| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-16页 |
| 第一部分 前言 | 第16-55页 |
| 1.副结核病的危害 | 第16-17页 |
| 2.副结核分枝杆菌的生物学特性 | 第17-18页 |
| 3.副结核分枝杆菌的分子生物学特征 | 第18-19页 |
| 4.野生动物与副结核病 | 第19-22页 |
| 5.副结核病的基因分型技术与分子流行病学 | 第22-27页 |
| 6.副结核分枝杆菌与克隆病 | 第27-28页 |
| 7.副结核分枝杆菌相关蛋白研究进展 | 第28-36页 |
| 8.副结核病的发病机制 | 第36-44页 |
| 9.副结核病的诊断 | 第44-50页 |
| 10.防治 | 第50-51页 |
| 11.核酸疫苗 | 第51-52页 |
| 12.热休克蛋白 | 第52-53页 |
| 13.热休克蛋白60 | 第53-54页 |
| 14.本研究的目的和意义 | 第54-55页 |
| 第二部分 实验内容 | 第55-108页 |
| 实验一 副结核分枝杆菌hsp65基因的克隆及序列分析 | 第55-70页 |
| 1 引言 | 第55页 |
| 2 材料与方法 | 第55-61页 |
| ·材料 | 第55-58页 |
| ·方法 | 第58-61页 |
| 3 结果 | 第61-66页 |
| ·副结核分枝杆菌染色体基因组DNA的提取 | 第61-62页 |
| ·目的基因的PCR扩增产物 | 第62页 |
| ·重组克隆的筛选及鉴定 | 第62-63页 |
| ·目的基因的序列测定与分析 | 第63-66页 |
| 4 讨论 | 第66-69页 |
| ·目的基因的选择 | 第66-67页 |
| ·PCR扩增及其它反应条件的优化 | 第67页 |
| ·基因克隆的载体 | 第67-68页 |
| ·外源DNA转化入宿主菌的原理和影响因素 | 第68页 |
| ·hsp65基因的核苷酸序列作为分枝杆菌进化指征的依据 | 第68-69页 |
| ·目的基因的序列分析 | 第69页 |
| 5 小结 | 第69-70页 |
| 实验二 副结核分枝杆菌hsp65基因的原核表达 | 第70-82页 |
| 1 引言 | 第70页 |
| 2 材料与方法 | 第70-76页 |
| ·材料 | 第70-73页 |
| ·方法 | 第73-76页 |
| 3 结果 | 第76-80页 |
| ·原核重组表达质粒的构建 | 第76页 |
| ·阳性重组表达质粒的鉴定 | 第76-78页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第78-79页 |
| ·Western blot分析 | 第79-80页 |
| 4 讨论 | 第80-81页 |
| ·融合表达和非融合表达 | 第80页 |
| ·表达系统 | 第80页 |
| ·目的蛋白的纯化与功能 | 第80-81页 |
| 5 小结 | 第81-82页 |
| 实验三 副结核分枝杆菌hsp65基因真核表达载体的构建及表达 | 第82-96页 |
| 1 引言 | 第82页 |
| 2 材料与方法 | 第82-88页 |
| ·材料 | 第82-85页 |
| ·方法 | 第85-88页 |
| 3 结果 | 第88-93页 |
| ·真核表达质粒的构建 | 第88页 |
| ·重组表达质粒的鉴定 | 第88页 |
| ·质粒的含量和纯度 | 第88页 |
| ·荧光抗体检测 | 第88-92页 |
| ·RT-PCR鉴定 | 第92-93页 |
| 4 讨论 | 第93-95页 |
| ·表达载体与转染方法的选择 | 第93-94页 |
| ·Hsp65抗原性的初步分析 | 第94页 |
| ·串联质粒的作用 | 第94-95页 |
| 5 小结 | 第95-96页 |
| 实验四 副结核分枝杆菌hsp65基因对实验动物的免疫研究 | 第96-108页 |
| 1 引言 | 第96页 |
| 2 材料与方法 | 第96-101页 |
| ·材料 | 第96-99页 |
| ·方法 | 第99-101页 |
| 3 结果 | 第101-104页 |
| ·重组表达质粒的纯度 | 第101页 |
| ·免疫小鼠淋巴细胞转化试验 | 第101-102页 |
| ·免疫小鼠CD3~+T、CD4~+T、CD8~+T细胞数量 | 第102-103页 |
| ·免疫小鼠血清中特异性抗体水平 | 第103页 |
| ·免疫小鼠IFN-γ的检测 | 第103页 |
| ·免疫豚鼠变态反应检测 | 第103-104页 |
| 4 讨论 | 第104-106页 |
| ·Hsp10蛋白 | 第104页 |
| ·免疫时加入普鲁卡因的作用 | 第104-105页 |
| ·免疫小鼠的细胞免疫应答 | 第105页 |
| ·免疫小鼠血清中特异性抗体水平 | 第105-106页 |
| ·免疫豚鼠的变态反应 | 第106页 |
| ·对今后研究的设想 | 第106页 |
| 5 小结 | 第106-108页 |
| 结论 | 第108-109页 |
| 参考文献 | 第109-126页 |
| 致谢 | 第126-128页 |
| 个人简介 | 第128页 |
