| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略词 | 第9-10页 |
| 文献综述 | 第10-23页 |
| 1.1 干扰素简介 | 第10-11页 |
| 1.2 干扰素表达 | 第11-14页 |
| 1.3 受体复合物与信号转导 | 第14-17页 |
| 1.4 Ⅲ IFNs的功能意义 | 第17-19页 |
| 1.5 临床应用 | 第19-22页 |
| 1.6 展望 | 第22-23页 |
| 第一章 猪IFN-λ1基因的扩增、克隆及序列分析 | 第23-39页 |
| 1 材料 | 第24-25页 |
| 1.1 实验材料 | 第24页 |
| 1.2 试剂 | 第24页 |
| 1.3 主要仪器 | 第24-25页 |
| 2 方法 | 第25-32页 |
| 2.1 引物设计 | 第25页 |
| 2.2 猪淋巴细胞分离 | 第25-26页 |
| 2.3 猪淋巴细胞总RNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.4 猪IFN-λ1基因的RT-PCR扩增 | 第27-29页 |
| 2.4.1 cDNA链合成 | 第27-28页 |
| 2.4.2 猪IFN-λ1基因的PCR扩增 | 第28页 |
| 2.4.3 琼脂糖凝胶电泳 | 第28-29页 |
| 2.5 目的基因DNA纯化 | 第29页 |
| 2.6 猪IFN-λ1基因的克隆 | 第29-32页 |
| 2.6.1 感受态细胞DH5α的制备(CaCl2法) | 第29-30页 |
| 2.6.2 目的基因的连接 | 第30页 |
| 2.6.3 目的基因的转化 | 第30页 |
| 2.6.4 质粒DNA的提取 | 第30-31页 |
| 2.6.5 重组质粒双酶切鉴定 | 第31-32页 |
| 2.7 从江香猪IFN-λ1的生物信息学分析 | 第32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-38页 |
| 3.1 淋巴细胞提取 | 第32-33页 |
| 3.2 从江香猪IFN-λ1基因的克隆 | 第33页 |
| 3.3 从江香猪IFN-λ1生物信息学分析 | 第33-38页 |
| 3.3.1 从江香猪IFN-λ1理化性质分析 | 第33-34页 |
| 3.3.2 从江香猪IFN-λ1二级结构分析 | 第34-35页 |
| 3.3.3 从江香猪IFN-λ1蛋白三级结构分析 | 第35-36页 |
| 3.3.4 从江香猪IFN-λ1基因同源性分析 | 第36-37页 |
| 3.3.5 从江香猪IFN-λ1遗传进化分析 | 第37-38页 |
| 4 讨论 | 第38-39页 |
| 第二章 猪IFN-λ1真核表达 | 第39-58页 |
| 1 材料 | 第40页 |
| 1.1 试验材料 | 第40页 |
| 1.2 主要试剂 | 第40页 |
| 1.3 试验仪器 | 第40页 |
| 2 方法 | 第40-50页 |
| 2.1 引物的设计与合成引物 | 第40-41页 |
| 2.2 重组表达载体pEGFP-C1-IFN-λ1的构建 | 第41-45页 |
| 2.3 CHO-K1细胞培养 | 第45页 |
| 2.4 重组质粒pEGFP-C1-IFN-λ1的转染 | 第45-47页 |
| 2.5 EGFP-IFN-λ1重组蛋白的表达情况检测 | 第47页 |
| 2.6 检测IFN-λ1基因的转录 | 第47-49页 |
| 2.7 表达产物Western-blot的分析与检测 | 第49-50页 |
| 2.8 蛋白活性的测定 | 第50页 |
| 3 结果与分析 | 第50-56页 |
| 3.1 重组质粒pEGFP-C1-IFN-λ1的构建与验证 | 第50-51页 |
| 3.2 重组质粒pEGFP-C1-IFN-λ1的细胞转染检测 | 第51-54页 |
| 3.3 PoIFN-λ1基因在CHO-K1细胞中的转录情况检测 | 第54页 |
| 3.4 EGFP-PoIFN-λ1重组蛋白表达情况检测 | 第54-56页 |
| 3.5 PoIFN-λ1蛋白活性的测定 | 第56页 |
| 4 讨论 | 第56-58页 |
| 第三章 猪IFN-λ1对PRRSV的增殖影响 | 第58-70页 |
| 1 材料 | 第58-59页 |
| 1.1 主要材料 | 第58-59页 |
| 1.2 主要试剂 | 第59页 |
| 1.3 主要仪器 | 第59页 |
| 2 方法 | 第59-62页 |
| 2.1 引物设计 | 第59页 |
| 2.2 Marc145细胞的培养 | 第59-60页 |
| 2.3 PRRSV病毒的扩增 | 第60页 |
| 2.4 病毒TCID50的测定 | 第60页 |
| 2.5 细胞总RNA的提取 | 第60页 |
| 2.6 反转录 | 第60-61页 |
| 2.7 标准质粒的制备 | 第61页 |
| 2.8 标准质粒拷贝数计算 | 第61页 |
| 2.9 反应体系的建立与条件优化 | 第61页 |
| 2.10 PRRSV-N基因TaqMan荧光探针标准曲线的建立 | 第61-62页 |
| 2.11 重复性试验 | 第62页 |
| 2.12 样本的检测 | 第62页 |
| 3 结果与分析 | 第62-68页 |
| 3.1 细胞总RNA的检测结果 | 第62-63页 |
| 3.2 反应体系的建立与条件优化结果 | 第63-64页 |
| 3.3 TaqMan荧光探针标准曲线的建立 | 第64-65页 |
| 3.4 重复性试验 | 第65-66页 |
| 3.5 PRRSV-N基因mRNA样本检测 | 第66-68页 |
| 3.5.1 Marc-145细胞CPE | 第66页 |
| 3.5.2 PoIFN-λ1对PRRSV增殖影响 | 第66-68页 |
| 4.讨论 | 第68-70页 |
| 全文结论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-77页 |
| 附录一 发表文章 | 第77-78页 |
| 附录二 各种培养基、溶液及试剂的配制 | 第78-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
