| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 缩略词表 | 第8-9页 |
| 1 前言 | 第9-17页 |
| 1.1 月季在花卉产业中的地位及其衰老研究意义 | 第9-10页 |
| 1.2 切花花朵衰老与乙烯关系的研究进展 | 第10-11页 |
| 1.3 ROS导致衰老的研究进展 | 第11-12页 |
| 1.4 乙烯与ROS之间信号传递研究进展 | 第12-13页 |
| 1.5 转录因子是衰老信号传递过程中的关键组分 | 第13-15页 |
| 1.6 本研究的目的 | 第15-16页 |
| 1.7 技术路线 | 第16-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-21页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第17页 |
| 2.1.2 所用菌种和载体质粒 | 第17页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第17页 |
| 2.1.4 主要试剂及耗材 | 第17-18页 |
| 2.1.5 主要试剂和母液的配制 | 第18-20页 |
| 2.1.6 主要培养基的配制 | 第20页 |
| 2.1.7 所用数据库及分析软件 | 第20-21页 |
| 2.2 试验方法 | 第21-39页 |
| 2.2.1 热硼酸法(Hot Borate Method)提取月季花瓣总RNA | 第21页 |
| 2.2.2 CTAB法提取烟草DNA | 第21-22页 |
| 2.2.3 半定量RT-PCR | 第22页 |
| 2.2.4 实时荧光定量PCR | 第22-23页 |
| 2.2.5 克隆月季基因 | 第23-28页 |
| 2.2.6 PCR产物回收 | 第28页 |
| 2.2.7 基因全长校正 | 第28-29页 |
| 2.2.8 回收片段连T载 | 第29页 |
| 2.2.9 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第29-30页 |
| 2.2.10 转化大肠杆菌 | 第30-31页 |
| 2.2.11 挑菌检测 | 第31页 |
| 2.2.12 质粒提取 | 第31-32页 |
| 2.2.13 烟草遗传转化 | 第32-33页 |
| 2.2.14 月季花瓣中VIGS实验流程 | 第33-34页 |
| 2.2.15 月季花瓣中过表达实验流程 | 第34页 |
| 2.2.16 氮蓝四唑(NBT)法测定超氧化物歧化酶活力 | 第34-35页 |
| 2.2.17 花瓣离子渗透率的测定 | 第35-36页 |
| 2.2.18 候选基因的表达检测和载体构建 | 第36-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-51页 |
| 3.1 候选基因的芯片数据分析 | 第39页 |
| 3.2 候选基因在乙烯处理的月季花瓣中的表达分析 | 第39-40页 |
| 3.3 候选转录因子基因在月季花朵衰老过程中的表达分析 | 第40-42页 |
| 3.4 候选转录因子在烟草中过表达分析 | 第42-44页 |
| 3.4.1 过表达载体的构建 | 第42-43页 |
| 3.4.2 过表达载体转化烟草 | 第43-44页 |
| 3.4.3 转基因烟草叶片中SOD酶活性分析 | 第44页 |
| 3.5 RU03429和RU03393编码的氨基酸序列同源性及系统进化分析 | 第44-46页 |
| 3.6 月季花瓣中沉默分析 | 第46-48页 |
| 3.6.1 沉默载体的构建 | 第46页 |
| 3.6.2 沉默后表型观测 | 第46-47页 |
| 3.6.3 沉默后生理指标测定 | 第47-48页 |
| 3.7 月季花瓣中过表达分析 | 第48-51页 |
| 3.7.1 过表达所用农杆菌阳性检测 | 第48-49页 |
| 3.7.2 过表达后表型观测 | 第49-50页 |
| 3.7.3 过表达后生理指标测定 | 第50-51页 |
| 4 讨论与结论 | 第51-53页 |
| 4.1 讨论 | 第51-52页 |
| 4.1.1 乙烯广泛参与了月季花朵衰老过程的调节 | 第51页 |
| 4.1.2 RU03393和RU03429可能在乙烯导致的月季花朵衰老过程中发挥了一个比较关键的作用 | 第51-52页 |
| 4.2 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
