| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11页 |
| 前言 | 第12-27页 |
| 1 孤儿受体Nur77 | 第12-16页 |
| 1.1 Nur77的发现 | 第12页 |
| 1.2 Nur77的结构 | 第12-13页 |
| 1.2.1 TAD | 第13页 |
| 1.2.2 DBD | 第13页 |
| 1.2.3 LBD | 第13页 |
| 1.3 Nur77的表达与分布 | 第13-14页 |
| 1.4 Nur77与蛋白的相互作用 | 第14页 |
| 1.5 Nur77的磷酸化 | 第14-15页 |
| 1.6 Nur77的生物学功能 | 第15-16页 |
| 1.6.1 Nur77与增殖 | 第15页 |
| 1.6.2 Nur77与凋亡 | 第15-16页 |
| 2 DNA甲基化修饰 | 第16-21页 |
| 2.1 DNA甲基化的发现 | 第16-17页 |
| 2.2 甲基转移酶 | 第17页 |
| 2.3 从头甲基化的定位机制 | 第17-20页 |
| 2.3.1 PWWP结构与从头甲基化靶向机制 | 第18页 |
| 2.3.2 转录抑制因子与从头甲基化靶向机制 | 第18-19页 |
| 2.3.3 RNAi与从头甲基化靶向机制 | 第19-20页 |
| 2.4 DNA甲基化的生物学功能 | 第20-21页 |
| 2.4.1 DNA甲基化抑制基因表达 | 第20页 |
| 2.4.2 DNA甲基化抑制转录延伸 | 第20-21页 |
| 3 锌指转录因子Snail | 第21-26页 |
| 3.1 Snail的发现 | 第21-22页 |
| 3.2 Snail的结构 | 第22页 |
| 3.3 Snail活性的调控 | 第22页 |
| 3.4 Snail的生物学功能 | 第22-26页 |
| 3.4.1 Snail诱导EMT | 第22-23页 |
| 3.4.2 Snail在中胚层形成和诱导细胞运动的作用 | 第23-24页 |
| 3.4.4 Snail调控细胞粘附 | 第24-25页 |
| 3.4.5 Snail是肿瘤进程的标志物和抗侵袭药物靶点 | 第25页 |
| 3.4.6 Snail与纤维化和伤口愈合 | 第25页 |
| 3.4.7 Snail影响细胞增殖和存活 | 第25-26页 |
| 4 本文研究的目的、思路及意义 | 第26-27页 |
| 材料与方法 | 第27-43页 |
| 1 实验材料 | 第27-29页 |
| 1.1 主要试剂 | 第27-28页 |
| 1.2 主要仪器 | 第28-29页 |
| 1.3 细胞株 | 第29页 |
| 1.4 小鼠品系 | 第29页 |
| 1.5 组织样品 | 第29页 |
| 2 实验方法 | 第29-43页 |
| 2.1 质粒构建 | 第29-33页 |
| 2.1.1 扩大目的基因 | 第29-30页 |
| 2.1.2 胶回收 | 第30页 |
| 2.1.3 酶切鉴定 | 第30-31页 |
| 2.1.4 连接 | 第31页 |
| 2.1.5 质粒转化 | 第31页 |
| 2.1.6 质粒提取 | 第31-32页 |
| 2.1.6.1 小提 | 第31-32页 |
| 2.1.6.2 中提 | 第32页 |
| 2.1.7 感受态制备 | 第32-33页 |
| 2.2 细胞培养 | 第33-34页 |
| 2.2.1 复苏 | 第33页 |
| 2.2.2 传代 | 第33-34页 |
| 2.2.3 冻存 | 第34页 |
| 2.3 细胞转染 | 第34页 |
| 2.4 制备蛋白样品 | 第34-35页 |
| 2.5 Western Blot | 第35页 |
| 2.6 细胞/组织中RNA的提取 | 第35-36页 |
| 2.6.1 样品准备 | 第35-36页 |
| 2.6.2 RNA提取 | 第36页 |
| 2.6.3 逆转录 | 第36页 |
| 2.7 荧光素酶活性检测 | 第36-37页 |
| 2.8 甲基化实验 | 第37-38页 |
| 2.9 染色质免疫共沉淀(ChIP) | 第38-39页 |
| 2.10 病毒包装和感染 | 第39-40页 |
| 2.11 石蜡切片 | 第40-42页 |
| 2.11.1 肝脏石蜡包埋 | 第40页 |
| 2.11.2 免疫组化 | 第40-42页 |
| 2.11.3 IRS免疫组化评分方法 | 第42页 |
| 2.12 小鼠模型 | 第42页 |
| 2.13 克隆形成实验 | 第42-43页 |
| 结果与分析 | 第43-63页 |
| 1 肝癌组织中Nur77基因表达水平低于正常肝组织 | 第43-46页 |
| 2 Nur77抑制肝癌细胞的增殖 | 第46-51页 |
| 3 Nur77启动子在肝癌组织及细胞中发生甲基化 | 第51-53页 |
| 4 Snail调控Nur77启动子的甲基化 | 第53-60页 |
| 5 Snail招募去乙酰化酶和DNA甲基转移酶至Nur77启动子 | 第60-63页 |
| 讨论与总结 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-75页 |
| 在学期间发表论文 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
