酶法由葡萄糖合成肌醇技术的研究
| 摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 引言 | 第8-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-18页 |
| 1.1 肌醇的性质和结构 | 第9-10页 |
| 1.2 肌醇的用途 | 第10-11页 |
| 1.3 肌醇的安全性及在食品中的应用 | 第11-12页 |
| 1.4 肌醇产品市场分析 | 第12页 |
| 1.5 肌醇的生产方法 | 第12-14页 |
| 1.5.1 水解法 | 第13页 |
| 1.5.2 化学合成法 | 第13页 |
| 1.5.3 电渗析方法 | 第13-14页 |
| 1.5.4 离子交换树脂法 | 第14页 |
| 1.5.5 微生物法 | 第14页 |
| 1.5.6 催化酶法 | 第14页 |
| 1.6 本文研究的主要内容 | 第14-17页 |
| 1.7 选题依据 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-29页 |
| 2.1 实验材料与试剂 | 第18-20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-29页 |
| 2.2.1 培养基和溶液的配制 | 第20-21页 |
| 2.2.2 标准溶液的配制 | 第21页 |
| 2.2.3 PCR扩增 | 第21-22页 |
| 2.2.4 核酸电泳 | 第22-23页 |
| 2.2.5 酶切 | 第23页 |
| 2.2.6 连接 | 第23-24页 |
| 2.2.7 质粒提取 | 第24页 |
| 2.2.8 DNA测序 | 第24页 |
| 2.2.9 细胞活化及培养条件 | 第24-25页 |
| 2.2.10 蛋白表达的检测 | 第25-26页 |
| 2.2.11 蛋白的纯化 | 第26页 |
| 2.2.12 目的蛋白的浓缩 | 第26-27页 |
| 2.2.13 蛋白保存 | 第27页 |
| 2.2.14 蛋白浓度测定方法 | 第27页 |
| 2.2.15 酶活测定 | 第27-28页 |
| 2.2.16 肌醇检测方法 | 第28-29页 |
| 3 结果与分析讨论 | 第29-52页 |
| 3.1 酶的克隆表达及筛选 | 第29-37页 |
| 3.1.1 PPGK酶的克隆表达 | 第29-30页 |
| 3.1.2 PPGK酶的纯化与酶活测定 | 第30-31页 |
| 3.1.3 AspPPGK酶的高密度发酵 | 第31-32页 |
| 3.1.4 IPS酶的克隆表达 | 第32-33页 |
| 3.1.5 IPS酶的纯化与酶活测定 | 第33-34页 |
| 3.1.6 TbIPS酶的高密度发酵 | 第34页 |
| 3.1.7 IMP酶的克隆表达 | 第34-36页 |
| 3.1.8 IMP酶的纯化与酶活测定 | 第36页 |
| 3.1.9 EcIMP酶的高密度发酵 | 第36-37页 |
| 3.1.10 小结 | 第37页 |
| 3.2 酶学性质研究 | 第37-42页 |
| 3.2.1 AspPPGK的酶学性质 | 第37-39页 |
| 3.2.2 TbIPS的酶学性质 | 第39-40页 |
| 3.2.3 EcIMP的酶学性质 | 第40-42页 |
| 3.2.4 小结 | 第42页 |
| 3.3 酶量优化 | 第42-44页 |
| 3.3.1 AspPPGK的酶量优化 | 第42-43页 |
| 3.3.2 TbIPS及EcIMP的酶量优化 | 第43-44页 |
| 3.3.3 小结 | 第44页 |
| 3.4 高效酶法转化生产肌醇 | 第44-52页 |
| 3.4.1 三酶串联合成肌醇 | 第44-46页 |
| 3.4.2 底物对肌醇转化的抑制作用 | 第46-48页 |
| 3.4.3 两步法由葡萄糖合成肌醇 | 第48-50页 |
| 3.4.4 小结 | 第50-52页 |
| 4 结论与展望 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-62页 |
