| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 缩略词 | 第14-16页 |
| 第一章 前言 | 第16-34页 |
| 1 大肠杆菌表达系统概述 | 第16-20页 |
| 1.1 外源基因在大肠杆菌表达系统表达的优劣势 | 第16-17页 |
| 1.2 载体、宿主菌和表达条件的选择 | 第17-20页 |
| 1.2.1 载体选择 | 第17-18页 |
| 1.2.2 宿主菌的选择 | 第18-19页 |
| 1.2.3 表达条件的选择 | 第19-20页 |
| 1.3 影响外源蛋白可溶性表达的因素 | 第20页 |
| 2 测序技术概述 | 第20-24页 |
| 2.1 基于Sanger测序法的一代测序 | 第20-21页 |
| 2.2 基于边合成边测序的二代测序 | 第21-22页 |
| 2.3 基于单分子测序的三代测序 | 第22-24页 |
| 3 转录组测序技术(RNA-Seq) | 第24-32页 |
| 3.1 转录组测序技术概述 | 第24-25页 |
| 3.2 转录组数据分析步骤 | 第25-31页 |
| 3.2.1 实验设计与上机 | 第25-26页 |
| 3.2.2 数据预处理 | 第26页 |
| 3.2.3 读段定位 | 第26-28页 |
| 3.2.4 转录本识别与定量 | 第28-29页 |
| 3.2.5 差异基因表达分析 | 第29-30页 |
| 3.2.6 差异基因功能富集分析 | 第30-31页 |
| 3.3 转录组测序的优势与局限性 | 第31-32页 |
| 4 本论文研究内容,目的与意义 | 第32-34页 |
| 第二章 材料与方法 | 第34-45页 |
| 1 材料 | 第34-37页 |
| 1.1 主要仪器 | 第34-35页 |
| 1.2 主要试剂与材料 | 第35页 |
| 1.2.1 E.coli菌株 | 第35页 |
| 1.2.2 质粒 | 第35页 |
| 1.2.3 主要耗材 | 第35页 |
| 1.3 工作站和软件 | 第35-36页 |
| 1.4 常用溶液及试剂配制 | 第36-37页 |
| 1.4.1 蛋白电泳相关试剂 | 第36页 |
| 1.4.2 质粒及样品核酸提取试剂 | 第36页 |
| 1.4.3 PCR扩增及分子克隆用试剂 | 第36-37页 |
| 1.4.4 常规分子生物学实验溶液的配制 | 第37页 |
| 2 方法 | 第37-45页 |
| 2.1 大肠杆菌表达系统的构建 | 第37-42页 |
| 2.1.1 PCR扩增反应以及DNA片段的回收 | 第37-38页 |
| 2.1.2 DNA片段的理解、转化以及质粒的裂解提取 | 第38-40页 |
| 2.1.3 质粒的酶切鉴定方法 | 第40页 |
| 2.1.4 C2566菌株的培养以及转录组提取 | 第40-41页 |
| 2.1.5 丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第41-42页 |
| 2.2 RNA的提取方法 | 第42页 |
| 2.3 RNA的建库方法 | 第42页 |
| 2.4 转录组数据分析方法 | 第42-44页 |
| 2.5 qRT-PCR检测 | 第44-45页 |
| 第三章 结果与分析 | 第45-65页 |
| 1 转录组测序数据质量评估与数据过滤 | 第45-47页 |
| 2 测序序列与参考基因组定位 | 第47-49页 |
| 3 基因整体表达水平分析 | 第49-51页 |
| 4 转录组测序整体质量评估 | 第51-53页 |
| 5 差异表达基因分析 | 第53-55页 |
| 6 差异基因的GO富集分析 | 第55-59页 |
| 7 差异基因的KEGG富集分析 | 第59-64页 |
| 8 qRT-PCR验证硫代谢相关基因差异表达 | 第64-65页 |
| 第四章 讨论 | 第65-70页 |
| 1 温度对大肠杆菌C2566转录组整体表达情况的影响 | 第65-66页 |
| 2 温度对大肠杆菌C2566运动相关基因的影响 | 第66-67页 |
| 3 温度对大肠杆菌C2566硫代谢相关基因的影响 | 第67-70页 |
| 小结与展望 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-79页 |
| 致谢 | 第79-81页 |
| 附录 | 第81页 |
| 在校期间发表成果 | 第81页 |
| 在校期间参与的科研项目 | 第81页 |