提要 | 第1-10页 |
第一章 前言 | 第10-28页 |
1. 超氧化物歧化酶(SOD) | 第12-16页 |
·SOD 的结构 | 第12-14页 |
·SOD 的结构稳定性 | 第14页 |
·SOD 的催化机理 | 第14-15页 |
·SOD 的反应速度常数 | 第15-16页 |
2. 谷胱甘肽过氧化物酶(GPX) | 第16-24页 |
·GPX 的结构 | 第16-19页 |
·GPX 的催化机制 | 第19-20页 |
·GPX 的生物学效应 | 第20-21页 |
·谷胱甘肽过氧化物酶的人工模拟 | 第21-24页 |
·Ebselen 及其衍生物 | 第21-22页 |
·硒化环糊精 | 第22页 |
·硒代谷胱甘肽(GSeH) | 第22页 |
·硒化枯草杆菌蛋白酶 | 第22-23页 |
·硒代谷胱甘肽硫转移酶模拟GPX | 第23-24页 |
·含硒抗体酶 | 第24页 |
3. 谷胱甘肽硫转移酶(GST) | 第24-25页 |
4 GPX 和SOD 的小肽模拟物 | 第25-27页 |
·GPX 的十五肽模拟物 | 第26页 |
·SOD 的十七肽模拟物 | 第26-27页 |
5 本论文设计思想 | 第27-28页 |
第二章 实验材料和方法 | 第28-38页 |
1 实验材料 | 第28页 |
·主要试剂 | 第28页 |
·质粒和菌株 | 第28页 |
·主要仪器 | 第28页 |
2 实验方法 | 第28-38页 |
·双功能小肽 DNA 序列的获得 | 第28-30页 |
·pGEX-2T 重组质粒的构建 | 第30-31页 |
·pGEX-2T 质粒的提取 | 第30页 |
·小肽 DNA 及质粒的酶切,连接 | 第30-31页 |
·重组质粒的转化 | 第31-32页 |
·大肠杆菌 TG1 感受态细胞的制备(CaC12 法) | 第31页 |
·转化 | 第31页 |
·重组子的鉴定 | 第31-32页 |
·三功能酶的表达和纯化 | 第32-33页 |
·重组表达载体转化大肠杆菌表达菌 | 第32页 |
·目的蛋白质的表达 | 第32页 |
·目的蛋白的纯化 | 第32-33页 |
·目的蛋白中铜离子的引入和硒化学修饰 | 第33-35页 |
·目的蛋白表达的同时引入铜离子 | 第33页 |
·目的蛋白的硒化学修饰 | 第33-34页 |
·目的蛋白硒化后引入铜离子 | 第34-35页 |
·蛋白质含量的测定 | 第35页 |
·重组蛋白分子量的测定 | 第35页 |
·重组蛋白硒含量的测定 | 第35页 |
·重组蛋白铜含量的测定 | 第35页 |
·GSH 结合实验 | 第35页 |
·重组蛋白的活性测定 | 第35-38页 |
·GPX 活力的测定 | 第36页 |
·SOD 活力的测定 | 第36-38页 |
第三章 实验结果与讨论 | 第38-47页 |
1. 结果 | 第38-45页 |
·小肽双功能模拟酶 DNA 的设计 | 第38-39页 |
·重组子的构建 | 第39-40页 |
·重组蛋白的表达和纯化 | 第40-43页 |
·目的蛋白中铜离子的引入及硒化学修饰 | 第43-44页 |
·目的蛋白的活性测定 | 第44-45页 |
2. 讨论 | 第45-47页 |
总结 | 第47-48页 |
参考文献 | 第48-52页 |
中文摘要 | 第52-54页 |
英文摘要 | 第54-56页 |
致谢 | 第56页 |