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具有酯化活性脂肪酶TglE的生化特征分析

摘要第4-5页
Abstract第5页
1 前言第8-18页
    1.1 脂肪酶第8-13页
        1.1.1 脂肪酶结构及催化机理第8-9页
        1.1.2 脂肪酶来源第9-11页
        1.1.3 脂肪酶催化反应第11-13页
    1.2 酯化活性脂肪酶第13-17页
        1.2.1 酯化活性脂肪酶的酯化作用第14-15页
        1.2.2 酯化活性脂肪酶的应用第15-17页
    1.3 研究背景和主要内容第17-18页
2 材料与方法第18-33页
    2.1 实验材料第18-21页
        2.1.1 菌种与质粒第18页
        2.1.2 实验试剂第18-19页
        2.1.3 仪器设备第19页
        2.1.4 溶液与缓冲液第19-20页
        2.1.5 培养基第20-21页
    2.2 实验方法第21-33页
        2.2.1 目的基因序列获取与分析第21页
        2.2.2 黑曲霉总RNA的提取及纯化第21页
        2.2.3 cDNA的合成第21-22页
        2.2.4 琼脂糖凝胶电泳第22页
        2.2.5 黑曲霉tglE基因克隆第22-23页
        2.2.6 重组表达载体的构建第23-26页
        2.2.7 重组毕赤酵母的遗传转化第26-27页
        2.2.8 重组毕赤酵母的摇瓶发酵第27页
        2.2.9 脂肪酶TglE的分离纯化第27-28页
        2.2.10 脂肪酶酶活测定方法第28-29页
        2.2.11 脂肪酶TglE酶学性质分析第29-31页
        2.2.12 脂肪酶TglE酯化特征分析第31-33页
3 结果与讨论第33-53页
    3.1 Aspergillus niger脂肪酶基因tlgE的序列获取与分析第33页
    3.2 脂肪酶基因tglE的克隆第33-35页
        3.2.1 Aspergillus niger F0215总RNA的提取第33-34页
        3.2.2 脂肪酶基因tglE的扩增第34-35页
    3.3 Aspergillus niger F0215脂肪酶tglE基因比对分析第35-36页
    3.4 脂肪酶TglE模拟蛋白结构分析第36-37页
    3.5 重组表达载体pPIC-tglE的构建第37-38页
    3.6 重组毕赤酵母GS115-tglE的构建第38-39页
    3.7 脂肪酶TglE的发酵制备第39-40页
    3.8 脂肪酶TglE的分离纯化第40-42页
    3.9 脂肪酶TglE酶学性质分析第42-48页
        3.9.1 脂肪酶TglE最适温度和最适pH第42-43页
        3.9.2 脂肪酶TglE热稳定性及pH稳定性第43-45页
        3.9.3 金属离子及其螯合剂对脂肪酶TglE酶活力的影响第45页
        3.9.4 有机溶剂对脂肪酶TglE酶活力的影响第45-46页
        3.9.5 脂肪酶TglE底物特异性第46-48页
        3.9.6 脂肪酶TglE动力学常数第48页
    3.10 脂肪酶TglE酯化特征分析第48-53页
        3.10.1 脂肪酶TglE酯化活性确定第48-50页
        3.10.2 脂肪酶TglE酯化条件优化第50-53页
4 结论第53-54页
    4.1 全文总结第53页
    4.2 论文创新点第53页
    4.3 论文不足第53-54页
5 展望第54-55页
6 参考文献第55-63页
7 攻读硕士学位期间发表论文情况第63-64页
8 致谢第64页

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