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兼具谷胱甘肽硫转移酶、谷胱甘肽过氧化物酶和超氧化物歧化酶活性的三功能酶

提要第1-10页
第一章 前言第10-28页
 1. 超氧化物歧化酶(SOD)第12-16页
   ·SOD 的结构第12-14页
   ·SOD 的结构稳定性第14页
   ·SOD 的催化机理第14-15页
   ·SOD 的反应速度常数第15-16页
 2. 谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)第16-24页
   ·GPX 的结构第16-19页
   ·GPX 的催化机制第19-20页
   ·GPX 的生物学效应第20-21页
   ·谷胱甘肽过氧化物酶的人工模拟第21-24页
     ·Ebselen 及其衍生物第21-22页
     ·硒化环糊精第22页
     ·硒代谷胱甘肽(GSeH)第22页
     ·硒化枯草杆菌蛋白酶第22-23页
     ·硒代谷胱甘肽硫转移酶模拟GPX第23-24页
     ·含硒抗体酶第24页
 3. 谷胱甘肽硫转移酶(GST)第24-25页
 4 GPX 和SOD 的小肽模拟物第25-27页
   ·GPX 的十五肽模拟物第26页
   ·SOD 的十七肽模拟物第26-27页
 5 本论文设计思想第27-28页
第二章 实验材料和方法第28-38页
 1 实验材料第28页
   ·主要试剂第28页
   ·质粒和菌株第28页
   ·主要仪器第28页
 2 实验方法第28-38页
   ·双功能小肽 DNA 序列的获得第28-30页
   ·pGEX-2T 重组质粒的构建第30-31页
     ·pGEX-2T 质粒的提取第30页
     ·小肽 DNA 及质粒的酶切,连接第30-31页
   ·重组质粒的转化第31-32页
     ·大肠杆菌 TG1 感受态细胞的制备(CaC12 法)第31页
     ·转化第31页
     ·重组子的鉴定第31-32页
   ·三功能酶的表达和纯化第32-33页
     ·重组表达载体转化大肠杆菌表达菌第32页
     ·目的蛋白质的表达第32页
     ·目的蛋白的纯化第32-33页
   ·目的蛋白中铜离子的引入和硒化学修饰第33-35页
     ·目的蛋白表达的同时引入铜离子第33页
     ·目的蛋白的硒化学修饰第33-34页
     ·目的蛋白硒化后引入铜离子第34-35页
   ·蛋白质含量的测定第35页
   ·重组蛋白分子量的测定第35页
   ·重组蛋白硒含量的测定第35页
   ·重组蛋白铜含量的测定第35页
   ·GSH 结合实验第35页
   ·重组蛋白的活性测定第35-38页
     ·GPX 活力的测定第36页
     ·SOD 活力的测定第36-38页
第三章 实验结果与讨论第38-47页
 1. 结果第38-45页
   ·小肽双功能模拟酶 DNA 的设计第38-39页
   ·重组子的构建第39-40页
   ·重组蛋白的表达和纯化第40-43页
   ·目的蛋白中铜离子的引入及硒化学修饰第43-44页
   ·目的蛋白的活性测定第44-45页
 2. 讨论第45-47页
总结第47-48页
参考文献第48-52页
中文摘要第52-54页
英文摘要第54-56页
致谢第56页

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