| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第1章 引言 | 第11-19页 |
| 1.1 拟穴青蟹简介 | 第11页 |
| 1.2 甲壳动物眼柄神经激素简介 | 第11-12页 |
| 1.3 甲壳动物蜕皮抑制激素研究概述 | 第12-14页 |
| 1.4 甲壳动物高糖激素研究概述 | 第14-15页 |
| 1.5 真核生物启动子的研究概述 | 第15-18页 |
| 1.5.1 真核生物启动子的结构 | 第15-16页 |
| 1.5.2 启动子与转录因子 | 第16页 |
| 1.5.3 真核生物启动子的研究方法 | 第16-18页 |
| 1.6 研究目的和意义 | 第18-19页 |
| 第2章 材料与方法 | 第19-35页 |
| 2.1 材料 | 第19-24页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第19页 |
| 2.1.2 载体、菌株和细胞株 | 第19页 |
| 2.1.3 试剂盒 | 第19页 |
| 2.1.4 主要仪器及设备 | 第19-20页 |
| 2.1.5 缓冲液和常用试剂的配制 | 第20-21页 |
| 2.1.6 引物 | 第21-24页 |
| 2.2 方法 | 第24-35页 |
| 2.2.1 青蟹基因组DNA的提取 | 第24-25页 |
| 2.2.2 GenomeWalking扩增5’侧翼区序列 | 第25-27页 |
| 2.2.3 Tail-PCR扩增5’侧翼区序列 | 第27-28页 |
| 2.2.4 目的片段的纯化 | 第28页 |
| 2.2.5 纯化后的目的片段与载体连接 | 第28页 |
| 2.2.6 感受态细胞的转化及筛选 | 第28页 |
| 2.2.7 载体插入片段的检测与测序 | 第28-29页 |
| 2.2.8 启动子的生物信息学分析 | 第29页 |
| 2.2.9 拟穴青蟹mih基因启动子区微卫星序列的扩增 | 第29页 |
| 2.2.10 启动子不同长度片段表达载体的构建 | 第29-31页 |
| 2.2.11 表达载体pEGFP-MIH、pEGFP-CHH的构建 | 第31页 |
| 2.2.12 启动子活性分析 | 第31-35页 |
| 第3章 结果 | 第35-53页 |
| 3.1 启动子的克隆和生物信息学分析 | 第35-38页 |
| 3.1.1 拟穴青蟹mih基因5’调控区的克隆和生物信息学分析 | 第35-37页 |
| 3.1.2 拟穴青蟹chh基因5’调控区的克隆和生物信息学分析 | 第37-38页 |
| 3.2 拟穴青蟹mih基因启动子区微卫星序列的扩增 | 第38-39页 |
| 3.3 启动子不同长度片段表达载体的构建 | 第39-42页 |
| 3.3.1 不同长度片段的扩增 | 第39-40页 |
| 3.3.2 双荧光素酶报告基因表达载体双酶切验证 | 第40-42页 |
| 3.4 转录起始位点的确定 | 第42-44页 |
| 3.4.1 拟穴青蟹mih基因转录起始位点的确定 | 第42-43页 |
| 3.4.2 拟穴青蟹chh基因转录起始位点的确定 | 第43-44页 |
| 3.5 表达载体PEGFP-MIH、PEGFP-CHH的表达情况 | 第44-45页 |
| 3.5.1 表达载体pEGFP-MIH的表达情况 | 第44页 |
| 3.5.2 表达载体pEGFP-CHH的表达情况 | 第44-45页 |
| 3.6 启动子活性分析 | 第45-47页 |
| 3.6.1 拟穴青蟹mih基因启动子的活性分析 | 第45-46页 |
| 3.6.2 拟穴青蟹chh基因启动子的活性分析 | 第46-47页 |
| 3.7 位点突变及位点缺失分析 | 第47-51页 |
| 3.7.1 位点突变分析 | 第47-50页 |
| 3.7.2 位点缺失分析 | 第50-51页 |
| 3.8 拟穴青蟹mih基因启动子区微卫星序列(CA)n的多态性对启动子活性的影响 | 第51-53页 |
| 第4章 讨论 | 第53-58页 |
| 4.1 转录调控区域生物信息学的分析讨论 | 第53-54页 |
| 4.2 启动子活性分析 | 第54-56页 |
| 4.3 影响拟穴青蟹mih基因启动子活性三个因素的讨论 | 第56-58页 |
| 4.3.1 转录因子NF-κappaB的讨论 | 第56页 |
| 4.3.2 转录因子RAP1的讨论 | 第56-57页 |
| 4.3.3 拟穴青蟹mih基因启动子区微卫星序列多态性的讨论 | 第57-58页 |
| 第5章 结论与展望 | 第58-59页 |
| 5.1 结论 | 第58页 |
| 5.2 展望 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
