| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-23页 |
| 1.1 植物雄性不育概述 | 第10-15页 |
| 1.1.1 线粒体与CMS的关系 | 第10-13页 |
| 1.1.1.1 线粒体在CMS产生中起的作用 | 第10-11页 |
| 1.1.1.2 线粒体产能缺陷导致雄性不育 | 第11-13页 |
| 1.1.2 线粒体中PPR蛋白与RNA的编辑 | 第13-15页 |
| 1.2 CMS恢复机制的研究 | 第15-19页 |
| 1.2.1 CMS在基因组水平上的恢复 | 第16页 |
| 1.2.2 CMS在转录后水平的恢复 | 第16-18页 |
| 1.2.3 CMS在翻译或翻译后水平上的恢复 | 第18页 |
| 1.2.4 CMS在代谢水平上的恢复 | 第18-19页 |
| 1.3 红莲型水稻CMS/Rf的研究 | 第19-20页 |
| 1.4 CMS在水稻育种上的应用 | 第20-22页 |
| 1.4.1 CMS育种的优点 | 第20-21页 |
| 1.4.2 三系育种与CMS的利用 | 第21页 |
| 1.4.3 分子标记促进CMS杂交育种 | 第21-22页 |
| 1.5 本研究的主要内容、目的及意义 | 第22-23页 |
| 第二章 三种同质同核近等基因恢复系的构建 | 第23-39页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 实验材料与方法 | 第23-24页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第23页 |
| 2.2.2 主要仪器 | 第23-24页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第24页 |
| 2.2.4 引物设计 | 第24页 |
| 2.3 方法 | 第24-31页 |
| 2.3.1 基因组DNA的提取及PCR检测 | 第24-25页 |
| 2.3.2 PCR检测 | 第25-27页 |
| 2.3.3 水稻田间杂交 | 第27-28页 |
| 2.3.4 花粉育性及结实率的统计 | 第28页 |
| 2.3.5 不育基因表达量分析 | 第28-31页 |
| 2.3.5.1 总RNA的提取及电泳检测 | 第28-29页 |
| 2.3.5.2 总RNA的反转以及检测 | 第29-30页 |
| 2.3.5.3 RT-pcr检测表达量 | 第30-31页 |
| 2.4 结果及分析 | 第31-37页 |
| 2.4.1 水稻不育系YTA的分子鉴定 | 第31-32页 |
| 2.4.2 同质同核近等基因恢复系的构建 | 第32-36页 |
| 2.4.2.1 近等基因恢复系的分子鉴定 | 第32-34页 |
| 2.4.2.2 花粉育性鉴定及结实率统计 | 第34-36页 |
| 2.4.3 不育基因orfH79近等基因恢复系中表达的初步分析 | 第36-37页 |
| 2.4.3.1 YTA和近等基因恢复系中总RNA的提取 | 第36页 |
| 2.4.3.2 cDNA的检测 | 第36-37页 |
| 2.3.3.3 不育基因orfH79的表达量分析 | 第37页 |
| 2.5 小结与讨论 | 第37-39页 |
| 第三章 3种近等基因恢复系对不育系L-orfH79育性恢复的初步分析 | 第39-54页 |
| 3.1 前言 | 第39页 |
| 3.2 实验材料与方法 | 第39-40页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第39页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第39-40页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第40页 |
| 3.2.4 引物设计 | 第40页 |
| 3.3 实验方法 | 第40-45页 |
| 3.3.1 近等基因系的分子鉴定 | 第40-41页 |
| 3.3.1.1 基因组DNA的提取 | 第40页 |
| 3.3.1.2 PCR检测 | 第40-41页 |
| 3.3.2 Southern杂交检测 | 第41-44页 |
| 3.3.2.1 水稻基因组DNA的大量提取 | 第41-42页 |
| 3.3.2.2 DNA浓度的测定及调整 | 第42页 |
| 3.3.2.3 酶切 | 第42页 |
| 3.3.2.3 .1转膜 | 第42-43页 |
| 3.3.2.3 .2杂交 | 第43页 |
| 3.3.2.3 .3探针准备 | 第43页 |
| 3.3.2.3 .4洗膜及孵育 | 第43-44页 |
| 3.3.2.3 .5曝光 | 第44页 |
| 3.3.3 水稻之间的田间杂交 | 第44-45页 |
| 3.3.4 花粉育性及结实率的统计 | 第45页 |
| 3.3.5 不育基因表达量分析 | 第45页 |
| 3.3.5.1 水稻穗子总RNA的提取及电泳检测 | 第45页 |
| 3.3.5.2 RNA反转成cDNA以及cDNA的检测 | 第45页 |
| 3.3.5.3 RT-PCR检测表达量 | 第45页 |
| 3.4 结果及分析 | 第45-52页 |
| 3.4.1 近等基因不育系L-orfH79的鉴定 | 第45-46页 |
| 3.4.2 Southern杂交 | 第46-47页 |
| 3.4.3 近等基因恢复系的鉴定 | 第47-48页 |
| 3.4.4 杂种后代的分子鉴定 | 第48页 |
| 3.4.5 杂种一代花粉育性及结实率的统计分析 | 第48-51页 |
| 3.4.6 杂种一代幼穗RNA以及cDNA检测 | 第51-52页 |
| 3.5 小结与讨论 | 第52-54页 |
| 第四章 新型胞质不育系L-orf216的初步选育 | 第54-68页 |
| 4.1 引言 | 第54页 |
| 4.2 实验材料、试剂及仪器 | 第54-56页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第54页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第54-55页 |
| 4.2.3 试剂的配制 | 第55页 |
| 4.2.4 主要仪器和设备 | 第55页 |
| 4.2.5 引物序列 | 第55-56页 |
| 4.3 实验方法 | 第56-61页 |
| 4.3.1 亚洲栽培稻中orf216的PCR扩增与回收 | 第56-57页 |
| 4.3.1.1 水稻总DNA的提取 | 第56页 |
| 4.3.1.2 PCR扩增鉴定 | 第56页 |
| 4.3.1.3 PCR产物的纯化 | 第56-57页 |
| 4.3.2 感受态细胞的制备 | 第57-58页 |
| 4.3.3 orf216基因的克隆 | 第58-61页 |
| 4.3.3.1 PCR产物与PMD18T载体的连接 | 第58页 |
| 4.3.3.2 连接产物热击转化大肠杆菌DH5α | 第58-59页 |
| 4.3.3.3 组质粒的鉴定与阳性菌株的保存 | 第59页 |
| 4.3.3.3 .1质粒DNA提取及克隆过程中所需试剂的配制 | 第59页 |
| 4.3.3.3 .2阳性质粒提取 | 第59-60页 |
| 4.3.3.3 .3质粒的检测 | 第60页 |
| 4.3.3.3 .4质粒的酶切检测 | 第60-61页 |
| 4.3.4 orf216序列比对 | 第61页 |
| 4.3.5 水稻间的人工杂交 | 第61页 |
| 4.3.6 花粉育性及结实率的统计 | 第61页 |
| 4.4 结果分析 | 第61-66页 |
| 4.4.1 栽培稻中orf216的PCR检测 | 第61-62页 |
| 4.4.2 TA-orf216克隆载体的构建 | 第62-63页 |
| 4.4.2.1 重组质粒的检测 | 第62页 |
| 4.4.2.2 重组质粒的单酶切检测 | 第62-63页 |
| 4.4.3 栽培稻中orf216序列与红莲水稻中orf216序列比对 | 第63-64页 |
| 4.4.4 育性和结实率统计 | 第64-66页 |
| 4.4.4.1 部分品种杂种一代与母本花粉镜检结果 | 第64-65页 |
| 4.4.4.2 杂种一代育性统计 | 第65-66页 |
| 4.5 结果与讨论 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第80-81页 |
| 在读期间参与的科研课题及学术活动 | 第81页 |
