| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 前言 | 第10-30页 |
| 1.1 染色质与表观遗传 | 第10-13页 |
| 1.2 精子发生中表观遗传研究概况 | 第13-24页 |
| 1.2.1 精子的染色质结构 | 第13-15页 |
| 1.2.2 精子发生过程中的染色质变化 | 第15-18页 |
| 1.2.3 精子发生过程中的组蛋白变体 | 第18-23页 |
| 1.2.4 精子发生过程中的H3K79位甲基化的变化 | 第23-24页 |
| 1.3 不同分化时期生精细胞分离方法 | 第24-27页 |
| 1.3.1 不同日龄小鼠生精上皮细胞的组成 | 第24-26页 |
| 1.3.2 生精细胞密度沉降原理 | 第26-27页 |
| 1.4 本课题的研究目的、科学意义及技术路线 | 第27-30页 |
| 材料与方法 | 第30-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第30-33页 |
| 2.1.1 试剂耗材 | 第30页 |
| 2.1.2 仪器设备 | 第30-31页 |
| 2.1.3 常用溶液 | 第31-32页 |
| 2.1.4 分析软件 | 第32-33页 |
| 2.1.5 公共数据 | 第33页 |
| 2.2 实验方法 | 第33-44页 |
| 2.2.1 小鼠生精细胞的分离与鉴定 | 第33-36页 |
| 2.2.2 分离粗线期和圆形精子细胞的免疫荧光染色 | 第36-37页 |
| 2.2.3 染色质免疫共沉淀 | 第37-40页 |
| 2.2.4 ChIP-seq测序文库的构建与质控 | 第40页 |
| 2.2.5 ChIP-seq数据的分析 | 第40-42页 |
| 2.2.6 RNA-seq数据的分析 | 第42-44页 |
| 结果 | 第44-80页 |
| 3.1 小鼠生精细胞的分离 | 第44-46页 |
| 3.1.1 分离所得粗线期初级精母细胞及圆形精子细胞的光镜检测 | 第44-45页 |
| 3.1.2 分离所得粗线期初级精母细胞及圆形精子细胞的免疫荧光检测 | 第45-46页 |
| 3.2 ChIP实验结果 | 第46-48页 |
| 3.2.1 染色质免疫共沉淀单核小体DNA的检测 | 第46-47页 |
| 3.2.2 ChIP-DNA建库情况的检测 | 第47页 |
| 3.2.3 ChIP-DNA测序质量的检测 | 第47-48页 |
| 3.3 RNA-seq的数据分析 | 第48-50页 |
| 3.4 H3K79me3的数据分析 | 第50-56页 |
| 3.4.1 H3K79me3在粗线期初级精母细胞中分布于TSS附近 | 第51页 |
| 3.4.2 H3K79me3在粗线期初级精母细胞中与H3K4me3共定位 | 第51-52页 |
| 3.4.3 H3K79me3与粗线期初级精母细胞基因活跃转录状态的改变相关 | 第52-56页 |
| 3.5 γH2A.X的数据分析 | 第56-61页 |
| 3.5.1 γH2A.X在粗线期初级精母细胞中富集于性染色体 | 第56-57页 |
| 3.5.2 γH2A.X在粗线期及圆形精子的定位与基因转录变化无直接相关性 | 第57-60页 |
| 3.5.3 γH2A.X在粗线期及圆形精子细胞主要定位于基因间隔区及内含子 | 第60-61页 |
| 3.6 H2A.Z的数据分析 | 第61-66页 |
| 3.6.1 粗线期及圆形精子H2A.Z在基因范围内的定位 | 第61-62页 |
| 3.6.2 H2A.Z的占位在粗线期及圆形精子与基因转录变化无直接相关性 | 第62-64页 |
| 3.6.3 H2A.Z在粗线期及圆形精子细胞主要定位于基因间隔区及内含子 | 第64-66页 |
| 3.7 macroH2A的数据分析 | 第66-71页 |
| 3.7.1 macroH2A在粗线期及圆形精子中在基因范围内主要定位于gene body上 | 第66-67页 |
| 3.7.2 macroH2A的占位基因在粗线期及圆形精子转录水平上无显著变化 | 第67-69页 |
| 3.7.3 macroH2A在粗线期及圆形精子细胞主要定位于基因间隔区及内含子 | 第69-71页 |
| 3.8 ChIP-seq数据综合分析 | 第71-80页 |
| 3.8.1 粗线期及圆形精子阶段各修饰、组蛋白H2A各变体分布情况 | 第71-72页 |
| 3.8.2 粗线期及圆形精子阶段各修饰、组蛋白H2A各变体的动态变化 | 第72-78页 |
| 3.8.3 粗线期及圆形精子阶段各修饰、组蛋白H2A各变体占位基因的GO分析 | 第78-80页 |
| 总结 | 第80-81页 |
| 4.1 粗线期H3K79me3修饰的研究 | 第80页 |
| 4.2 粗线期和圆形精子阶段组蛋白H2A变体的研究 | 第80-81页 |
| 讨论 | 第81-84页 |
| 参考文献 | 第84-91页 |
| 英文名词及缩写 | 第91-92页 |
| 文献综述 精子发生中的表观遗传研究进展 | 第92-134页 |
| 一、表观遗传学概述 | 第92-104页 |
| 1.1 表观遗传学的概念 | 第92-93页 |
| 1.2 基于染色质的表观调控 | 第93-104页 |
| 1.2.1 表观遗传调控的主要研究对象是染色质 | 第93-94页 |
| 1.2.2 表观遗传调控的机制 | 第94-104页 |
| 二、精子的发生过程概述 | 第104-108页 |
| 2.1 有丝分裂阶段 | 第104-105页 |
| 2.2 减数分裂阶段 | 第105-106页 |
| 2.3 精子形成阶段 | 第106-108页 |
| 2.4 支持细胞(Sertoli cell)及其在精子发生中的作用 | 第108页 |
| 三、精子发生中的表观遗传研究进展 | 第108-123页 |
| 3.1 DNA甲基化 | 第108-110页 |
| 3.2 组蛋白修饰 | 第110-114页 |
| 3.2.1 组蛋白的甲基化 | 第110-114页 |
| 3.2.2 组蛋白的乙酰化 | 第114页 |
| 3.3 组蛋白变体与组蛋白替换 | 第114-120页 |
| 3.3.1 连接组蛋白(H1)亚型的多样性 | 第114-115页 |
| 3.3.2 组蛋白H3亚型的多样性 | 第115-117页 |
| 3.3.3 组蛋白H2A和H2B亚型的多样性 | 第117页 |
| 3.3.4 macroH2A和H2A.X | 第117-119页 |
| 3.3.5 组蛋白序列的多样性在染色体重构的过程中的功能 | 第119页 |
| 3.3.6 组蛋白特异的伴侣分子 | 第119-120页 |
| 3.4 生精细胞特异性基因 | 第120-121页 |
| 3.4.1 过渡蛋白基因 | 第120页 |
| 3.4.2 精蛋白基因 | 第120-121页 |
| 3.5 nc-RNA | 第121-123页 |
| 3.5.1 piRNA | 第121页 |
| 3.5.2 miRNA | 第121-123页 |
| 参考文献 | 第123-134页 |
| 致谢 | 第134-136页 |
| 个人简历 | 第136-138页 |
