| 中文摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一章 某猪场爆发猪瘟的诊断 | 第11-27页 |
| 1 材料 | 第11-12页 |
| ·病例 | 第11页 |
| ·试剂 | 第11页 |
| ·仪器 | 第11-12页 |
| ·引物 | 第12页 |
| 2 发病经过及诊断 | 第12-18页 |
| ·发病情况 | 第12页 |
| ·临床诊断 | 第12-13页 |
| ·病理剖检变化 | 第13页 |
| ·实验室诊断 | 第13-18页 |
| ·快速金标检测卡诊断 | 第13-14页 |
| ·兔体交叉免疫试验 | 第14页 |
| ·免疫荧光抗体试验 | 第14页 |
| ·RT-PCR反转录聚合酶链式反应诊断 | 第14-18页 |
| 3.结果 | 第18-22页 |
| ·临床诊断结果 | 第18页 |
| ·临床病理剖解变化的结果 | 第18页 |
| ·实验室诊断结果 | 第18-22页 |
| ·快速金标检测卡诊断结果 | 第18-19页 |
| ·免疫荧光抗体试验结果 | 第19页 |
| ·兔体交互免疫试验结果 | 第19-20页 |
| ·RT-PCR产物电泳检测结果 | 第20页 |
| ·PCR扩增的目的DNA测序结果 | 第20-22页 |
| 4 讨论 | 第22-26页 |
| 5 结论 | 第26-27页 |
| 第二章 猪瘟病毒E2基因的克隆及序列分析 | 第27-44页 |
| 1 材料 | 第27-29页 |
| ·病料 | 第27页 |
| ·试剂 | 第27-28页 |
| ·仪器 | 第28页 |
| ·载体 | 第28页 |
| ·菌株 | 第28页 |
| ·引物 | 第28-29页 |
| 2 方法 | 第29-36页 |
| ·病料来源 | 第29页 |
| ·总RNA的提取 | 第29页 |
| ·反转录(RT) | 第29-30页 |
| ·PCR聚合酶链式反应 | 第30-32页 |
| ·PCR反应体系 | 第30页 |
| ·PCR产物检测 | 第30页 |
| ·PCR产物回收纯化 | 第30-31页 |
| ·目的DNA片段加A及回收纯化 | 第31-32页 |
| ·目的基因的连接与转化 | 第32页 |
| ·目的基因的连接 | 第32页 |
| ·目的基因的转化 | 第32页 |
| ·菌落PCR及阳性菌落的培养 | 第32-33页 |
| ·菌落PCR | 第32-33页 |
| ·阳性菌落的培养 | 第33页 |
| ·重组质粒的抽提 | 第33-34页 |
| ·质粒的酶切鉴定 | 第34-35页 |
| ·重组质粒的DNA序列测定 | 第35-36页 |
| 3 实验结果 | 第36-41页 |
| ·RT-PCR产物电泳检测结果 | 第36页 |
| ·菌落PCR结果 | 第36-37页 |
| ·重组质粒酶切鉴定结果 | 第37页 |
| ·序列测定结果 | 第37-39页 |
| ·遗传演化关系分析结果 | 第39-41页 |
| 4 讨论 | 第41-43页 |
| 5 结论 | 第43-44页 |
| 第三章 猪瘟病毒E2基因表达载体的构建 | 第44-61页 |
| 1 试验材料 | 第45页 |
| ·菌种和质粒 | 第45页 |
| ·主要试剂 | 第45页 |
| ·引物 | 第45页 |
| 2 方法 | 第45-55页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第45-50页 |
| ·原核表达载体的选择及构建路线 | 第45-46页 |
| ·目的基因(pMD18-T-E2)的分离和纯化 | 第46页 |
| ·质粒pET32a(+)的制备 | 第46页 |
| ·质粒pET32a(+)的提取 | 第46-47页 |
| ·质粒pET32a(+)的酶切 | 第47-48页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳、回收 | 第48页 |
| ·连接反应 | 第48页 |
| ·连接产物的转化 | 第48-49页 |
| ·阳性细菌的筛选及抽提质粒 | 第49页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第49页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第49页 |
| ·重组质粒的测序 | 第49-50页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第50-55页 |
| ·真核表达载体的选择及构建路线 | 第50-51页 |
| ·目的基因(E2)的获得 | 第51页 |
| ·pcDNA3.1(+)质粒菌的培养 | 第51页 |
| ·质粒pcDNA3.1(+)菌的抽提 | 第51-52页 |
| ·质粒pcDNA3.1(+)的双酶切 | 第52-53页 |
| ·载体DNA的电泳及回收 | 第53页 |
| ·连接反应 | 第53页 |
| ·转化 | 第53-54页 |
| ·阳性细菌的筛选及抽提质粒 | 第54页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第54页 |
| ·重组质粒的DNA序列测定 | 第54-55页 |
| 3 结果 | 第55-58页 |
| ·酶切鉴定结果 | 第55-56页 |
| ·原核表达载体酶切鉴定结果 | 第55页 |
| ·真核表达载体酶切鉴定结果 | 第55-56页 |
| ·PCR鉴定结果 | 第56-57页 |
| ·原核载体PCR产物凝胶电泳检测结果 | 第56页 |
| ·真核表达载体菌落PCR结果 | 第56-57页 |
| ·序列测定结果 | 第57-58页 |
| 4 讨论 | 第58-60页 |
| 5 结论 | 第60-61页 |
| 第四章 猪瘟的诊断技术研究进展和猪瘟疫苗的研究进展 | 第61-84页 |
| 1 猪瘟病毒研究进展 | 第61-69页 |
| ·病原 | 第62-63页 |
| ·猪瘟病毒的基因结构 | 第63-64页 |
| ·猪瘟病毒基因的编码蛋白产物 | 第64-69页 |
| ·结构蛋白 | 第64-67页 |
| ·非结构蛋白 | 第67-69页 |
| 2 猪瘟诊断技术研究进展 | 第69-78页 |
| ·临床诊断 | 第69-70页 |
| ·动物接种试验 | 第70-71页 |
| ·猪体回归感染试验 | 第70页 |
| ·家兔交互免疫试验 | 第70-71页 |
| ·病毒分离鉴定 | 第71页 |
| ·血清学诊断方法 | 第71-74页 |
| ·琼脂扩散试验(AGP) | 第71页 |
| ·荧光抗体试验(FAT) | 第71页 |
| ·间接血凝试验(IHA) | 第71-72页 |
| ·中和试验 | 第72-73页 |
| ·酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第73-74页 |
| ·免疫胶体金技术(IGSS) | 第74页 |
| ·金标卡诊断 | 第74页 |
| ·细胞检查法 | 第74-75页 |
| ·新城疫病毒强化法(Exaltation of NDV) | 第74-75页 |
| ·髓细胞检查法(medullogram test) | 第75页 |
| ·免疫酶测定技术或酶标记抗体诊断法 | 第75页 |
| ·单克隆抗体鉴别诊断 | 第75-76页 |
| ·单克隆抗体免疫过氧化物酶试验鉴别瘟病毒属病毒 | 第76页 |
| ·分子生物学方法诊断 | 第76-78页 |
| ·反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术诊断 | 第77页 |
| ·核酸探针技术诊断 | 第77-78页 |
| ·基因芯片技术诊断 | 第78页 |
| 3 猪瘟疫苗的研究进展 | 第78-84页 |
| ·传统疫苗 | 第78-79页 |
| ·猪瘟病毒新型疫苗的研制 | 第79-84页 |
| ·亚单位疫苗 | 第79页 |
| ·基因缺失疫苗 | 第79-80页 |
| ·活载体重组疫苗 | 第80-81页 |
| ·基因重组活疫苗 | 第81页 |
| ·核酸疫苗(DNA疫苗) | 第81-82页 |
| ·标记疫苗 | 第82-84页 |
| 参考文献 | 第84-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 本人在读期间发表的论文 | 第88-89页 |
