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缺硒诱导雏鸡胰腺萎缩的分子机制

摘要第4-5页
Abstract第5页
缩略词第11-13页
第一章 绪论第13-22页
    1.1 研究背景第13-14页
        1.1.1 硒的存在形式第13页
        1.1.2 硒的吸收与代谢第13页
        1.1.3 硒与缺硒病第13-14页
    1.2 文献综述第14-18页
        1.2.1 硒与维生素E缺乏对胰腺维持功能的影响第14页
        1.2.2 硒缺乏诱导雏鸡胰腺萎缩的研究现状第14-15页
        1.2.3 硒缺乏诱导雏鸡胰腺萎缩的机理第15-16页
        1.2.4 硒缺乏对胰腺硒蛋白表达调控的影响第16-18页
    1.3 立题依据及研究意义第18-19页
    1.4 研究内容第19-20页
        1.4.1 缺硒诱导雏鸡胰腺萎缩的研究第19页
        1.4.2 缺硒诱导雏鸡胰腺萎缩的转录组学分析第19页
        1.4.3 缺硒诱导雏鸡胰腺萎缩关键差异基因及通路的验证第19页
        1.4.4 GPx4在雏鸡胰腺萎缩中的机制研究第19页
        1.4.5 GPx4在鸡胚胰腺生长发育中的作用第19-20页
    1.5 技术路线第20-22页
第二章 缺硒诱导雏鸡胰腺萎缩的研究第22-35页
    2.1 前言第22页
    2.2 材料与方法第22-26页
        2.2.1 主要仪器设备第22-23页
        2.2.2 实验动物和设计第23页
        2.2.3 日粮配方第23页
        2.2.4 主要试剂和材料第23页
        2.2.5 主要溶液配制第23-24页
        2.2.6 实验方法第24-26页
            2.2.6.1 临床症状的观测第24-25页
            2.2.6.2 体重、采食量和胰腺长度及重量的测定第25页
            2.2.6.3 血浆和胰腺生理生化指标测定第25页
            2.2.6.4 胰腺病理组织学检查第25-26页
            2.2.6.5 数据分析第26页
    2.3 实验结果与分析第26-32页
        2.3.1 雏鸡临床症状第26-27页
        2.3.2 硒和维生素E缺乏对雏鸡胰腺相关指标的影响第27-28页
        2.3.3 胰腺组织的病理诊断第28-30页
        2.3.4 胰腺组织的生理生化指标测定第30-32页
    2.4 讨论第32-34页
        2.4.1 硒和维生素E缺乏对雏鸡生长性能的影响第32-33页
        2.4.2 硒和维生素E缺乏对雏鸡胰腺形态和脏器指数的影响第33页
        2.4.3 硒和维生素E缺乏对雏鸡胰腺生理生化指标的影响第33-34页
        2.4.4 硒和维生素E缺乏对雏鸡胰腺线粒体生理生化指标的影响第34页
    2.5 小结第34-35页
第三章 缺硒诱导雏鸡胰腺萎缩的转录组学分析第35-50页
    3.1 前言第35页
    3.2 材料与方法第35-40页
        3.2.1 所用数据库及分析平台第35页
        3.2.2 主要试剂与材料第35-36页
        3.2.3 实验方法第36-40页
            3.2.3.1 胰腺总RNA提取第36-37页
            3.2.3.2 RNA纯度检测第37页
            3.2.3.3 反转录cDNA第37页
            3.2.3.4 反转录反应第37-38页
            3.2.3.5 数字基因表达谱第38-39页
            3.2.3.6 荧光定量PCR验证第39-40页
            3.2.3.7 数据分析第40页
    3.3 实验结果与分析第40-48页
        3.3.1 胰腺总RNA提取第40-42页
        3.3.2 基因表达量分析第42页
        3.3.3 显著性差异的基因分析柱状图第42-43页
        3.3.4 显著性差异的基因分布散点图第43-44页
        3.3.5 差异表达基因及聚类分析第44-47页
        3.3.6 表达差异基因涉及的信号通路显著性分析第47-48页
    3.4 讨论第48-49页
        3.4.1 表达谱测序验证第48页
        3.4.2 表达差异基因筛选第48页
        3.4.3 信号通路筛选第48-49页
    3.5 小结第49-50页
第四章 缺硒诱导雏鸡胰腺萎缩关键差异基因及通路的验证第50-64页
    4.1 前言第50页
    4.2 材料与方法第50-55页
        4.2.1 主要试剂与材料第50页
        4.2.2 主要溶液配制第50-51页
        4.2.3 实验方法第51-55页
            4.2.3.1 荧光实时定量PCR法检测第51-53页
            4.2.3.2 Western blot第53-54页
            4.2.3.3 免疫组化第54-55页
            4.2.3.4 数据分析第55页
    4.3 实验结果与分析第55-61页
        4.3.1 硒与维生素E的缺乏对硒蛋白基因mRNA表达的影响第55-57页
        4.3.2 硒和维生素E的缺乏对硒蛋白表达的影响第57-58页
        4.3.3 硒与维生素E的缺乏对线粒体凋亡通路蛋白表达的影响第58-59页
        4.3.4 GPx4蛋白在胰腺组织中的免疫组化第59-60页
        4.3.5 硒与维生素E的缺乏对胰腺凋亡的影响第60-61页
    4.4 讨论第61-63页
        4.4.1 硒缺乏对胰腺组织硒蛋白基因mRNA表达具有很强的调节作用第61页
        4.4.2 硒缺乏对胰腺组织主要硒蛋白表达调节作用第61-62页
        4.4.3 硒缺乏对线粒体凋亡通路蛋白表达调节作用第62页
        4.4.4 硒缺乏对胰腺组织硒蛋白GPx4免疫组化的影响第62-63页
    4.5 小结第63-64页
第五章 GPx4在雏鸡胰腺萎缩中的机制研究第64-84页
    5.1 前言第64页
    5.2 材料与方法第64-69页
        5.2.1 主要仪器与设备第64页
        5.2.2 主要试剂与材料第64-65页
        5.2.3 主要溶液配制第65-66页
        5.2.4 实验方法第66-69页
            5.2.4.1 雏鸡原代腺泡细胞的提取第66页
            5.2.4.2 雏鸡原代腺泡细胞的鉴定第66-67页
            5.2.4.3 雏鸡原代腺泡细胞的传代第67页
            5.2.4.4 蛋白浓度的测定第67页
            5.2.4.5 Western blot第67页
            5.2.4.6 细胞活性检测第67页
            5.2.4.7 细胞凋亡率检测第67-68页
            5.2.4.8 GST pull down实验第68页
            5.2.4.9 免疫沉淀第68页
            5.2.4.10 siRNA基因沉默实验第68-69页
            5.2.4.11 Gpx4基因过表达实验第69页
            5.2.4.12 数据分析第69页
    5.3 实验结果与分析第69-81页
        5.3.1 原代胰腺腺泡细胞的鉴定第69-70页
        5.3.2 Gpx4 siRNA基因沉默技术对线粒体凋亡信号通路的影响第70-72页
        5.3.3 Gpx4在原代胰腺腺泡细胞中过表达的影响第72-75页
        5.3.4 GPx4在原代胰腺腺泡细胞中亚细胞的定位第75-76页
        5.3.5 GPx4下游蛋白pull down实验第76-77页
        5.3.6 GPx4免疫共沉淀实验第77-78页
        5.3.7 GPx4和Pro Tα的共定位第78-79页
        5.3.8 ProTα siRNA沉默对胰腺腺泡细胞线粒体凋亡通路的影响第79-81页
    5.4 讨论第81-83页
        5.4.1 Gpx4 sRNA在原代胰腺细胞中的作用第81页
        5.4.2 Gpx4过表达在原代胰腺细胞中的作用第81-82页
        5.4.3 GPx4的下游靶点蛋白及在通路中作用第82-83页
    5.5 小结第83-84页
第六章 GPx4在鸡胚胰腺生长发育中的作用第84-95页
    6.1 前言第84页
    6.2 材料与方法第84-89页
        6.2.1 主要仪器与设备第84页
        6.2.2 主要试剂与材料第84页
        6.2.3 主要溶液配制第84-86页
        6.2.4 实验方法第86-89页
            6.2.4.1 慢病毒载体制备第86-87页
            6.2.4.2 转EGFP基因嵌合体鸡生产及鉴定第87-89页
            6.2.4.3 蛋白浓度的测定第89页
            6.2.4.4 Western blot第89页
            6.2.4.5 数据分析第89页
    6.3 实验结果与分析第89-93页
        6.3.1 载体测序鉴定第89-90页
        6.3.2 Anti-Gpx4-shRNA转基因鸡胚的鉴定第90-91页
        6.3.3 Anti-Gpx4-shRNA转基因鸡胚胰腺病理组织学和脏器指数测定第91-92页
        6.3.4 Anti-Gpx4-shRNA转基因鸡胚胰腺Cytc-caspase 9-caspase 3通路蛋白表达的测定第92-93页
    6.4 讨论第93-94页
        6.4.1 Gpx4 shRNA转基因鸡的制备第93页
        6.4.2 Gpx4 shRNA对鸡胚胰腺病理组织学和脏器指数的影响第93-94页
        6.4.3 Gpx4 shRNA对鸡胚胰腺Cytc-caspase 9-capase 3表达的影响第94页
    6.5 小结第94-95页
第七章 全文结论与展望第95-97页
    7.1 全文结论第95-96页
        7.1.1 缺硒性胰腺萎缩与线粒体损伤相关第95页
        7.1.2 缺硒性胰腺萎缩相关的差异基因和信号通路第95页
        7.1.3 GPx4是胰腺萎缩的主要关键基因第95页
        7.1.4 ProTα与GPx4相互作用,参与线粒体凋亡通路第95-96页
        7.1.5 Gpx4 shRNA转基因鸡的研究第96页
    7.2 论文的创新点第96页
    7.3 展望第96-97页
参考文献第97-102页
致谢第102-103页
附录第103-106页
个人简历第106页

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