| 摘要 | 第15-17页 |
| 英文摘要 | 第17-20页 |
| 1 文献综述 | 第20-42页 |
| 1.1 丁酸研究概述 | 第20-23页 |
| 1.1.1 机体内丁酸的来源及主要生理功效 | 第20-21页 |
| 1.1.2 丁酸代谢与组蛋白去乙酰化表观修饰 | 第21-22页 |
| 1.1.3 丁酸钠在反刍动物生产中的实际应用 | 第22-23页 |
| 1.2 抗菌肽研究概述 | 第23-34页 |
| 1.2.1 抗菌肽的种类和表达 | 第23-27页 |
| 1.2.2 抗菌肽的抗菌特性 | 第27-29页 |
| 1.2.3 抗菌肽的抗炎特性 | 第29页 |
| 1.2.4 抗菌肽的免疫调节活性 | 第29-30页 |
| 1.2.5 丁酸钠对内源性抗菌肽的诱导表达作用 | 第30-32页 |
| 1.2.6 抗菌肽在牛乳房炎中发挥先天免疫防御的作用 | 第32-34页 |
| 1.3 金黄色葡萄球菌及其外毒素磷脂壁酸研究概述 | 第34-41页 |
| 1.3.1 金黄色葡萄球菌的易感宿主和临床表现 | 第34页 |
| 1.3.2 金黄色葡萄球菌的致病机理 | 第34-35页 |
| 1.3.3 金黄色葡萄球菌引起奶牛乳房炎的免疫学反应 | 第35-36页 |
| 1.3.4 金黄色葡萄球菌引起奶牛乳房炎的诊断与控制策略 | 第36-38页 |
| 1.3.5 脂磷壁酸的种类和结构 | 第38页 |
| 1.3.6 脂磷壁酸对机体炎症反应和免疫应答的调节作用 | 第38-40页 |
| 1.3.7 脂磷壁酸对抗菌肽活性的影响 | 第40-41页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第41-42页 |
| 2 丁酸钠对牛乳腺上皮细胞(MAC-T)内源性抗菌肽诱导表达研究 | 第42-60页 |
| 2.1 试验材料 | 第42-43页 |
| 2.1.1 细胞 | 第42页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第42-43页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第43页 |
| 2.2 试验方法 | 第43-48页 |
| 2.2.1 细胞培养与鉴定 | 第43-44页 |
| 2.2.2 MTT法检测丁酸钠的细胞毒性 | 第44页 |
| 2.2.3 丁酸钠处理细胞方法 | 第44页 |
| 2.2.4 提取细胞RNA及反转录合成c DNA | 第44-45页 |
| 2.2.5 实时定量PCR(q PCR)检测基因mRNA表达水平 | 第45-47页 |
| 2.2.6 蛋白免疫印迹(Western blot)检测细胞蛋白表达水平 | 第47页 |
| 2.2.7 细胞转染siRNA | 第47-48页 |
| 2.2.8 数据统计 | 第48页 |
| 2.3 结果与分析 | 第48-57页 |
| 2.3.1 MAC-T细胞鉴定结果 | 第48-49页 |
| 2.3.2 丁酸钠对MAC-T细胞的细胞活力检测 | 第49-50页 |
| 2.3.3 丁酸钠诱导MAC-T细胞抗菌肽基因的差异性表达 | 第50-51页 |
| 2.3.4 丁酸钠对MAC-T细胞抗菌肽基因诱导表达的剂量与时间依赖效应 | 第51-53页 |
| 2.3.5 组蛋白去乙酰化抑制作用对诱导MAC-T细胞抗菌肽基因表达的影响 | 第53-54页 |
| 2.3.6 阻断短链脂肪酸受体对丁酸钠诱导MAC-T细胞抗菌肽基因表达的影响 | 第54-57页 |
| 2.4 讨论 | 第57-58页 |
| 2.4.1 丁酸钠对内源性抗菌肽基因的表达调控 | 第57页 |
| 2.4.2 组蛋白去乙酰化抑制作用对丁酸钠调控内源性抗菌肽基因表达的影响 | 第57-58页 |
| 2.4.3 阻断短链脂肪酸受体对丁酸钠调控内源性抗菌肽基因表达的影响 | 第58页 |
| 2.5 小结 | 第58-60页 |
| 3 丁酸钠对MAC-T细胞系差异表达转录组的影响 | 第60-82页 |
| 3.1 试验材料 | 第60页 |
| 3.1.1 细胞 | 第60页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第60页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第60页 |
| 3.2 试验方法 | 第60-63页 |
| 3.2.1 用于基因转录组检测与分析的丁酸钠处理细胞方法 | 第60-61页 |
| 3.2.2 文库构建与质检 | 第61页 |
| 3.2.3 上机测序 | 第61页 |
| 3.2.4 数据指控 | 第61页 |
| 3.2.5 测序数据与参考基因组进行序列比对 | 第61页 |
| 3.2.6 差异表达分析 | 第61页 |
| 3.2.7 差异基因富集分析 | 第61-62页 |
| 3.2.8 内源性抗菌肽启动子的转录结合位点分析 | 第62页 |
| 3.2.9 细胞转染miRNA | 第62-63页 |
| 3.2.10 药物处理细胞方法 | 第63页 |
| 3.2.11 数据统计 | 第63页 |
| 3.3 结果与分析 | 第63-76页 |
| 3.3.1 丁酸钠处理后的显著差异基因表达分析 | 第63-65页 |
| 3.3.2 实时定量PCR验证丁酸钠处理后的牛内源性抗菌肽基因的转录组差异表达·· | 第65-66页 |
| 3.3.3 丁酸钠处理后潜在转录因子对内源性抗菌肽启动子区域的影响 | 第66页 |
| 3.3.4 显著差异表达基因的GO富集分析 | 第66-67页 |
| 3.3.5 显著差异表达基因的KEGG富集分析 | 第67-70页 |
| 3.3.6 不同信号转导通路抑制剂对丁酸钠诱导牛内源性抗菌肽基因表达的影响 | 第70-71页 |
| 3.3.7 丁酸钠处理后microRNA的筛选与分析 | 第71-74页 |
| 3.3.8 不同miRNA对丁酸钠调控牛内源性抗菌肽基因表达的影响 | 第74-76页 |
| 3.4 讨论 | 第76-81页 |
| 3.4.1 利用基因转录组学分析丁酸钠诱导内源性抗菌肽基因的差异表达 | 第76-79页 |
| 3.4.2 不同细胞信号通路抑制剂对丁酸钠诱导抗菌肽基因表达的影响 | 第79-80页 |
| 3.4.3 不同miRNA对丁酸钠诱导抗菌肽基因表达的影响 | 第80-81页 |
| 3.5 小结 | 第81-82页 |
| 4 丁酸钠对MAC-T细胞抗金黄色葡萄球菌感染的影响 | 第82-99页 |
| 4.1 试验材料 | 第82-83页 |
| 4.1.1 细胞 | 第82页 |
| 4.1.2 菌株 | 第82页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第82页 |
| 4.1.4 主要仪器设备 | 第82-83页 |
| 4.2 试验方法 | 第83-85页 |
| 4.2.1 丁酸钠对细菌增殖的影响 | 第83页 |
| 4.2.2 细胞处理方法 | 第83页 |
| 4.2.3 荧光定量PCR检测基因表达 | 第83-84页 |
| 4.2.4 Annexin V/PI双染流式分析细胞凋亡 | 第84页 |
| 4.2.5 透射电镜样品制备步骤 | 第84页 |
| 4.2.6 丁酸钠的小鼠体内抗菌作用试验设计和样品采集 | 第84-85页 |
| 4.2.7 石蜡组织切片苏木素-伊红(HE)染色方法 | 第85页 |
| 4.2.8 小鼠血清抗体ELISA检测方法 | 第85页 |
| 4.2.9 数据统计 | 第85页 |
| 4.3 结果与分析 | 第85-94页 |
| 4.3.1 丁酸钠对金黄色葡萄球菌增殖的影响 | 第85-86页 |
| 4.3.2 丁酸钠对MAC-T细胞抑菌作用的影响 | 第86-88页 |
| 4.3.3 丁酸钠对金黄色葡萄球菌感染破坏MAC-T细胞亚细胞结构的影响 | 第88-89页 |
| 4.3.4 丁酸钠对金黄色葡萄球菌感染MAC-T细胞Toll样和NOD样受体基因表达的影响 | 第89页 |
| 4.3.5 丁酸钠对金黄色葡萄球菌感染MAC-T细胞炎性细胞因子基因表达的影响 | 第89-90页 |
| 4.3.6 丁酸钠对金黄色葡萄球菌感染MAC-T细胞抗菌肽基因表达的影响 | 第90-91页 |
| 4.3.7 丁酸钠对金黄色葡萄球菌感染MAC-T细胞凋亡的影响 | 第91-93页 |
| 4.3.8 丁酸钠对金黄色葡萄球菌感染小鼠乳腺组织形态学的影响 | 第93页 |
| 4.3.9 丁酸钠对金黄色葡萄球菌感染小鼠引起炎症反应的影响 | 第93-94页 |
| 4.4 讨论 | 第94-98页 |
| 4.5 小结 | 第98-99页 |
| 5 丁酸钠缓解金黄色葡萄球菌外毒素脂磷壁酸(LTA)引起炎症反应的作用机制研究·· | 第99-117页 |
| 5.1 试验材料 | 第99页 |
| 5.1.1 细胞 | 第99页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第99页 |
| 5.1.3 主要仪器设备 | 第99页 |
| 5.2 试验方法 | 第99-100页 |
| 5.2.1 MTT法检测LTA的细胞毒性 | 第99-100页 |
| 5.2.2 丁酸钠处理细胞的方法 | 第100页 |
| 5.2.3 间接免疫荧光 | 第100页 |
| 5.2.4 数据统计 | 第100页 |
| 5.3 结果与分析 | 第100-111页 |
| 5.3.1 LTA对 MAC-T细胞的细胞活力检测 | 第100-101页 |
| 5.3.2 丁酸钠对LTA刺激MAC-T细胞抗菌肽基因表达的影响 | 第101-102页 |
| 5.3.3 丁酸钠对LTA刺激刺激MAC-T细胞组蛋白乙酰化水平的影响 | 第102-103页 |
| 5.3.4 丁酸钠对LTA刺激MAC-T细胞炎性因子基因表达的影响 | 第103-104页 |
| 5.3.5 丁酸钠对LTA刺激MAC-T细胞TLR2 受体的影响 | 第104-105页 |
| 5.3.6 丁酸钠对LTA刺激MAC-T细胞NF-κB信号转导途径的影响 | 第105-108页 |
| 5.3.7 丁酸钠对LTA刺激刺激MAC-T细胞NLRP3 信号转导途径的影响 | 第108-109页 |
| 5.3.8 丁酸钠对LTA刺激MAC-T细胞MAPKs信号转导途径的影响 | 第109-110页 |
| 5.3.9 丁酸钠对LTA刺激MAC-T细胞脂类代谢相关蛋白表达的影响 | 第110-111页 |
| 5.4 讨论 | 第111-116页 |
| 5.5 小结 | 第116-117页 |
| 6 结论 | 第117-118页 |
| 参考文献 | 第118-139页 |
| 致谢 | 第139-140页 |
| 个人简历 | 第140页 |
