| 摘要 | 第11-13页 |
| ABSTRACT | 第13-14页 |
| 缩略词 | 第15-16页 |
| 第一章 前言 | 第16-44页 |
| 1 乙型肝炎病毒 | 第16-20页 |
| 1.1 病毒学分类 | 第16页 |
| 1.2 病毒结构 | 第16-17页 |
| 1.3 基因组结构 | 第17-19页 |
| 1.4 生命周期 | 第19-20页 |
| 1.5 病毒基因型 | 第20页 |
| 2 乙型肝炎病毒感染 | 第20-27页 |
| 2.1 HBV的全球流行情况 | 第20-24页 |
| 2.2 HBV的传播方式 | 第24页 |
| 2.3 HBV感染的预防 | 第24页 |
| 2.4 HBV感染的免疫致病机理 | 第24-25页 |
| 2.5 乙肝病毒感染的自然史 | 第25-27页 |
| 3 乙型肝炎病毒感染的治疗 | 第27-35页 |
| 3.1 CHB抗病毒治疗目标 | 第28-29页 |
| 3.2 CHB抗病毒治疗适应证 | 第29-30页 |
| 3.3 CHB抗病毒治疗药物 | 第30-31页 |
| 3.4 CHB抗病毒治疗应答与疗效预测 | 第31-35页 |
| 3.4.1 抗病毒治疗应答 | 第31-32页 |
| 3.4.2 抗病毒治疗效果 | 第32-34页 |
| 3.4.3 PegIFNα抗病毒治疗前效果预测 | 第34-35页 |
| 4 干扰素刺激基因(ISGs) | 第35-42页 |
| 4.1 ISGs的诱导产生 | 第35-36页 |
| 4.2 干扰素刺激基因的多重生物学功能 | 第36-38页 |
| 4.2.1 干扰素刺激基因(ISGs)的抗病毒功能 | 第36-37页 |
| 4.2.2 干扰素刺激基因(ISGs)介导的免疫调控 | 第37-38页 |
| 4.3 ISGs的表达在病毒性肝炎治疗中的临床意义 | 第38-41页 |
| 4.4 OAS2 | 第41页 |
| 4.5 USP18 | 第41-42页 |
| 5 研究的目的、意义和思路 | 第42-44页 |
| 第二章 材料与方法 | 第44-60页 |
| 1 主要仪器 | 第44-46页 |
| 2 主要耗材 | 第46-47页 |
| 3 试剂与实验材料 | 第47-50页 |
| 3.1 主要试剂 | 第47-49页 |
| 3.2 常用试剂配制 | 第49-50页 |
| 3.2.1 细胞培养基 | 第49页 |
| 3.2.2 细胞生物学实验用溶液 | 第49页 |
| 3.2.3 分子克隆实验用溶液 | 第49-50页 |
| 3.2.4 核酸提取与扩增实验用溶液 | 第50页 |
| 3.3 实验用全血标本 | 第50页 |
| 3.4 分子克隆用菌株 | 第50页 |
| 4 主要实验方法 | 第50-60页 |
| 4.1 PBMC标本处理及检测 | 第50-53页 |
| 4.1.1 CHB患者全血标本的收集 | 第50-51页 |
| 4.1.2 CHB患者全血PBMC的提取 | 第51页 |
| 4.1.3 PBMC不同条件下刺激 | 第51-52页 |
| 4.1.4 刺激后PBMC收取及冻存 | 第52页 |
| 4.1.5 PBMC的mRNA提取 | 第52页 |
| 4.1.6 mRNA反转录 | 第52-53页 |
| 4.1.7 第一部分研究所用USP18实时荧光定量PCR (real time qPCR)体系 | 第53页 |
| 4.2 第二部分研究所用实时荧光定量PCR(TaqMan法)体系 | 第53-57页 |
| 4.2.1 靶标基因引物与探针设计原则 | 第55-56页 |
| 4.2.2 靶标基因引物与探针设计 | 第56页 |
| 4.2.3 靶标基因质粒标准品的制备 | 第56页 |
| 4.2.4 灵敏度实验 | 第56页 |
| 4.2.5 探针、引物用量的优化 | 第56-57页 |
| 4.2.6 Real-time qPCR的定量方法 | 第57页 |
| 4.3 Real tmie RT-qPCR体系的建立 | 第57-58页 |
| 4.4 全血标本刺激体系 | 第58页 |
| 4.5 全血标本刺激后的收取及冻存 | 第58-59页 |
| 4.6 全血标本mRNA的提取及纯化 | 第59页 |
| 4.7 生物信息学及数据处理的统计学分析方法 | 第59-60页 |
| 第三章 结果与分析 | 第60-83页 |
| 1 PBMC中USP18、OAS2 mRNA水平及临床意义 | 第60-74页 |
| 1.1 CHB病人静脉全血标本的收集 | 第60页 |
| 1.2 CHB患者的临床特征 | 第60-62页 |
| 1.3 USP18、OAS2 mRNA水平在不同治疗应答组的差异分析 | 第62-64页 |
| 1.4 USP18、OAS2 mRNA水平治疗前预测IFNα治疗效果诊断价值 | 第64-66页 |
| 1.5 USP18、OAS2 mRNA水平及CHB患者基线1临床特征与IFNα治疗结局相关性分析 | 第66-73页 |
| 1.6 小结 | 第73-74页 |
| 2 干扰素刺激基因USP18 real-time RT-qPCR体系建立 | 第74-79页 |
| 2.1 USP18用于real-time RT-qPCR的引物及探针设计 | 第74页 |
| 2.2 USP18质粒标准模板的制备 | 第74-76页 |
| 2.3 USP18 real time RT-qPCR体系的建立及灵敏度检测 | 第76-77页 |
| 2.4 USP18扩增效率与β-actin扩增效率的比较 | 第77-78页 |
| 2.5 小结 | 第78-79页 |
| 3 CHB患者静脉全血中USP18 mRNA水平检测 | 第79-83页 |
| 3.1 静脉全血标本收集 | 第79页 |
| 3.2 全血标本mRNA提取纯化方法的建立 | 第79-83页 |
| 3.2.1 mRNA浓度检沏测 | 第80页 |
| 3.2.2 mRNA为模板进行real time RT-qPCR检测 | 第80页 |
| 3.2.3 mRNA提取时间及试剂费用 | 第80-81页 |
| 3.2.4 全胁标本USP18 mRNA水、F检测 | 第81-83页 |
| 第四章 讨论 | 第83-87页 |
| 1 开展IFNα治疗前疗效预测具有重要临床意义 | 第83页 |
| 2 宿主特异性免疫应答指标具有较好的IFNα疗效预测功能 | 第83-85页 |
| 3 以外周血作为检测标本更具有实用价值 | 第85-87页 |
| 第五章 总结与展望 | 第87-89页 |
| 1 总结 | 第87页 |
| 2 展望 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-101页 |
| 在校期间科研成果 | 第101-102页 |
| 致谢 | 第102页 |
