| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 缩略表 | 第8-9页 |
| 第一章 引言 | 第9-28页 |
| ·镁离子的生化特性及生理作用 | 第9-12页 |
| ·镁离子的化学性质 | 第9页 |
| ·镁离子转运研究中的常见测量方法 | 第9-11页 |
| ·镁离子的生理作用 | 第11-12页 |
| ·镁离子转运研究的现状 | 第12-16页 |
| ·原核生物中镁离子的转运 | 第12-14页 |
| ·真核生物中镁离子的转运 | 第14页 |
| ·高等植物中镁离子的转运 | 第14-16页 |
| ·小立碗藓是植物研究离子转运的新模式植物 | 第16-24页 |
| ·小立碗藓简介 | 第16-17页 |
| ·小立碗藓生活史 | 第17页 |
| ·小立碗藓的培养方法 | 第17-18页 |
| ·小立碗藓的研究历史 | 第18-19页 |
| ·小立碗藓基因打靶的基本原理 | 第19-20页 |
| ·基因打靶载体的类型 | 第20-21页 |
| ·小立碗藓基因敲除的方法 | 第21-24页 |
| ·小立碗藓高效同源重组的原因 | 第24页 |
| ·小立碗藓中离子转运的研究进展 | 第24-25页 |
| ·学位论文的立题依据和意义 | 第25-28页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第28-48页 |
| ·实验材料 | 第28-31页 |
| ·植物材料 | 第28页 |
| ·细菌菌株 | 第28页 |
| ·试剂 | 第28页 |
| ·培养基 | 第28-31页 |
| ·引物及测序 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-48页 |
| ·小立碗藓的培养 | 第31-32页 |
| ·小立碗藓RNA的提取 | 第32页 |
| ·小立碗藓基因组总DNA的提取 | 第32-34页 |
| ·半定量PCR | 第34-35页 |
| ·实验材料的选取 | 第34页 |
| ·半定量PCR | 第34-35页 |
| ·mm281互补实验 | 第35-36页 |
| ·pTrc99A-PpMGT载体构建 | 第35页 |
| ·细菌互补实验 | 第35-36页 |
| ·镁离子荧光指示剂测量细胞内游离镁离子浓度 | 第36-37页 |
| ·细菌处理 | 第36页 |
| ·荧光分光光度计测量荧光强度 | 第36-37页 |
| ·镁离子浓度计算 | 第37页 |
| ·非洲爪蟾卵母细胞中表达PpMGT | 第37-38页 |
| ·用于capping的pGEMHE-PpMGT载体构建 | 第37-38页 |
| ·PpMGT体外转录成mRNA | 第38页 |
| ·mRNA注入爪蟾卵母细胞表达外源蛋白 | 第38页 |
| ·酵母双杂交筛选 | 第38-44页 |
| ·酵母双杂的pGBKT7-PPMGT(BD)载体构建 | 第38页 |
| ·诱饵基因转化筛库宿主菌AH109 | 第38-40页 |
| ·含Bait基因质粒的AH109保种 | 第40页 |
| ·酵母菌落PCR | 第40页 |
| ·阳性克隆保种 | 第40页 |
| ·Bait基因的自激活检测 | 第40-41页 |
| ·诱饵基因筛库 | 第41-42页 |
| ·抽提酵母质粒 | 第42-43页 |
| ·酵母质粒的扩增 | 第43-44页 |
| ·大肠杆菌电转感受态制备 | 第43页 |
| ·电转 | 第43-44页 |
| ·基因枪法构建小立碗藓敲除体 | 第44-48页 |
| ·用于基因打靶的PTN182-PpMGT-gfp载体构建 | 第44-45页 |
| ·用于基因打靶的PTN182-PpMGT-GUS载体构建 | 第45-46页 |
| ·小立碗藓待敲除材料选择 | 第46页 |
| ·金粉准备 | 第46页 |
| ·DNA微子弹的制备 | 第46-47页 |
| ·基因枪操作 | 第47-48页 |
| 第三章 结果和分析 | 第48-63页 |
| ·小立碗藓镁离子转运体(PpMGT)基因的分离与克隆 | 第48-50页 |
| ·PpMGT基因序列的获得 | 第48-50页 |
| ·PpMGT基因克隆 | 第50页 |
| ·PpMGT载体的构建 | 第50-51页 |
| ·PpMGT基因的表达模式及功能的初步研究 | 第51-63页 |
| ·PpMGT基因的表达模式分析 | 第51-52页 |
| ·PpMGT功能互补分析 | 第52-54页 |
| ·pH对PpMGT镁离子吸收功能的影响 | 第54-55页 |
| ·其他二价金属离子对PpMGT转运镁离子的影响 | 第55-57页 |
| ·镁离子吸收的动态荧光变化 | 第57-60页 |
| ·双电极电压钳未发现PpMGT介导的明显电信号 | 第60页 |
| ·PpMGT互作调节因子的筛选有待深入 | 第60-61页 |
| ·小立碗藓突变体筛选及亚细胞定位研究有待进行 | 第61-63页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第63-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
