| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第11-18页 |
| 1.1 蛋白质与 DNA 相互作用 | 第11-14页 |
| 1.1.1 研究蛋白质与 DNA 相互作用的方法 | 第11-13页 |
| 1.1.2 蛋白质与 DNA 结合位点的预测 | 第13-14页 |
| 1.2 无乳链球菌 | 第14-15页 |
| 1.3 GlnR 转录调控因子与 DNA 结合的研究 | 第15-16页 |
| 1.4 研究目的及意义 | 第16页 |
| 1.5 研究的主要内容 | 第16-18页 |
| 第二章 GlnR 因子关键 DNA 结合位点的预测 | 第18-25页 |
| 2.1 实验方法 | 第18-19页 |
| 2.1.1 GlnR 因子与 DNA 结合位点的预测 | 第18页 |
| 2.1.2 GlnR-DNA 结构复合物的预测及其关键位点的预测 | 第18-19页 |
| 2.2 预测结果及分析 | 第19-23页 |
| 2.2.1 GlnR 因子与 DNA 结合位点的预测结果 | 第19-20页 |
| 2.2.2 GlnR-DNA 三维结构复合物的预测 | 第20-23页 |
| 2.3 结论与讨论 | 第23-25页 |
| 第三章 glnR 突变基因克隆及其重组表达载体的构建 | 第25-39页 |
| 3.1 实验材料 | 第25-27页 |
| 3.1.1 菌种及质粒 | 第25页 |
| 3.1.2 药品及仪器 | 第25页 |
| 3.1.3 培养基的配制 | 第25-26页 |
| 3.1.4 主要试剂及其配制方法 | 第26-27页 |
| 3.2 实验方法 | 第27-33页 |
| 3.2.1 重叠 PCR 构建定点突变基因 | 第27-32页 |
| 3.2.1.1 引物设计 | 第27-28页 |
| 3.2.1.2 glnR 基因定点突变 | 第28-29页 |
| 3.2.1.3 pMD18-glnR 构建 | 第29-31页 |
| 3.2.1.4 验证实验及测序 | 第31-32页 |
| 3.2.2 重组表达载体及工程菌的构建 | 第32-33页 |
| 3.2.2.1 重组表达载体的构建 | 第32-33页 |
| 3.2.2.2 重组表达载体的验证及测序 | 第33页 |
| 3.3 结果与分析 | 第33-37页 |
| 3.3.1 glnR 突变基因的扩增 | 第33-35页 |
| 3.3.2 阳性菌的筛选及验证 | 第35页 |
| 3.3.3 测序结果 | 第35-36页 |
| 3.3.4 重组表达载体及工程菌的构建 | 第36-37页 |
| 3.4 结论与讨论 | 第37-39页 |
| 第四章 重组蛋白表达纯化及其与 glnRA 相互作用 | 第39-58页 |
| 4.1 实验材料 | 第39-43页 |
| 4.1.1 菌种 | 第39页 |
| 4.1.2 药品及仪器 | 第39-40页 |
| 4.1.3 主要试剂及其配制方法 | 第40-43页 |
| 4.2 实验方法 | 第43-48页 |
| 4.2.1 目的蛋白分离纯化 | 第43-45页 |
| 4.2.1.1 SDS-PAGE 电泳分析 | 第43-44页 |
| 4.2.1.2 目的蛋白表达及条件优化 | 第44页 |
| 4.2.1.3 目的蛋白可溶性验证 | 第44页 |
| 4.2.1.4 目的蛋白的分离纯化 | 第44-45页 |
| 4.2.2 GST-GlnRm 蛋白与 glnRA 基因的相互作用 | 第45-48页 |
| 4.2.2.1 蛋白浓度的测定 | 第45-46页 |
| 4.2.2.2 glnRA 基因的获取及其浓度的测定 | 第46页 |
| 4.2.2.3 GST-GlnRm 蛋白与 glnRA 的结合实验 | 第46-48页 |
| 4.3 实验结果 | 第48-54页 |
| 4.3.1 目的蛋白表达及条件优化 | 第48-51页 |
| 4.3.1.1 目的蛋白诱导表达 | 第48-49页 |
| 4.3.1.2 目的蛋白可溶性分析 | 第49-50页 |
| 4.3.1.3 目的蛋白的纯化 | 第50-51页 |
| 4.3.2 GST-GlnRm 与 glnRA 基因的相互作用 | 第51-53页 |
| 4.3.2.1 蛋白浓度的测定 | 第51页 |
| 4.3.2.2 突变融合蛋白与 glnRA 的结合实验 | 第51-53页 |
| 4.3.3 GlnR 因子与 DNA 结合机制初步研究 | 第53-54页 |
| 4.4 结论与讨论 | 第54-58页 |
| 第五章 结论与展望 | 第58-60页 |
| 5.1 结论 | 第58页 |
| 5.2 创新点 | 第58页 |
| 5.3 展望 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
