| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第12-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-24页 |
| 1.1 苏云金芽胞杆菌 | 第13-14页 |
| 1.1.1 苏云金芽胞杆菌概述 | 第13页 |
| 1.1.2 苏云金芽胞杆菌的分类 | 第13-14页 |
| 1.2 Cry蛋白 | 第14-20页 |
| 1.2.1 Cry蛋白的分类 | 第14页 |
| 1.2.2 Cry蛋白的杀虫活性 | 第14-15页 |
| 1.2.3 Cry蛋白的作用机制 | 第15-18页 |
| 1.2.4 Cry2 类蛋白概述 | 第18-20页 |
| 1.3 Cry蛋白高表达机制 | 第20-22页 |
| 1.3.1 cry基因所在质粒的拷贝数的影响 | 第20页 |
| 1.3.2 强启动子及STAB-SD序列的影响 | 第20-21页 |
| 1.3.3 分子伴侣及辅助蛋白的影响 | 第21-22页 |
| 1.4 苏云金芽胞杆菌的应用 | 第22-23页 |
| 1.4.1 Bt制剂的应用 | 第22页 |
| 1.4.2 转基因抗虫作物的应用 | 第22-23页 |
| 1.5 目的意义及研究内容 | 第23-24页 |
| 1.5.1 目的意义 | 第23页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第23-24页 |
| 第二章 材料与方法 | 第24-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-27页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第24-25页 |
| 2.1.2 生化试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.3 培养基与抗生素 | 第26-27页 |
| 2.1.4 溶液和缓冲液 | 第27页 |
| 2.1.5 供试试虫 | 第27页 |
| 2.2 实验仪器 | 第27-28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-37页 |
| 2.3.1 大肠杆菌表达的Cry2 类蛋白的提取 | 第28页 |
| 2.3.2 蛋白样品的SDS-PAGE分析 | 第28-29页 |
| 2.3.3 模板质粒的序列分析及质粒图谱的绘制 | 第29页 |
| 2.3.4 模板质粒的定点突变 | 第29-30页 |
| 2.3.5 cry2 类基因在Bt中表达载体的构建 | 第30页 |
| 2.3.6 目的片段的扩增 | 第30-32页 |
| 2.3.7 目的片段连接、转化 | 第32页 |
| 2.3.8 阳性重组子的鉴定 | 第32-33页 |
| 2.3.9 Bt感受态细胞的制备与电击转化 | 第33-34页 |
| 2.3.10 Bt重组菌菌体的形态观察 | 第34页 |
| 2.3.11 Bt菌体蛋白的SDS-PAGE、定量及质谱鉴定 | 第34页 |
| 2.3.12 对几种鳞翅目害虫的生物活性测定 | 第34-37页 |
| 第三章 结果与分析 | 第37-59页 |
| 3.1 cry2 类基因在大肠杆菌中表达 | 第37-42页 |
| 3.1.1 不同温度条件诱导大肠杆菌中cry2 类基因的表达量分析 | 第37-38页 |
| 3.1.2 Cry2 类蛋白表达量差异位点的分析 | 第38-39页 |
| 3.1.3 不同温度条件诱导表达的Cry2 类蛋白活性分析比较 | 第39-42页 |
| 3.2 cry2 类基因在Bt无晶体突变株中表达 | 第42-47页 |
| 3.2.1 模板质粒的序列分析 | 第42页 |
| 3.2.2 Bt表达载体的构建 | 第42-44页 |
| 3.2.3 目的片段的连接转化 | 第44页 |
| 3.2.4 阳性重组质粒的鉴定 | 第44-46页 |
| 3.2.5 Bt重组菌的鉴定 | 第46-47页 |
| 3.3 Bt中表达的Cry2 类蛋白及其生物活性测定 | 第47-56页 |
| 3.3.1 重组菌体表达蛋白的SDS-PAGE分析及质谱分析 | 第47-48页 |
| 3.3.2 Bt重组菌的发酵培养及重组菌体Cry2 类蛋白的定量 | 第48-50页 |
| 3.3.3 Cry2 类蛋白重组菌对四种鳞翅目害虫的生物活性测定结果 | 第50-53页 |
| 3.3.4 Cry2 类蛋白重组菌在不同pH缓冲液中的溶解性分析 | 第53页 |
| 3.3.5 中肠液对Cry2 类重组菌的消化情况分析 | 第53-56页 |
| 3.4 分子伴侣ORF1、ORF2 对表达的影响 | 第56-59页 |
| 第四章 讨论 | 第59-62页 |
| 4.1 大肠杆菌中cry2 类基因表达情况分析 | 第59-61页 |
| 4.2 苏云金芽胞杆菌中cry2 类基因表达情况分析 | 第61-62页 |
| 第五章 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 作者简历 | 第71页 |
