| 目录 | 第1-6页 |
| 中文摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第一章 猪繁殖与呼吸综合征病毒贵州分离株ORF5基因的克隆 | 第10-30页 |
| 1 实验材料 | 第10-16页 |
| ·病毒 | 第10页 |
| ·细胞 | 第10页 |
| ·载体 | 第10-11页 |
| ·菌株 | 第11页 |
| ·引物 | 第11页 |
| ·主要试剂: | 第11-12页 |
| ·主要仪器设备和器材: | 第12-13页 |
| ·主要溶液的配制 | 第13-16页 |
| 2 实验方法 | 第16-23页 |
| ·细胞接毒 | 第16页 |
| ·总RNA的提取 | 第16-17页 |
| ·RT-PCR反应 | 第17页 |
| ·目的DNA的电泳检测 | 第17-18页 |
| ·DNA片段的回收和纯化 | 第18页 |
| ·目的DNA片段加A及回收纯化 | 第18-19页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第19页 |
| ·连接反应 | 第19页 |
| ·连接产物的转化 | 第19-20页 |
| ·菌落PCR及阳性菌落的培养 | 第20-21页 |
| ·质粒的抽提 | 第21-22页 |
| ·质粒的酶切鉴定 | 第22页 |
| ·重组质粒的DNA序列测定 | 第22页 |
| ·同源性比较分析 | 第22-23页 |
| 3 结果 | 第23-27页 |
| ·RT-PCR产物电泳检测结果 | 第23页 |
| ·菌落PCR结果 | 第23-24页 |
| ·重组质粒酶切鉴定结果 | 第24页 |
| ·序列测定结果 | 第24-25页 |
| ·核苷酸及氨基酸序列同源性分析 | 第25-27页 |
| 4 讨论 | 第27-29页 |
| 5 结论 | 第29-30页 |
| 第二章 PRRSV贵州分离株ORF5基因表达载体的构建 | 第30-46页 |
| 1 实验材料 | 第30-31页 |
| ·菌种和质粒 | 第30-31页 |
| ·主要试剂 | 第31页 |
| 2 方法 | 第31-41页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第31-36页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第36-41页 |
| 3 结果 | 第41-43页 |
| ·原核表达重组质粒PET-ORF5的鉴定结果 | 第41页 |
| ·真核表达重组质粒pcDNA-ORF5的鉴定结果 | 第41-43页 |
| 4 讨论 | 第43-45页 |
| 5 结论 | 第45-46页 |
| 第三章 PRRSV贵州流行株ORF5基因变异的研究 | 第46-71页 |
| 1 实验材料 | 第46-47页 |
| ·试剂 | 第46页 |
| ·引物 | 第46-47页 |
| 2 方法 | 第47-52页 |
| ·实验路线 | 第47页 |
| ·病料的采集及处理 | 第47-48页 |
| ·金标卡检测 | 第48-49页 |
| ·ELISA检测 | 第49-50页 |
| ·病料总RNA的提取 | 第50页 |
| ·RT-PCR检测 | 第50-51页 |
| ·序列测定 | 第51页 |
| ·序列分析及比较 | 第51页 |
| ·遗传进化树的分析 | 第51-52页 |
| 3 结果 | 第52-68页 |
| ·金标卡、ELISA和RT-PCR检测结果 | 第52-53页 |
| ·部分病料ORF5基因扩增结果 | 第53-54页 |
| ·ORF5基因核苷酸序列测定对比结果 | 第54-60页 |
| ·氨基酸序列比较结果 | 第60-63页 |
| ·同源性比较分析结果 | 第63-66页 |
| ·遗传进化树分析 | 第66-68页 |
| 4 讨论 | 第68-70页 |
| 5 结论 | 第70-71页 |
| 第四章 PRRSV ORF5基因变异及其疫苗的研究进展 | 第71-85页 |
| 1 PRRSV概述 | 第71-72页 |
| 2 ORF5基因的蛋白特性和功能 | 第72-73页 |
| ·ORF5基因的蛋白特性 | 第72页 |
| ·GP5蛋白的生物学功能 | 第72-73页 |
| 3 ORF5基因遗传变异的研究 | 第73-75页 |
| ·非同型毒株间GP5的同源性比较 | 第74页 |
| ·同型毒株间ORF5的遗传变异 | 第74页 |
| ·国内流行毒株之间的序列比较 | 第74-75页 |
| 4 猪繁殖与呼吸综合征的防制 | 第75-85页 |
| ·疫苗接种 | 第76-82页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合其它综合防制措施 | 第82-85页 |
| 参考文献 | 第85-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 本人在读期间发表的论文 | 第90-92页 |
