| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 第一章 引言 | 第12-22页 |
| 1.1 苏云金芽胞杆菌概述 | 第12页 |
| 1.2 苏云金芽胞杆菌在应用过程中存在的问题 | 第12-14页 |
| 1.2.1 芽胞大量释放可能存在一定的生态风险 | 第13页 |
| 1.2.2 释放的晶体蛋白在自然条件下易失活 | 第13页 |
| 1.2.3 苏云金芽胞杆菌杀虫活性方面的局限性 | 第13-14页 |
| 1.3 芽胞形成的调控机制 | 第14-16页 |
| 1.3.1 芽胞的形成的过程 | 第14-15页 |
| 1.3.2 芽胞形成过程中的调控因子 | 第15-16页 |
| 1.4 苏云金芽胞杆菌母细胞的裂解 | 第16-18页 |
| 1.4.1 改良制剂的应用 | 第16-17页 |
| 1.4.2 与母细胞裂解相关的基因 | 第17页 |
| 1.4.3 与母细胞裂解相关的关键水解酶 | 第17-18页 |
| 1.5 晶体蛋白的调控机制 | 第18-21页 |
| 1.5.1 苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白的形成 | 第18-19页 |
| 1.5.2 苏云金芽胞杆菌中主要的杀虫晶体蛋白 | 第19页 |
| 1.5.3 cry类启动子对晶体蛋白表达的指导 | 第19-20页 |
| 1.5.4 非cry类启动子对晶体蛋白表达的指导 | 第20-21页 |
| 1.6 立题依据与目的意义 | 第21-22页 |
| 1.6.1 立题依据 | 第21页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第21页 |
| 1.6.3 目的意义 | 第21-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-26页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第22-24页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第24页 |
| 2.1.3 培养基和抗生素 | 第24-25页 |
| 2.1.4 溶液与缓冲液 | 第25页 |
| 2.1.5 引物列表 | 第25-26页 |
| 2.2 实验仪器 | 第26-27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-34页 |
| 2.3.1 细菌的培养条件 | 第27页 |
| 2.3.2 PCR扩增目的基因 | 第27页 |
| 2.3.3 质粒的提取 | 第27-28页 |
| 2.3.4 纯化 | 第28页 |
| 2.3.5 胶回收 | 第28-29页 |
| 2.3.6 大肠感受态的制备与转化 | 第29页 |
| 2.3.7 Bt感受态的制备与转化 | 第29-30页 |
| 2.3.8 光学显微镜观察 | 第30页 |
| 2.3.9 生长曲线测定 | 第30页 |
| 2.3.10 芽胞形成率分析 | 第30-31页 |
| 2.3.11 β-半乳糖苷酶活性分析 | 第31页 |
| 2.3.12 目的蛋白的表达与纯化 | 第31-32页 |
| 2.3.13 突变体的获得 | 第32页 |
| 2.3.14 总蛋白定量分析 | 第32-33页 |
| 2.3.15 生物活性杀虫测定 | 第33-34页 |
| 第三章 结果与分析 | 第34-54页 |
| 3.1 spoIIID缺失突变体的研究 | 第34-37页 |
| 3.1.1 Spo IIID的生物信息学分析 | 第34-35页 |
| 3.1.2 HD(ΔspoIIID)突变株生长曲线测定 | 第35页 |
| 3.1.3 spoIIID缺失对芽胞形成的影响 | 第35-37页 |
| 3.2 spoIIID缺失对母细胞裂解的影响 | 第37-42页 |
| 3.2.1 spoIIID基因缺失对P_(sigK)和P_(sigE)转录活性的影响 | 第37-39页 |
| 3.2.2 光学显微镜观察 | 第39页 |
| 3.2.3 1/2LB中spoIIID突变株生长情况观察 | 第39-40页 |
| 3.2.4 spoIIID基因缺失对Pcwl C转录活性的影响 | 第40-41页 |
| 3.2.5 spoIIID与cwl C双缺失突变体的构建与表型观察 | 第41-42页 |
| 3.3 spoIIID突变株中Cry蛋白的表达 | 第42-48页 |
| 3.3.1 SpoIIID对P_(orf1cry8E),P_(5014)转录活性的影响 | 第42-44页 |
| 3.3.2 P_(orf1cry8E)和P_(5014)指导的Cry1Ac在HD~-(ΔspoIIID)突变株中的产量 | 第44页 |
| 3.3.3 P_(orf1cry8E)和P_(5014)指导的晶体蛋白电镜观察 | 第44-45页 |
| 3.3.4 Western-blot检测Cry1Ac目的蛋白 | 第45页 |
| 3.3.5 P_(orf1cry8E)和P_(5014)在HD~-(ΔspoIIID)突变株中指导的Cry1Ac的杀虫活性测定 | 第45-46页 |
| 3.3.6 HD~-(ΔspoIIID)(Δcwl C)突变株的获得 | 第46-47页 |
| 3.3.7 P_(orf1cry8E)在HD~-(ΔspoIIID)(Δcwl C)中的转录与指导Cry1Ac表达的分析 | 第47-48页 |
| 3.4 spoIIID突变体中强启动子的筛选 | 第48-54页 |
| 3.4.1 在spoIIID突变株中高表达量基因的筛选 | 第48-49页 |
| 3.4.2 spoIIID突变株中启动子转录活性的测定 | 第49-50页 |
| 3.4.3 苏云金芽胞杆菌中SpoIIID调节子的筛选 | 第50-51页 |
| 3.4.4 SpoIIID蛋白的表达与纯化 | 第51-54页 |
| 第四章 讨论 | 第54-56页 |
| 4.1 spoIIID缺失影响母细胞裂解的原因 | 第54页 |
| 4.2 在HD73中SpoIIID调节子的确定 | 第54-55页 |
| 4.3 spoIIID突变株的应用前景 | 第55-56页 |
| 第五章 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-68页 |
| 致谢 | 第68-70页 |
| 作者简历 | 第70-71页 |
