杨梅果实EST文库构建
| 致谢 | 第1-7页 |
| 缩略语表 | 第7-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-23页 |
| 1 EST在植物功能基因组学研究中的应用 | 第14-15页 |
| 2 果实EST研究进展 | 第15-17页 |
| ·dbEST数据库中果实的EST数据 | 第15-16页 |
| ·果实EST数据的分析及利用 | 第16-17页 |
| 3 cDNA文库构建技术、测序及进展 | 第17-20页 |
| ·构建cDNA文库的基本原理和方法 | 第18页 |
| ·cDNA文库的种类 | 第18-19页 |
| ·cDNA克隆测序方向的选择 | 第19-20页 |
| 4 研究背景与目的 | 第20-21页 |
| ·杨梅产业 | 第20页 |
| ·杨梅EST研究的意义 | 第20-21页 |
| 5 研究目标与内容 | 第21-23页 |
| 第二章 杨梅果实cDNA文库构建与随机克隆测序 | 第23-35页 |
| 1 材料 | 第23页 |
| ·植物材料 | 第23页 |
| ·菌株及载体 | 第23页 |
| 2 方法 | 第23-29页 |
| ·RNA提取 | 第23-24页 |
| ·mRNA分离 | 第24页 |
| ·mRNA荧光定量 | 第24-25页 |
| ·单链cDNA合成 | 第25页 |
| ·双链cDNA的合成及定量 | 第25-26页 |
| ·蛋白酶K及Sfi I内切酶处理 | 第26页 |
| ·cDNA酶切片段分级分离及连接 | 第26-27页 |
| ·质粒转化 | 第27-28页 |
| ·原始文库的滴度测定 | 第28页 |
| ·cDNA插入片段的大小分析 | 第28页 |
| ·文库重组率鉴定 | 第28页 |
| ·cDNA文库扩增 | 第28-29页 |
| ·cDNA克隆测序 | 第29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-32页 |
| ·总RNA的提取 | 第29页 |
| ·mRNA的分离纯化 | 第29-30页 |
| ·cDNA的合成及分析 | 第30页 |
| ·cDNA文库的质量 | 第30-32页 |
| ·插入片段大小分析 | 第32页 |
| ·cDNA克隆测序 | 第32页 |
| 4 讨论 | 第32-35页 |
| 第三章 杨梅EST序列分析 | 第35-43页 |
| 1 材料 | 第35页 |
| 2 方法 | 第35-36页 |
| ·EST序列预处理 | 第35-36页 |
| ·序列比对与拼接 | 第36页 |
| ·Unigene同源性比对 | 第36页 |
| ·功能基因归类 | 第36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-40页 |
| ·EST序列预处理及Clustalx比对 | 第36页 |
| ·序列比对 | 第36-37页 |
| ·EST功能归类 | 第37-38页 |
| ·不同成熟度果实的EST差异 | 第38-39页 |
| ·果实成熟相关EST分析 | 第39页 |
| ·果实品质相关EST分析 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-43页 |
| 第四章 MPCR体系构建 | 第43-50页 |
| 1 实验材料 | 第43页 |
| 2 实验方法 | 第43-45页 |
| ·高丰度表达基因的判断 | 第43页 |
| ·引物设计 | 第43-45页 |
| ·PCR及MPCR条件 | 第45页 |
| ·电泳分析 | 第45页 |
| 3 结果 | 第45-48页 |
| ·10个高频基因的确定 | 第45-46页 |
| ·单对引物扩增结果 | 第46-47页 |
| ·引物浓度相同的MPCR扩增结果 | 第47页 |
| ·优化的MPCR体系扩增效果 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-50页 |
| 小结与展望 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-54页 |
| 附录 硕士学习阶段参加研究课题及发表论文 | 第54页 |
