| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-13页 |
| 1 绪论 | 第13-25页 |
| ·问题的提出及研究意义 | 第13-16页 |
| ·问题的提出 | 第13-15页 |
| ·研究的意义 | 第15-16页 |
| ·国内外研究现状 | 第16-23页 |
| ·造血和造血干细胞(hematopoietic stem cell, HSC) | 第16-18页 |
| ·巨核细胞生成 | 第18-20页 |
| ·动员人外周血CD34~+细胞 | 第20-21页 |
| ·RBM15 | 第21页 |
| ·MKL1 | 第21-22页 |
| ·RBM15-MKL1 | 第22-23页 |
| ·本文研究的目的和研究内容 | 第23-25页 |
| 2 巨核细胞体外两阶段分化模型的建立 | 第25-43页 |
| ·引言 | 第25页 |
| ·实验材料 | 第25-27页 |
| ·实验细胞 | 第25-26页 |
| ·主要仪器设备及耗材 | 第26页 |
| ·主要实验试剂 | 第26-27页 |
| ·主要试剂的配制 | 第27页 |
| ·实验方法 | 第27-30页 |
| ·动员人外周血CD34~+细胞收集 | 第27页 |
| ·细胞培养 | 第27-29页 |
| ·血细胞涂片 | 第29页 |
| ·流式细胞仪检测 | 第29-30页 |
| ·实验结果 | 第30-39页 |
| ·动员人外周血CD34~+细胞收集 | 第30页 |
| ·PB CD34~+细胞在Cocktail 和CC100 培养液中的增殖情况 | 第30-33页 |
| ·CC100 两阶段法培养条件的优化 | 第33-34页 |
| ·Cocktail 两阶段法培养条件的优化 | 第34-35页 |
| ·细胞形态 | 第35-36页 |
| ·优化后条件与常用方法分化效率的比较 | 第36-39页 |
| ·分析讨论 | 第39-42页 |
| ·本章小结 | 第42-43页 |
| 3 MKL1 基因在巨核细胞分化中的表达 | 第43-60页 |
| ·引言 | 第43页 |
| ·实验材料 | 第43-44页 |
| ·主要仪器设备及耗材 | 第43-44页 |
| ·主要实验试剂 | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44-49页 |
| ·不同成熟阶段CD41+细胞培养、收集 | 第44-46页 |
| ·RNA 提取、纯化和反转录 | 第46-47页 |
| ·qPCR 检测基因表达 | 第47-49页 |
| ·实验结果 | 第49-55页 |
| ·不同成熟阶段细胞分选 | 第49-51页 |
| ·MKL1 基因表达情况 | 第51-53页 |
| ·GATA1 和NF-E2 基因表达情况 | 第53-55页 |
| ·分析讨论 | 第55-58页 |
| ·细胞分选方法 | 第55-56页 |
| ·分选细胞的成熟程度 | 第56-57页 |
| ·MKL1 基因表达 | 第57-58页 |
| ·本章小结 | 第58-60页 |
| 4 MKL1 外源表达对巨核细胞生成的影响 | 第60-74页 |
| ·引言 | 第60页 |
| ·实验材料 | 第60-61页 |
| ·主要仪器设备及耗材 | 第60页 |
| ·主要实验试剂 | 第60-61页 |
| ·主要试剂的配制 | 第61页 |
| ·实验方法 | 第61-65页 |
| ·慢病毒载体的构建、包装 | 第61-63页 |
| ·慢病毒感染PB CD34~+细胞 | 第63页 |
| ·Western Blot | 第63-64页 |
| ·流式细胞仪检测 | 第64-65页 |
| ·实验结果 | 第65-68页 |
| ·慢病毒滴度 | 第65-66页 |
| ·目的基因在被感染细胞中的表达情况 | 第66页 |
| ·外源MKL1 表达对巨核细胞分化和成熟的影响 | 第66-68页 |
| ·分析讨论 | 第68-73页 |
| ·慢病毒载体的构建 | 第68-70页 |
| ·外源MKL1 表达对PB CD34~+来源巨核细胞生成的影响 | 第70-72页 |
| ·MKL1 与其它细胞的多倍体化 | 第72-73页 |
| ·本章小结 | 第73-74页 |
| 5 MKL1 基因敲除对小鼠巨核细胞生成的影响 | 第74-85页 |
| ·引言 | 第74页 |
| ·实验材料 | 第74-75页 |
| ·实验动物 | 第74页 |
| ·主要仪器设备及耗材 | 第74页 |
| ·主要实验试剂 | 第74-75页 |
| ·实验方法 | 第75-77页 |
| ·MKL1 基因敲除小鼠模型的构建 | 第75页 |
| ·小鼠基因型鉴定 | 第75-77页 |
| ·骨髓细胞的分离 | 第77页 |
| ·外周血细胞计数 | 第77页 |
| ·实验结果 | 第77-81页 |
| ·外周血细胞计数 | 第77-78页 |
| ·MKL1 基因敲除对骨髓中巨核细胞生成的影响 | 第78-81页 |
| ·分析讨论 | 第81-83页 |
| ·本章小结 | 第83-85页 |
| 6 结论与展望 | 第85-88页 |
| ·主要结论 | 第85-86页 |
| ·后续工作展望 | 第86-88页 |
| ·MKL1 调控巨核细胞成熟的机理 | 第86-87页 |
| ·RBM15-MKL1 融合蛋白功能研究 | 第87页 |
| ·MKL1 是否对其它细胞多倍体化具有调控作用 | 第87-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-100页 |
| 附录 | 第100页 |
