| 摘要 | 第8-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-46页 |
| 1.1 手性药物研究意义 | 第14页 |
| 1.2 手性药物制备方法 | 第14-20页 |
| 1.2.1 手性药物生物合成 | 第14-16页 |
| 1.2.2 手性药物化学合成 | 第16-17页 |
| 1.2.3 手性药物色谱拆分 | 第17-20页 |
| 1.2.4 手性药物膜拆分 | 第20页 |
| 1.3 生物技术在手性药物合成中应用 | 第20-25页 |
| 1.3.1 酶拆分外消旋体法合成手性药物 | 第21-22页 |
| 1.3.2 酶法不对称合成手性药物 | 第22-23页 |
| 1.3.3 微生物发酵法合成手性药物 | 第23-24页 |
| 1.3.4 手性药物生物合成方法改进 | 第24-25页 |
| 1.4 酶工程技术在氨基酸生产领域应用 | 第25-29页 |
| 1.4.1 酶法氨基酸生产概况 | 第25-28页 |
| 1.4.2 我国酶法制备氨基酸进展 | 第28-29页 |
| 1.5 氨基酸代谢酶研究 | 第29-36页 |
| 1.5.1 色氨酸合成酶性质 | 第29-30页 |
| 1.5.2 色氨酸合成酶应用 | 第30-33页 |
| 1.5.3 N-乙酰鸟氨酸脱乙酰酶性质 | 第33页 |
| 1.5.4 N-乙酰鸟氨酸脱乙酰酶应用 | 第33-36页 |
| 1.6 添加剂对酶促反应影响 | 第36-38页 |
| 1.6.1 有机溶剂影响 | 第36-37页 |
| 1.6.2 多醇类化合物影响 | 第37页 |
| 1.6.3 表面活性剂影响 | 第37-38页 |
| 1.7 选题目的和意义 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-46页 |
| 第二章 串联表达trpBA和trpA色氨酸合成酶基因工程菌构建及应用 | 第46-62页 |
| 1.1 引言 | 第46-47页 |
| 1.2 实验材料 | 第47-48页 |
| 1.2.1 菌株和质粒 | 第47页 |
| 1.2.2 酶和试剂 | 第47页 |
| 1.2.3 主要实验仪器 | 第47-48页 |
| 1.2.4 培养基 | 第48页 |
| 1.3 实验方法 | 第48-52页 |
| 1.3.1 引物设计 | 第48页 |
| 1.3.2 E. coli K-12基因组DNA提取 | 第48页 |
| 1.3.3 PCR扩增 | 第48-49页 |
| 1.3.4 PCR产物纯化 | 第49页 |
| 1.3.5 质粒pETDuet-1提取 | 第49页 |
| 1.3.6 目的基因和载体双酶切 | 第49页 |
| 1.3.7 酶切产物纯化 | 第49页 |
| 1.3.8 连接反应 | 第49页 |
| 1.3.9 连接产物转化 | 第49-50页 |
| 1.3.10 重组质粒双酶切验证 | 第50页 |
| 1.3.11 色氨酸合成酶工程菌诱导表达 | 第50页 |
| 1.3.12 质粒pETDuet-1提取 | 第50页 |
| 1.3.13 目的基因和载体双酶切 | 第50页 |
| 1.3.14 酶切产物纯化 | 第50页 |
| 1.3.15 连接反应 | 第50-51页 |
| 1.3.16 连接产物转化 | 第51页 |
| 1.3.17 重组质粒双酶切验证 | 第51页 |
| 1.3.18 色氨酸合成酶工程菌诱导表达 | 第51页 |
| 1.3.19 色氨酸合成酶活性测定 | 第51页 |
| 1.3.20 酶转化液丙酮酸测定 | 第51-52页 |
| 1.4 实验结果 | 第52-58页 |
| 1.4.1 trp BA和trpA基因的PCR扩增及相关重组质粒构建 | 第52页 |
| 1.4.2 基因序列测定 | 第52页 |
| 1.4.3 SDS-PAGE蛋白电泳检测基因表达产物 | 第52-53页 |
| 1.4.4 反应温度对酶活影响 | 第53页 |
| 1.4.5 pH对酶活影响 | 第53-54页 |
| 1.4.6 底物浓度对酶活影响 | 第54-55页 |
| 1.4.7 酶促反应进程 | 第55-56页 |
| 1.4.8 氨基酸分析仪测定 | 第56-58页 |
| 1.5 结论与讨论 | 第58-61页 |
| 参考文献 | 第61-62页 |
| 第三章 水/有机溶剂双相体系中色氨酸合成酶酶法合成L-色氨酸及其衍生物 | 第62-86页 |
| 第一节 水/有机溶剂双相体系中色氨酸合成酶酶法合成L-色氨酸 | 第62-73页 |
| 1.1 引言 | 第62-63页 |
| 1.2 实验部分 | 第63页 |
| 1.2.1 菌体培养 | 第63页 |
| 1.2.2 酶法合成L-色氨酸及酶活测定 | 第63页 |
| 1.3 结果与讨论 | 第63-72页 |
| 1.3.1 有机溶剂影响 | 第63-65页 |
| 1.3.2 有机溶剂体积分数影响 | 第65页 |
| 1.3.3 反应温度影响 | 第65-66页 |
| 1.3.4 水相pH影响 | 第66页 |
| 1.3.5 底物摩尔比对酶活影响 | 第66-68页 |
| 1.3.6 底物浓度对酶活影响 | 第68页 |
| 1.3.7 表面活性剂对酶活影响 | 第68-69页 |
| 1.3.8 酶添加量对反应速率影响 | 第69-70页 |
| 1.3.9 酶促反应进程 | 第70-72页 |
| 1.4 结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-74页 |
| 第二节 水/有机溶剂双相体系中色氨酸合成酶酶法合成2-甲基-L-色氨酸 | 第74-84页 |
| 1.1 引言 | 第74-75页 |
| 1.2 实验部分 | 第75页 |
| 1.2.1 菌体培养 | 第75页 |
| 1.2.2 酶法合成L-2-甲基色氨酸及酶活测定 | 第75页 |
| 1.3 结果与讨论 | 第75-84页 |
| 1.3.1 有机溶剂影响 | 第75-76页 |
| 1.3.2 有机溶剂体积分数影响 | 第76-78页 |
| 1.3.3 反应温度和pH影响 | 第78-79页 |
| 1.3.4 底物浓度对酶活影响 | 第79-80页 |
| 1.3.5 表面活性剂对酶影响 | 第80-82页 |
| 1.3.6 金属离子对酶活影响 | 第82页 |
| 1.3.7 酶促反应进程 | 第82-84页 |
| 1.4 结论 | 第84页 |
| 参考文献 | 第84-86页 |
| 第四章 多羟基化合物对色氨酸合成酶催化活性影响及其动力学研究 | 第86-95页 |
| 1.1 引言 | 第86页 |
| 1.2 材料与方法 | 第86-87页 |
| 1.2.1 试剂与仪器 | 第86-87页 |
| 1.2.2 菌体培养 | 第87页 |
| 1.2.3 酶法合成L-色氨酸及酶活测定 | 第87页 |
| 1.3 结果与讨论 | 第87-92页 |
| 1.3.1 多羟基化合物对色氨酸合成酶活性影响 | 第87-88页 |
| 1.3.2 反应温度和pH对酶活影响 | 第88-90页 |
| 1.3.3 底物浓度对酶活影响 | 第90页 |
| 1.3.4 酶促反应进程 | 第90-91页 |
| 1.3.5 酶促反应动力学常数测定 | 第91-92页 |
| 1.4 小结 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-95页 |
| 第五章 色氨酸合成酶催化合成L-半胱氨酸及其衍生物研究 | 第95-109页 |
| 1.1 引言 | 第95-96页 |
| 1.2 材料与方法 | 第96-98页 |
| 1.2.1 试剂与仪器 | 第96-97页 |
| 1.2.2 菌体培养 | 第97页 |
| 1.2.3 色氨酸合成酶底物特异性测定 | 第97页 |
| 1.2.4 酶促反应条件优化 | 第97页 |
| 1.2.5 酶活力测定 | 第97-98页 |
| 1.3 结果与讨论 | 第98-106页 |
| 1.3.1 色氨酸合成酶底物特异性 | 第98页 |
| 1.3.2 pH对酶活性影响 | 第98-99页 |
| 1.3.3 温度对酶活性影响 | 第99-100页 |
| 1.3.4 底物摩尔比对反应影响 | 第100-101页 |
| 1.3.5 底物浓度对反应影响 | 第101页 |
| 1.3.6 反应时间进程 | 第101-103页 |
| 1.3.7 半胱氨酸及其衍生物制备 | 第103-106页 |
| 1.4 小结 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-109页 |
| 第六章 N-乙酰鸟氨酸脱乙酰酶拆分N-乙酰-D,L-氨基酸 | 第109-117页 |
| 1.1 引言 | 第109页 |
| 1.2 材料与方法 | 第109-110页 |
| 1.2.1 实验材料 | 第109-110页 |
| 1.2.2 实验方法 | 第110页 |
| 1.3 结果与讨论 | 第110-115页 |
| 1.3.1 pH值对酶促反应影响 | 第110-111页 |
| 1.3.2 温度对酶促反应影响 | 第111页 |
| 1.3.3 表面活性剂对酶促反应影响 | 第111-112页 |
| 1.3.4 金属离子对酶促反应影响 | 第112页 |
| 1.3.5 底物浓度对酶促反应影响 | 第112-114页 |
| 1.3.6 酶促反应时间动态变化 | 第114-115页 |
| 1.4 结论 | 第115页 |
| 参考文献 | 第115-117页 |
| 第七章 总结与展望 | 第117-118页 |
| 主要结论 | 第117页 |
| 前景展望 | 第117-118页 |
| 攻读博士学位期间发表论文与申请专利 | 第118-120页 |
| 附图1 L-色氨酸~1H-NMR(500MHz,D_2O) | 第120-121页 |
| 附图2 L-色氨酸质谱图 | 第121-122页 |
| 附图3 L-胱氨酸~1H-NMR(500MHz,D20) | 第122-123页 |
| 附图4 L-胱氨酸质谱图 | 第123-124页 |
| 致谢 | 第124-125页 |
