| 摘要 | 第3-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| Chapter 1 Introduction | 第11-25页 |
| 1.1 Natural encapsulation using protein capsids | 第11-13页 |
| 1.2 Engineered Capsids as containers | 第13-18页 |
| 1.3 Lumazine synthase | 第18-22页 |
| 1.4 Aim of this thesis | 第22-25页 |
| Chapter 2 Materials and Methods | 第25-57页 |
| 2.1 Ecoli cells and plasmids | 第25页 |
| 2.2 Reagents | 第25-27页 |
| 2.3 Primers | 第27-28页 |
| 2.4 Instruments | 第28页 |
| 2.5 Plasmid construction | 第28-33页 |
| 2.5.1 Materials for plasmid of GFP variants | 第28-30页 |
| 2.5.2 Methods | 第30-33页 |
| 2.6 Protein production and purification | 第33-39页 |
| 2.6.1 Materials | 第33-34页 |
| 2.6.2 Methods | 第34-39页 |
| 2.7 SDS-PAGE | 第39-41页 |
| 2.7.1 Materials for SDS-PAGE | 第39页 |
| 2.7.2 Method for SDS-PAGE | 第39-40页 |
| 2.7.3 Yield detection by SDS-PAGE | 第40页 |
| 2.7.4 Measurement of protein concentration | 第40-41页 |
| 2.8 Analytical size-exclusion chromatography | 第41页 |
| 2.9 Fluorescence spectroscopy | 第41-43页 |
| 2.10 UV detection for loading yield | 第43-44页 |
| 2.11 MS detection of co-purifying proteins | 第44页 |
| 2.12 The characterization of BsLS with His6 tag | 第44-47页 |
| 2.12.1 Site directed mutagenesis | 第44-45页 |
| 2.12.2 BsLS-H6 protein production and purification | 第45-47页 |
| 2.12.3 SDS-PAGE analysis for BsLS-H6 capsid loading | 第47页 |
| 2.13 ELISA Detection of GFP11 | 第47-48页 |
| 2.14 Western blotting analysis for Abrin A-HA-BsRS11 | 第48-49页 |
| 2.15 Guest release from the capsid | 第49-50页 |
| 2.16 TEM | 第50-51页 |
| 2.17 Attempts at capsid loading in vitro | 第51-52页 |
| 2.18 AaLS-switch-pH capsid become pentamer | 第52页 |
| 2.19 AaLS-switch-pH pentamer go back to capsid | 第52页 |
| 2.20 Phage display | 第52-57页 |
| Chapter 3 Results | 第57-85页 |
| 3.1 Design of fusion proteins | 第57-58页 |
| 3.2 Analysis of capsid-guest complexes | 第58-80页 |
| 3.2.1 SEC and A280 analysis | 第58-60页 |
| 3.2.2 Fluorescence spectroscopy | 第60-65页 |
| 3.2.3 SDS-PAGE analysis | 第65-70页 |
| 3.2.4 UV detection for loading yield | 第70-71页 |
| 3.2.5 Detection of GFP by ELISA | 第71页 |
| 3.2.6 The specificity and generality of the encapsulation system | 第71-74页 |
| 3.2.7 Guest release from the capsid | 第74-76页 |
| 3.2.8 TEM | 第76-78页 |
| 3.2.9 Attempted in vitro loading | 第78-80页 |
| 3.3 Selection of encapsulation peptide tags for AaLS | 第80-85页 |
| 3.3.1 Confirming of AaLS-switch-pH | 第80-81页 |
| 3.3.2 Phage display selection round | 第81-85页 |
| Chapter 4 Discussion | 第85-99页 |
| 4.1 The loading yield of other engineering capsids | 第85页 |
| 4.2 The encapsulation yield of GFPs | 第85-86页 |
| 4.3 The specificity and generality of the encapsulation system | 第86-87页 |
| 4.4 The analysis of 24 LS and RS | 第87-95页 |
| 4.5 The mild release condition of BsLS capsid | 第95-96页 |
| 4.6 conclusion and future work | 第96-99页 |
| References | 第99-107页 |
| Publication in scientific research | 第107-109页 |
| Acknowledgements | 第109页 |
