基因编码区克隆 | 第44-45页 |
| ·NTDREB 基因的序列特征分析和同源比对 | 第45-49页 |
| ·NtDREB 基因的核酸和蛋白质序列分析 | 第45-46页 |
| ·NtDREB 基因的序列比对和系统发生分析 | 第46-49页 |
| ·NTDREB 基因的表达模式分析 | 第49页 |
| ·NTDREB 的功能分析 | 第49-58页 |
| ·NtDREB 的转录激活鉴定 | 第49-50页 |
| ·DRE81A 类转录因子的转录调控区关键氨基酸的寻找 | 第50-51页 |
| ·转录调控区定点突变分析 | 第51-52页 |
| ·NTDREB 与DRE 顺式作用元件结合的功能分析 | 第52-54页 |
| ·NTDREB-PDI 融合蛋白表达载体的构建 | 第54页 |
| ·NTDREB-PDI 融合蛋白的诱导表达 | 第54-55页 |
| ·NTDREB-PDI 融合蛋白的提取纯化 | 第55页 |
| ·凝胶滞留分析NTDREB 与顺式作用元件的结合能力 | 第55-56页 |
| ·ERF/AP2 结构域中与DRE 元件结合的关键氨基酸鉴定 | 第56-58页 |
| 5 结论与讨论 | 第58-63页 |
| ·结论 | 第58-59页 |
| ·讨论 | 第59-63页 |
| ·NtDREB 基因功能分析 | 第59页 |
| ·DRE81A 类转录调控区起转录激活作用的关键氨基酸分析 | 第59-61页 |
| ·ERF/AP2 结构域中与DRE 元件结合的关键氨基酸分析 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| ABSTRACT | 第71-72页 |
