| 中文摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 第一部分 文献综述及选题目的和意义 | 第11-17页 |
| 第一章 疱疹病毒A-亚科UL27基因的研究进展 | 第11-17页 |
| 1.疱疹病毒概述 | 第11-13页 |
| ·疱疹病毒分类 | 第11页 |
| ·疱疹病毒基因组结构 | 第11-12页 |
| ·疱疹病毒形态结构 | 第12页 |
| ·疱疹病毒基因转录和蛋白表达调节 | 第12页 |
| ·疱疹病毒主要结构蛋白 | 第12-13页 |
| 2 疱疹病毒UL27基因及其编码蛋白的研究进展 | 第13-16页 |
| ·UL27基因的研究进展 | 第13-14页 |
| ·UL27基因的作用 | 第14页 |
| ·UL27基因编码产物糖蛋白B(GB)的结构特点 | 第14-15页 |
| ·GB蛋白在病毒感染中的作用机理研究 | 第15页 |
| ·GB蛋白在免疫学方面的研究 | 第15-16页 |
| 3 展望 | 第16页 |
| 选题目的和意义 | 第16-17页 |
| 第二部分 试验研究 | 第17-69页 |
| 第二章 UL27基因及其编码蛋白的生物信息学分析 | 第17-25页 |
| 1 材料和方法 | 第17页 |
| ·材料 | 第17页 |
| ·方法 | 第17页 |
| 2 结果 | 第17-22页 |
| ·目标序列的生物信息学分析 | 第17-18页 |
| ·ORF3003编码蛋白序列的生物信息学分析 | 第18-22页 |
| 3 讨论 | 第22-25页 |
| ·目标序列的生物信息特性分析 | 第22-23页 |
| ·鸭瘟病毒gB基因的蛋白质序列分析 | 第23-25页 |
| 第三章 鸭瘟病毒GB基因B、T细胞表位的预测 | 第25-31页 |
| 1 方法 | 第25页 |
| ·鸭瘟病毒gB蛋白B细胞抗原表位的预测 | 第25页 |
| ·鸭瘟病毒gB蛋白T细胞表位的预测 | 第25页 |
| 2.结果 | 第25-29页 |
| ·DPV gB蛋白的二级结构预测结果 | 第25-26页 |
| ·DPV gB蛋白亲水性预测结果 | 第26-27页 |
| ·DPV gB蛋白可塑性预测结果 | 第27页 |
| ·DPV gB蛋白的抗原指数预测结果 | 第27-28页 |
| ·MHC-Ⅰ类抗原表位预测结果 | 第28页 |
| ·MHC-Ⅱ类分子表位预测结果 | 第28-29页 |
| 3 讨论 | 第29-31页 |
| 第四章 鸭瘟病毒UL27基因主要抗原域蛋白的原核表达、纯化及其抗体制备 | 第31-54页 |
| 1.材料 | 第31-34页 |
| ·菌株/毒株/载体/疫苗 | 第31页 |
| ·试验动物 | 第31页 |
| ·主要工具酶及试剂 | 第31-32页 |
| ·主要溶液的配制 | 第32-34页 |
| ·主要仪器设备 | 第34页 |
| ·其它 | 第34页 |
| 2.试验方法 | 第34-45页 |
| ·DPV基因组DNA提取 | 第34-35页 |
| ·PCR扩增鸭瘟病毒UL27基因主要抗原域(UL27M) | 第35-36页 |
| ·UL27M基因T克隆与鉴定 | 第36-39页 |
| ·UL27M重组表达菌株的构建 | 第39-40页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及表达条件的优化 | 第40-42页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第42页 |
| ·兔高免血清的制备 | 第42-43页 |
| ·ELISA方法检测兔抗DPV UL27M抗体效价 | 第43-44页 |
| ·兔抗DPV UL27M高免血清IgG的纯化及鉴定 | 第44-45页 |
| 3.结果 | 第45-51页 |
| ·鸭瘟病毒UL27M PCR扩增、克隆与鉴定结果 | 第45页 |
| ·重组表达质粒pET28-UL27M的构建及鉴定结果 | 第45-47页 |
| ·重组质粒的诱导表达及表达条件优化结果 | 第47页 |
| ·重组蛋白的纯化结果 | 第47页 |
| ·免疫兔血清的Western blot检测结果 | 第47-49页 |
| ·兔抗DPV UL27M血清ELISA效价的检测结果 | 第49页 |
| ·兔抗DPV UL27M IgG的纯化及SDS-PAGE鉴定结果 | 第49-50页 |
| ·中和效价结果判定 | 第50-51页 |
| 4.讨论 | 第51-54页 |
| ·UL27基因主要抗原区域(UL27M)的克隆 | 第51页 |
| ·表达载体的选择 | 第51-52页 |
| ·诱导条件的优化 | 第52-53页 |
| ·包涵体的形成 | 第53页 |
| ·抗血清的制备 | 第53-54页 |
| 第五章 鸭瘟病毒UL27蛋白在宿主细胞中的亚细胞定位 | 第54-61页 |
| 1 材料 | 第54页 |
| ·毒株/细胞 | 第54页 |
| ·主要试剂及配制 | 第54页 |
| ·主要仪器设备 | 第54页 |
| 2 实验方法 | 第54-56页 |
| ·间接免疫荧光检测DPV UL27亚细胞定位方法的建立及优化 | 第54-55页 |
| ·DPV UL27基因产物亚细胞定位的动态监测 | 第55-56页 |
| 3 结果 | 第56-59页 |
| ·间接免疫荧光检测DPV UL27亚细胞定位方法的建立及优化结果 | 第56-57页 |
| ·特异性试验结果 | 第57页 |
| ·DPV UL27蛋白亚细胞定位的动态监测结果 | 第57-59页 |
| 4 讨论: | 第59-61页 |
| ·关于蛋白定位研究的方法 | 第59-60页 |
| ·关于DPV gB在宿主亚细胞定位的时相分析 | 第60-61页 |
| 第六章 鸭瘟病毒UL27基因转录及表达时相分析 | 第61-69页 |
| 1 材料 | 第61-62页 |
| ·菌株/毒株/细胞 | 第61页 |
| ·主要实验仪器 | 第61页 |
| ·主要的材料试剂和配制 | 第61-62页 |
| ·细胞培养溶液配置 | 第62页 |
| ·细胞蛋白提取相关溶液配置 | 第62页 |
| ·分析软件 | 第62页 |
| 2.实验方法 | 第62-65页 |
| ·鸭瘟病毒UL27基因的转录时相分析 | 第62-64页 |
| ·鸭瘟病毒UL27基因的表达时相分析 | 第64-65页 |
| 3.结果 | 第65-66页 |
| ·FQ-PCR PET28a-UL27标准曲线 | 第65-66页 |
| ·FQ-PCR定量检测UL27基因不同时间的转录情况 | 第66页 |
| ·DPV UL27基因产物在宿主细胞中的表达时相 | 第66页 |
| 4 讨论 | 第66-69页 |
| ·荧光实时定量PCR对病毒在机体内增殖分布规律研究的优越性 | 第66-67页 |
| ·病毒UL27基因转录时相分析 | 第67页 |
| ·关于Western-blot表达时相分析 | 第67-69页 |
| 第三部分 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
