| 缩略语表 | 第9-14页 |
| 中文摘要 | 第14-17页 |
| Abstract | 第17-19页 |
| 前言 | 第20-22页 |
| 文献回顾 | 第22-37页 |
| 第一部分 Sirt3与中枢神经系统疾病 | 第22-33页 |
| 1. Sirtuin概述 | 第22-24页 |
| 2. Sirt3的分子生物学功能 | 第24-30页 |
| 2.1 Sirt3的表达与调控 | 第24-25页 |
| 2.2 Sirt3在调节细胞存活与死亡中的作用 | 第25-27页 |
| 2.3 Sirt3与衰老 | 第27-28页 |
| 2.4 Sirt3与能量平衡 | 第28-29页 |
| 2.5 Sirt3与氧化应激 | 第29-30页 |
| 3. Sirt3在中枢神经系统疾病中的作用 | 第30-33页 |
| 3.1 Sirt3与阿尔茨海默氏病(Alzheimer's disease,AD) | 第30-31页 |
| 3.2 Sirt3与亨廷顿舞蹈病(Huntington's disease,HD) | 第31页 |
| 3.3 Sirt3与肌萎缩性侧索硬化症(Amyotrophic lateral sclerosis ALS) | 第31-32页 |
| 3.4 Sirt3与年龄相关性听力损失(Age-related hearing loss,AHL) | 第32-33页 |
| 第二部分 自噬在氧化应激性损伤中的作用 | 第33-37页 |
| 1. 自噬概述 | 第33页 |
| 2. 自噬与氧化应激 | 第33-34页 |
| 3. 氧化应激与DNA损伤 | 第34-35页 |
| 4. DNA损伤与自噬 | 第35-37页 |
| 第一部分 Sirt3对过氧化氢引起的氧化应激性损伤的作用 | 第37-57页 |
| 引言 | 第37-38页 |
| 1 材料 | 第38-41页 |
| 1.1 细胞株 | 第38页 |
| 1.2 小干扰RNA (Small interfering RNA;siRNA)的构建 | 第38页 |
| 1.3 慢病毒的构建 | 第38页 |
| 1.4 实验试剂 | 第38-40页 |
| 1.5 主要仪器 | 第40-41页 |
| 2 方法 | 第41-46页 |
| 2.1 体外细胞培养 | 第41页 |
| 2.2 H_2O_2细胞损伤模型的建立 | 第41页 |
| 2.3 细胞活性检测 | 第41页 |
| 2.4 乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)释放检测 | 第41-42页 |
| 2.5 siRNA转染 | 第42页 |
| 2.6 慢病毒转染 | 第42页 |
| 2.7 NAD~+/NADH比值检测 | 第42-43页 |
| 2.8 活性氧(ROS)生成检测 | 第43页 |
| 2.9 脂质过氧化物检测 | 第43页 |
| 2.10 抗氧化酶活性检测 | 第43页 |
| 2.11 细胞线粒体的提取 | 第43-44页 |
| 2.12 线粒体呼吸链复合体活性检测 | 第44页 |
| 2.13 三磷酸腺苷(Adenosine Triphosphate,ATP)合成检测 | 第44页 |
| 2.14 线粒体肿胀检测 | 第44-45页 |
| 2.15 线粒体钙缓冲容积检测 | 第45页 |
| 2.16 流式细胞分选 | 第45页 |
| 2.17 细胞色素c(cytochrome c)释放检测 | 第45页 |
| 2.18 半胱天冬酶-3(Caspase-3)活性检测 | 第45-46页 |
| 2.19 免疫印迹(Western Blot,WB)实验 | 第46页 |
| 2.20 统计学分析 | 第46页 |
| 3 结果 | 第46-53页 |
| 3.1 在H_2O_2损伤的HT22模型中Sirt3的表达变化 | 第46-47页 |
| 3.2 H_2O_2导致的Sirt3表达增高可以促进HT22细胞的存活 | 第47-48页 |
| 3.3 过表达Sirt3后可减轻ROS的产生及脂质过氧化反应 | 第48-49页 |
| 3.4 Sirt3过表达可以保护线粒体呼吸链功能,增加ATP产生 | 第49-50页 |
| 3.5 过表达Sirt3可减轻H_2O_2导致的线粒体功能障碍 | 第50-51页 |
| 3.6 过表达Sirt3可抑制线粒体介导的细胞凋亡 | 第51-53页 |
| 4 讨论 | 第53-57页 |
| 第二部分 Sirt3调节线粒体功能在氧化应激性神经元损伤中的作用 | 第57-74页 |
| 引言 | 第57页 |
| 1 材料 | 第57-61页 |
| 1.1 实验动物 | 第57-58页 |
| 1.2 siRNA的构建(与第一部分材料相同) | 第58页 |
| 1.3 慢病毒的构建(与第一部分材料相同) | 第58页 |
| 1.4 实验试剂 | 第58-60页 |
| 1.5 主要仪器 | 第60页 |
| 1.6 动物实验操作器材 | 第60-61页 |
| 2 方法 | 第61-65页 |
| 2.1 小鼠原代皮层神经元培养 | 第61-62页 |
| 2.2 H_2O_2神经元损伤模型的建立(与第一部分方法相同) | 第62页 |
| 2.3 免疫细胞化学(Immunocytochemistry, ICC) | 第62-63页 |
| 2.4 siRNA转染(与第一部分方法相同) | 第63页 |
| 2.5 慢病毒转染(与第一部分方法相同) | 第63页 |
| 2.6 神经元活性检测(与第一部分方法相同) | 第63页 |
| 2.7 LDH释放检测(与第一部分方法相同) | 第63页 |
| 2.8 细胞色素c释放检测(与第一部分方法相同) | 第63页 |
| 2.9 ROS生成检测(与第一部分方法相同) | 第63页 |
| 2.10 caspase-3活性检测(与第一部分方法相同) | 第63页 |
| 2.11 抗氧化物酶活性检测(与第一部分方法相同) | 第63页 |
| 2.12 钙离子呈像 | 第63页 |
| 2.13 线粒体DNA含量检测 | 第63-64页 |
| 2.14 ATP合成检测(与第一部分方法相同) | 第64页 |
| 2.15 实时荧光定量反转录PCR (RT-qPCR) | 第64-65页 |
| 2.16 WB实验(与第一部分方法相同) | 第65页 |
| 2.17 统计学分析(与第一部分方法相同) | 第65页 |
| 3 结果 | 第65-71页 |
| 3.1 Sirt3在H_2O_2造成的原代皮层神经元损伤模型中的表达变化 | 第65-66页 |
| 3.2 H_2O_2造成的Sirt3表达增高可促进损伤后神经元的存活 | 第66-67页 |
| 3.3 Sirt3过表达可减轻H_2O_2导致的神经元损伤 | 第67-68页 |
| 3.4 Sirt3过表达可以抑制H_2O_2造成的氧化应激性损伤 | 第68-69页 |
| 3.5 Sirt3过表达可以减轻H_2O_2造成的线粒体内钙紊乱 | 第69页 |
| 3.6 Sirt3过表达可在H_2O_2损伤后促进线粒体的生物合成 | 第69-71页 |
| 4 讨论 | 第71-74页 |
| 第三部分 Sirt3调控神经元自噬在氧化应激性神经元损伤中的作用 | 第74-91页 |
| 引言 | 第74-75页 |
| 1 材料 | 第75-78页 |
| 1.1 实验动物(与第二部分材料相同) | 第75页 |
| 1.2 慢病毒的构建(与第二部分材料相同) | 第75页 |
| 1.3 实验试剂 | 第75-77页 |
| 1.4 主要仪器 | 第77-78页 |
| 1.5 动物实验操作器材(与第二部分材料相同) | 第78页 |
| 2 方法 | 第78-80页 |
| 2.1 小鼠原代皮层神经元培养(与第二部分方法相同) | 第78页 |
| 2.2 神经元氧糖剥夺(oxygen and glucose deprivation,OGD)模型的建立 | 第78页 |
| 2.3 慢病毒转染(与第一部分方法相同) | 第78页 |
| 2.4 细胞活性检测(与第一部分方法相同) | 第78页 |
| 2.5 TUNEL染色 | 第78页 |
| 2.6 Caspase-3活性检测(与第一部分方法相同) | 第78页 |
| 2.7 透射电子显微镜检测 | 第78-79页 |
| 2.8 ROS-GLO法H_2O_2检测 | 第79页 |
| 2.9 通过氨基三唑介导过氧化氢酶灭活测定细胞内H_2O_2含量 | 第79页 |
| 2.10 线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)检测 | 第79-80页 |
| 2.11 ATP合成检测(与第一部分方法相同) | 第80页 |
| 2.12 免疫细胞化学(immunocytochemistry,ICC) (与第二部分方法相同) | 第80页 |
| 2.13 WB实验(与第一部分方法相同) | 第80页 |
| 2.14 统计学分析(与第一部分方法相同) | 第80页 |
| 3 结果 | 第80-86页 |
| 3.1 Sirt3对皮质神经元缺血有保护作用 | 第80-81页 |
| 3.2 Sirt3对线粒体功能及细胞生物学功能有保护作用 | 第81-83页 |
| 3.3 Sirt3参与调节神经元缺血性损伤后的神经元自噬 | 第83-84页 |
| 3.4 神经元自噬与Sirt3的神经保护作用密切相关 | 第84-85页 |
| 3.5 Sirt3通过AMPK-mTOR途径发挥其保护作用 | 第85-86页 |
| 4 讨论 | 第86-91页 |
| 第四部分 Sirt1-Sirt3轴通过影响血脑屏障通透性在氧化应激性神经损伤中的作用 | 第91-105页 |
| 引言 | 第91-92页 |
| 1 材料 | 第92-94页 |
| 1.1 细胞系 | 第92页 |
| 1.2 siRNA的构建 | 第92页 |
| 1.3 实验试剂 | 第92-93页 |
| 1.4 主要仪器 | 第93-94页 |
| 2 方法 | 第94-95页 |
| 2.1 体外血脑屏障(blood-brain barrier, BBB)模型的构建 | 第94-95页 |
| 2.2 OGD氧化应激性损伤模型的建立(与第三部分方法相同) | 第95页 |
| 2.3 siRNA转染(与第一部分方法相同) | 第95页 |
| 2.4 血脑屏障通透性检测 | 第95页 |
| 2.5 流式细胞分选(与第一部分方法相同) | 第95页 |
| 2.6 线粒体分离和提取(与第一部分方法相同) | 第95页 |
| 2.7 线粒体中ROS含量的检测 | 第95页 |
| 2.8 WB实验(与第一部分方法相同) | 第95页 |
| 2.9 统计学分析(与第一部分方法相同) | 第95页 |
| 3 结果 | 第95-101页 |
| 3.1 Sirt1与Sirt3对氧化应激性损伤后BBB通透性具有相反的作用 | 第95-96页 |
| 3.2 在OGD损伤模型中,Sirt1通过AMPK-PGC1信号途径调控Sirt3的表达 | 第96-98页 |
| 3.3 Sirt1-Sirt3轴可影响OGD介导的BBB通透性增高 | 第98-99页 |
| 3.4 在BBB模型中,Sirt1-Sirt3轴可调控OGD介导的细胞损伤 | 第99-100页 |
| 3.5 线粒体ROS产生参与了Sirt1-Sirt3轴对OGD介导的BBB通透性及细胞损伤的调控 | 第100-101页 |
| 4 讨论 | 第101-105页 |
| 小结 | 第105-106页 |
| 参考文献 | 第106-124页 |
| 个人简历和研究成果 | 第124-126页 |
| 致谢 | 第126页 |
