| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-14页 |
| 英文缩写符号及中英对照表 | 第14-15页 |
| 第一部分 文献综述 | 第15-41页 |
| 1 阳离子转运与植物的耐逆性 | 第15-24页 |
| ·Na~~+/H~+ 逆向转运蛋白与植物的耐盐性 | 第15-19页 |
| ·Na~+-ATPase 与植物的耐盐性 | 第19-20页 |
| ·Ca~(2+)/H~+ 逆向转运蛋白与植物的耐逆性 | 第20-21页 |
| ·K~+/H~+ 逆向转运蛋白与K~+ 平衡 | 第21-22页 |
| ·Na~+ 内流与K~+ 吸收 | 第22-24页 |
| ·其它Cation/H~+ 逆向转运蛋白 | 第24页 |
| ·小结 | 第24页 |
| 2 阳离子氯离子共转运体 | 第24-27页 |
| ·动物中的阳离子氯离子共转运体 | 第24-27页 |
| ·植物中的阳离子氯离子共转运体 | 第27页 |
| 3 盐芥——新型耐盐模式植物 | 第27-31页 |
| ·盐芥作为新型耐盐模式植物的优势 | 第28页 |
| ·盐芥耐盐的生理及分子生化研究 | 第28-31页 |
| ·盐芥作为新型耐盐模式植物以后将要重点开展的研究 | 第31页 |
| 4 MicroRNA 研究进展 | 第31-37页 |
| ·MicroRNA 产生过程 | 第31-34页 |
| ·MicroRNA 的作用机制 | 第34页 |
| ·植物中保守的miRNA | 第34-35页 |
| ·植物miRNA 的表达 | 第35-36页 |
| ·耐逆相关的miRNA | 第36-37页 |
| 5 脯氨酸与植物的耐逆性 | 第37-41页 |
| ·脯氨酸的功能 | 第38页 |
| ·植物体中脯氨酸的合成和降解途径 | 第38-39页 |
| ·脯氨酸合成的关键酶—Δ1-二氢吡咯-5-羧酸合成酶 | 第39页 |
| ·SiRNA 调控拟南芥中脯氨酸的降解 | 第39-41页 |
| 第二部分 实验论文 | 第41-100页 |
| 第一章 水稻KCC 基因的功能研究 | 第41-79页 |
| 一、实验材料、仪器及方法 | 第41-58页 |
| 1 | 第41-44页 |
| ·植物材料 | 第41页 |
| ·菌种及质粒 | 第41页 |
| ·引物序列 | 第41-42页 |
| ·酶及化学试剂 | 第42页 |
| ·主要仪器设备 | 第42-43页 |
| ·培养基 | 第43-44页 |
| ·质粒提取液 | 第44页 |
| 2 实验方法 | 第44-58页 |
| ·Trizol 试剂提取植物总RNA | 第44页 |
| ·反转录PCR 扩增 | 第44-45页 |
| ·PCR 产物与T-载体的连接 | 第45-46页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备及转化 | 第46页 |
| ·质粒的提取 | 第46-47页 |
| ·PCR 及酶切验证水稻KCC 基因 | 第47页 |
| ·测序验证水稻KCC 基因 | 第47页 |
| ·水稻KCC 基因5’及3’全序列的拼接 | 第47页 |
| ·水稻KCC 基因植物表达载体的构建 | 第47-48页 |
| ·根癌农杆菌AGL1 感受态的制备及转化 | 第48-49页 |
| ·农杆菌介导的水稻的转化 | 第49-50页 |
| ·转基因水稻的分子检测 | 第50页 |
| ·植物基因组DNA 的提取和Southern 杂交 | 第50-52页 |
| ·转基因水稻的PCR 检测 | 第52-53页 |
| ·植物总RNA 的提取 | 第53-54页 |
| ·不同处理条件下水稻KCC 基因以及转基因水稻KCC 基因表达的Real-time PCR 分析 | 第54-56页 |
| ·转基因水稻的遗传分析 | 第56页 |
| ·过量表达及基因沉默水稻耐逆性分析 | 第56-58页 |
| 二、实验结果 | 第58-76页 |
| 1 水稻KCC 蛋白系统谱系分析 | 第58页 |
| 2 水稻KCC 蛋白Clustalx 分析及蛋白质结构域分析 | 第58-60页 |
| 3 水稻KCC 蛋白跨膜分析 | 第60页 |
| 4 水稻KCC 基因在不同胁迫条件下的特异性表达分析 | 第60-62页 |
| 5 水稻KCC 基因在水稻不同组织中的表达分析 | 第62页 |
| 6 水稻KCC 基因的克隆 | 第62-63页 |
| 7 水稻KCC 基因的测序及拼接 | 第63-65页 |
| ·水稻KCC 基因5’片段的测序及拼接 | 第63-64页 |
| ·水稻KCC 基因的测序及全长序列的拼接 | 第64-65页 |
| 8 植物表达载体的构建 | 第65-66页 |
| ·过量表达载体 | 第65页 |
| ·GFP 定位载体 | 第65-66页 |
| ·基因沉默载体 | 第66页 |
| 9 农杆菌的转化 | 第66-67页 |
| 10 转基因水稻的遗传分析 | 第67-68页 |
| ·水稻的转化及转基因水稻的筛选 | 第67页 |
| ·转基因纯系植株的获得 | 第67-68页 |
| ·水稻突变体的获得 | 第68页 |
| 11 转基因水稻的分子检测 | 第68-71页 |
| ·过量表达OsKCC 基因水稻的PCR 鉴定 | 第68-69页 |
| ·水稻KCC 蛋白GFP 定位水稻的PCR 鉴定 | 第69页 |
| ·基因沉默OsKCC 水稻的PCR 鉴定 | 第69页 |
| ·转基因水稻的Southern 杂交鉴定 | 第69-70页 |
| ·转基因水稻的实时定量PCR 表达分析 | 第70-71页 |
| 12 水稻KCC 蛋白的定位 | 第71页 |
| 13 转基因水稻的耐盐性鉴定 | 第71-76页 |
| ·NaCl 及KCl 对转基因水稻萌发力的影响 | 第71页 |
| ·NaCl 及KCl 对转基因水稻生长的影响 | 第71-72页 |
| ·盐处理对过量表达、基因沉默与野生型植株干、鲜重的影响 | 第72-74页 |
| ·过量表达、基因沉默植株与野生型植株中Na~+、K~+ 含量变化情况 | 第74-75页 |
| ·过量表达、基因沉默植株与野生型植株中K~+、Na~+ 相对含量变化情况 | 第75-76页 |
| ·过量表达、基因沉默植株与野生型植株中Cl- 含量变化情况 | 第76页 |
| 三、讨论 | 第76-79页 |
| 第二章 盐芥小RNA 库的构建及其功能研究 | 第79-100页 |
| 一、实验材料、仪器及方法 | 第79-87页 |
| 1 实验材料、仪器 | 第79-80页 |
| ·植物材料处理 | 第79页 |
| ·质粒及菌种 | 第79页 |
| ·化学试剂、主要仪器设备 | 第79页 |
| ·试剂盒 | 第79页 |
| ·引物序列 | 第79-80页 |
| 2 实验方法 | 第80-87页 |
| ·Trizol 试剂提取植物总RNA 及异硫氰酸胍法提取总RNA | 第80页 |
| ·小分子RNA 的提取 | 第80页 |
| ·小分子RNA 的聚丙烯酰胺凝胶分离 | 第80页 |
| ·小分子RNA 的回收 | 第80-81页 |
| ·小分子RNA 的克隆 | 第81-86页 |
| ·反转录PCR 扩增及实时定量PCR | 第86页 |
| ·脯氨酸含量的测定 | 第86-87页 |
| 二、实验结果 | 第87-98页 |
| 1 盐芥小RNA 的提取及分离 | 第87页 |
| 2 盐芥小RNA 的克隆 | 第87-88页 |
| 3 小RNA 的测序及数据分析 | 第88-93页 |
| ·不同大小的小RNA 出现的次数 | 第88-89页 |
| ·小RNA 第一个碱基出现的频率 | 第89页 |
| ·不同重复数的小RNA 的出现频率 | 第89页 |
| ·MiRNA 前体的预测 | 第89-90页 |
| ·MiRNA target 的预测 | 第90-92页 |
| ·通过Blast 分析发现保守的miRNA | 第92-93页 |
| 4 MiRNA 沉默载体的构建 | 第93-94页 |
| ·拟南芥IP51 基因的克隆及沉默载体的构建 | 第93-94页 |
| ·经过改造的沉默载体与相应的miRNA 的互补结构 | 第94页 |
| 5 盐芥中不存在调控脯氨酸降解的SiRNA | 第94页 |
| 6 盐芥ThSR05 和ThP5CDH 间基因组序列的克隆 | 第94-95页 |
| 7 盐芥ThSR05 和ThP5CDH 基因3’polyA 位置的鉴定 | 第95-96页 |
| 8 不同胁迫处理对盐芥中脯氨酸含量的影响 | 第96-97页 |
| 9 不同胁迫处理对盐芥中ThP5CS、ThP5CDH 和ThSR05 基因含量的影响 | 第97-98页 |
| 三、讨论 | 第98-100页 |
| 图版 | 第100-105页 |
| 参考文献 | 第105-116页 |
| 致谢 | 第116-117页 |
| 攻读博士期间发表论文 | 第117页 |
