| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 1 前言 | 第8-18页 |
| 1.1 脂肪酶 | 第8-13页 |
| 1.1.1 脂肪酶结构及催化机理 | 第8-9页 |
| 1.1.2 脂肪酶来源 | 第9-11页 |
| 1.1.3 脂肪酶催化反应 | 第11-13页 |
| 1.2 酯化活性脂肪酶 | 第13-17页 |
| 1.2.1 酯化活性脂肪酶的酯化作用 | 第14-15页 |
| 1.2.2 酯化活性脂肪酶的应用 | 第15-17页 |
| 1.3 研究背景和主要内容 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-21页 |
| 2.1.1 菌种与质粒 | 第18页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第19页 |
| 2.1.4 溶液与缓冲液 | 第19-20页 |
| 2.1.5 培养基 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-33页 |
| 2.2.1 目的基因序列获取与分析 | 第21页 |
| 2.2.2 黑曲霉总RNA的提取及纯化 | 第21页 |
| 2.2.3 cDNA的合成 | 第21-22页 |
| 2.2.4 琼脂糖凝胶电泳 | 第22页 |
| 2.2.5 黑曲霉tglE基因克隆 | 第22-23页 |
| 2.2.6 重组表达载体的构建 | 第23-26页 |
| 2.2.7 重组毕赤酵母的遗传转化 | 第26-27页 |
| 2.2.8 重组毕赤酵母的摇瓶发酵 | 第27页 |
| 2.2.9 脂肪酶TglE的分离纯化 | 第27-28页 |
| 2.2.10 脂肪酶酶活测定方法 | 第28-29页 |
| 2.2.11 脂肪酶TglE酶学性质分析 | 第29-31页 |
| 2.2.12 脂肪酶TglE酯化特征分析 | 第31-33页 |
| 3 结果与讨论 | 第33-53页 |
| 3.1 Aspergillus niger脂肪酶基因tlgE的序列获取与分析 | 第33页 |
| 3.2 脂肪酶基因tglE的克隆 | 第33-35页 |
| 3.2.1 Aspergillus niger F0215总RNA的提取 | 第33-34页 |
| 3.2.2 脂肪酶基因tglE的扩增 | 第34-35页 |
| 3.3 Aspergillus niger F0215脂肪酶tglE基因比对分析 | 第35-36页 |
| 3.4 脂肪酶TglE模拟蛋白结构分析 | 第36-37页 |
| 3.5 重组表达载体pPIC-tglE的构建 | 第37-38页 |
| 3.6 重组毕赤酵母GS115-tglE的构建 | 第38-39页 |
| 3.7 脂肪酶TglE的发酵制备 | 第39-40页 |
| 3.8 脂肪酶TglE的分离纯化 | 第40-42页 |
| 3.9 脂肪酶TglE酶学性质分析 | 第42-48页 |
| 3.9.1 脂肪酶TglE最适温度和最适pH | 第42-43页 |
| 3.9.2 脂肪酶TglE热稳定性及pH稳定性 | 第43-45页 |
| 3.9.3 金属离子及其螯合剂对脂肪酶TglE酶活力的影响 | 第45页 |
| 3.9.4 有机溶剂对脂肪酶TglE酶活力的影响 | 第45-46页 |
| 3.9.5 脂肪酶TglE底物特异性 | 第46-48页 |
| 3.9.6 脂肪酶TglE动力学常数 | 第48页 |
| 3.10 脂肪酶TglE酯化特征分析 | 第48-53页 |
| 3.10.1 脂肪酶TglE酯化活性确定 | 第48-50页 |
| 3.10.2 脂肪酶TglE酯化条件优化 | 第50-53页 |
| 4 结论 | 第53-54页 |
| 4.1 全文总结 | 第53页 |
| 4.2 论文创新点 | 第53页 |
| 4.3 论文不足 | 第53-54页 |
| 5 展望 | 第54-55页 |
| 6 参考文献 | 第55-63页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第63-64页 |
| 8 致谢 | 第64页 |
