| 提要 | 第1-5页 |
| 中文摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 第1章 前言 | 第13-25页 |
| ·酿酒酵母表达系统 | 第13-18页 |
| ·用于外源基因表达的宿主细胞—酿酒酵母 | 第13-14页 |
| ·用于外源基因表达的载体 | 第14-18页 |
| ·索马甜 | 第18-25页 |
| ·产生甜味的机理 | 第19-21页 |
| ·甜味和结构的关系 | 第21-22页 |
| ·抗真菌活性与结构的关系 | 第22-23页 |
| ·索马甜的基因工程研究 | 第23-25页 |
| 第2章 材料与方法 | 第25-37页 |
| ·实验材料 | 第25-27页 |
| ·试剂及材料 | 第25页 |
| ·质粒与菌种 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25-26页 |
| ·主要实验设备 | 第26-27页 |
| ·引物设计与合成 | 第27页 |
| ·实验方法 | 第27-37页 |
| ·Tha 基因的构建 | 第27-30页 |
| ·重组质粒 pMD18-T-Tha his-tag 的构建 | 第30页 |
| ·重组质粒 pYES2-Tha 和 pYES2-Tha his-tag 的构建 | 第30页 |
| ·半乳糖诱导索马甜在酿酒酵母中表达 | 第30-34页 |
| ·酿酒酵母 pYES2 表达系统诱导条件的摸索 | 第34页 |
| ·最适诱导条件下索马甜的表达 | 第34页 |
| ·Ni 亲和层析 EP 管小量纯化法 | 第34-37页 |
| 第3章 实验结果与分析 | 第37-59页 |
| ·重组索马甜基因的设计 | 第37-38页 |
| ·重组索马甜基因的构建 | 第38-42页 |
| ·用 PCR 搭建方法构建 A、B 基因片段 | 第38-39页 |
| ·A、B 基因片段的 T-A 连接 | 第39-40页 |
| ·重组质粒 pMD18-T-Tha 的构建 | 第40-42页 |
| ·重组质粒 pMD18-T-Tha his-tag 的构建 | 第42-44页 |
| ·重组质粒 pYES2-Tha 和 pYES2-Tha his-tag 的构建 | 第44-46页 |
| ·诱导索马甜蛋白在酿酒酵母中表达 | 第46-50页 |
| ·pYES2-Tha 和 pYES2-Tha his-tag 转化入酿酒酵母 | 第46-47页 |
| ·半乳糖诱导索马甜蛋白表达及鉴定 | 第47-50页 |
| ·酿酒酵母 pYES2 表达系统诱导平台的建立 | 第50-55页 |
| ·最适诱导条件下诱导 Tha his-tag 蛋白的表达 | 第55-59页 |
| 第4章 讨论 | 第59-65页 |
| ·酿酒酵母表达系统的选择 | 第59-60页 |
| ·pYES2 表达载体的选择 | 第60-61页 |
| ·表达系统的优化 | 第61-63页 |
| ·碳源的影响 | 第61-62页 |
| ·诱导时间的影响 | 第62页 |
| ·其他条件的影响 | 第62-63页 |
| ·分析外源蛋白表达不出来的原因 | 第63-65页 |
| ·蛋白质微量表达 | 第63页 |
| ·蛋白质降解 | 第63页 |
| ·其他原因 | 第63-65页 |
| 第5章 结论 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 作者简历及硕士期间科研成果 | 第73-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
