| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-6页 |
| 目录 | 第6-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-27页 |
| ·引言 | 第9-10页 |
| ·ALA的应用与前景展望 | 第10-15页 |
| ·ALA在植物中的作用机理及农业上的用途 | 第10-13页 |
| ·新型绿色除草剂 | 第11-12页 |
| ·植物生长调节剂 | 第12-13页 |
| ·无公害杀虫剂 | 第13页 |
| ·医学领域的应用价值 | 第13-15页 |
| ·新型抗癌药物 | 第13-14页 |
| ·诊断试剂 | 第14-15页 |
| ·5-氨基乙酰丙酸的生产 | 第15-20页 |
| ·化学法合成5-氨基乙酰丙酸 | 第15页 |
| ·生物合成5-氨基乙酰丙酸的途径 | 第15-17页 |
| ·碳四途径合成5-氨基乙酰丙酸 | 第15页 |
| ·碳五途径合成5-氨基乙酰丙酸 | 第15-17页 |
| ·生物法合成5-氨基乙酰丙酸 | 第17-20页 |
| ·5-氨基乙酰丙酸高产菌株的诱变育种 | 第17页 |
| ·重组大肠杆菌发酵生产5-氨基乙酰丙酸 | 第17-20页 |
| ·5-氨基乙酰丙酸脱水酶的研究进展 | 第20-26页 |
| ·5-氨基乙酰丙酸脱水酶基因和结构的保守性 | 第20-21页 |
| ·5-氨基乙酰丙酸脱水酶催化反应机理和金属依赖性 | 第21-25页 |
| ·5-氨基乙酰丙酸脱水酶的抑制剂 | 第25-26页 |
| ·本课题拟研究内容 | 第26-27页 |
| 第二章 5-氨基乙酰丙酸脱水酶重组菌的构建 | 第27-46页 |
| ·引言 | 第27页 |
| ·材料与方法 | 第27-38页 |
| ·质粒与菌株 | 第27-30页 |
| ·培养基 | 第30-31页 |
| ·酶和试剂 | 第31页 |
| ·主要实验仪器 | 第31页 |
| ·质粒提取和转化 | 第31-32页 |
| ·质粒提取 | 第31页 |
| ·感受态细胞的制备和质粒转化 | 第31-32页 |
| ·DNA的纯化和回收 | 第32页 |
| ·DNA的检测 | 第32页 |
| ·5-氨基乙酰丙酸脱水酶(ALAD)基因hemB的克隆与重组质粒的构建 | 第32-34页 |
| ·CTAB法微量提取大肠杆菌Rosseta(DE3)基因组 | 第32-33页 |
| ·聚合酶链式反应获得5-氨基乙酰丙酸脱水酶的基因 | 第33页 |
| ·5-氨基乙酰丙酸脱水酶工程菌的构建 | 第33-34页 |
| ·菌体培养及酶蛋白表达 | 第34-35页 |
| ·测定方法 | 第35-38页 |
| ·大肠杆菌菌体浓度的测定 | 第35页 |
| ·大肠杆菌细胞超生破碎及胞内蛋白的提取 | 第35页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第35页 |
| ·SDS-PAGE | 第35-36页 |
| ·ALAD比活力的测定 | 第36页 |
| ·胆色素原(PBG)的分析方法 | 第36-38页 |
| ·结果与讨论 | 第38-45页 |
| ·E.coli Rosseta(DE3)基因组的提取 | 第38-39页 |
| ·聚合酶链式反应获得hemB | 第39页 |
| ·克隆载体的鉴定 | 第39-40页 |
| ·表达载体的鉴定 | 第40页 |
| ·E.coli Rosseta(DE3)-hemB基因序列分析 | 第40-44页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及SDS-PAGE | 第44-45页 |
| ·工程菌5-氨基乙酰丙酸脱水酶活性的初步检测 | 第45页 |
| ·小结 | 第45-46页 |
| 第三章 5-氨基乙酰丙酸脱水酶的诱导表达与纯化 | 第46-60页 |
| ·引言 | 第46页 |
| ·材料与方法 | 第46-49页 |
| ·实验菌株 | 第46页 |
| ·培养条件与样品处理 | 第46页 |
| ·主要试剂 | 第46-47页 |
| ·实验仪器 | 第47页 |
| ·诱导条件的优化 | 第47页 |
| ·5-氨基乙酰丙酸脱水酶的分离纯化 | 第47-49页 |
| ·试剂的配制 | 第47页 |
| ·亲和层析 | 第47-48页 |
| ·凝胶过滤层析 | 第48页 |
| ·冷冻干燥 | 第48-49页 |
| ·结果与讨论 | 第49-59页 |
| ·诱导条件的优化 | 第49-54页 |
| ·诱导时机的选择 | 第50-51页 |
| ·诱导剂浓度的选择 | 第51-52页 |
| ·诱导温度 | 第52-53页 |
| ·诱导后的培养时间 | 第53-54页 |
| ·5-氨基乙酰丙酸脱水酶的分离纯化 | 第54-59页 |
| ·亲和层析 | 第54-56页 |
| ·凝胶过滤层析 | 第56-57页 |
| ·冷冻干燥 | 第57页 |
| ·分离效果 | 第57-59页 |
| ·小结 | 第59-60页 |
| 第四章 5-氨基乙酰丙酸脱水酶酶学性质的研究 | 第60-76页 |
| ·引言 | 第60页 |
| ·材料与方法 | 第60-62页 |
| ·实验菌株 | 第60页 |
| ·培养条件与样品处理 | 第60页 |
| ·主要试剂 | 第60页 |
| ·实验仪器 | 第60页 |
| ·pH值对5-氨基乙酰丙酸脱水酶活力的影响 | 第60-61页 |
| ·温度对5-氨基乙酰丙酸脱水酶活力的影响 | 第61页 |
| ·金属离子和EDTA对5-氨基乙酰丙酸脱水酶活力的影响 | 第61页 |
| ·巯醇对5-氨基乙酰丙酸脱水酶活力的影响 | 第61页 |
| ·乙酰丙酸对5-氨基乙酰丙酸脱水酶活力的影响 | 第61-62页 |
| ·糖类对5-氨基乙酰丙酸脱水酶活力的影响 | 第62页 |
| ·5-氨基乙酰丙酸脱水酶K_m值的测定 | 第62页 |
| ·结果与讨论 | 第62-74页 |
| ·pH值对5-氨基乙酰丙酸脱水酶活力的影响 | 第62-63页 |
| ·温度对5-氨基乙酰丙酸脱水酶活力的影响 | 第63-64页 |
| ·金属离子和EDTA对5-氨基乙酰丙酸脱水酶活力的影响 | 第64-66页 |
| ·巯醇对5-氨基乙酰丙酸脱水酶活力的影响 | 第66-68页 |
| ·乙酰丙酸对5-氨基乙酰丙酸脱水酶活力的影响 | 第68页 |
| ·糖类对5-氨基乙酰丙酸脱水酶活力的影响 | 第68-73页 |
| ·5-氨基乙酰丙酸脱水酶动力学参数的确定 | 第73-74页 |
| ·小结 | 第74-76页 |
| 第五章 结论与展望 | 第76-78页 |
| ·结论 | 第76页 |
| ·展望 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
