摘要 | 第4-5页 |
Abstract | 第5页 |
缩略词 | 第11-13页 |
第一章 绪论 | 第13-22页 |
1.1 研究背景 | 第13-14页 |
1.1.1 硒的存在形式 | 第13页 |
1.1.2 硒的吸收与代谢 | 第13页 |
1.1.3 硒与缺硒病 | 第13-14页 |
1.2 文献综述 | 第14-18页 |
1.2.1 硒与维生素E缺乏对胰腺维持功能的影响 | 第14页 |
1.2.2 硒缺乏诱导雏鸡胰腺萎缩的研究现状 | 第14-15页 |
1.2.3 硒缺乏诱导雏鸡胰腺萎缩的机理 | 第15-16页 |
1.2.4 硒缺乏对胰腺硒蛋白表达调控的影响 | 第16-18页 |
1.3 立题依据及研究意义 | 第18-19页 |
1.4 研究内容 | 第19-20页 |
1.4.1 缺硒诱导雏鸡胰腺萎缩的研究 | 第19页 |
1.4.2 缺硒诱导雏鸡胰腺萎缩的转录组学分析 | 第19页 |
1.4.3 缺硒诱导雏鸡胰腺萎缩关键差异基因及通路的验证 | 第19页 |
1.4.4 GPx4在雏鸡胰腺萎缩中的机制研究 | 第19页 |
1.4.5 GPx4在鸡胚胰腺生长发育中的作用 | 第19-20页 |
1.5 技术路线 | 第20-22页 |
第二章 缺硒诱导雏鸡胰腺萎缩的研究 | 第22-35页 |
2.1 前言 | 第22页 |
2.2 材料与方法 | 第22-26页 |
2.2.1 主要仪器设备 | 第22-23页 |
2.2.2 实验动物和设计 | 第23页 |
2.2.3 日粮配方 | 第23页 |
2.2.4 主要试剂和材料 | 第23页 |
2.2.5 主要溶液配制 | 第23-24页 |
2.2.6 实验方法 | 第24-26页 |
2.2.6.1 临床症状的观测 | 第24-25页 |
2.2.6.2 体重、采食量和胰腺长度及重量的测定 | 第25页 |
2.2.6.3 血浆和胰腺生理生化指标测定 | 第25页 |
2.2.6.4 胰腺病理组织学检查 | 第25-26页 |
2.2.6.5 数据分析 | 第26页 |
2.3 实验结果与分析 | 第26-32页 |
2.3.1 雏鸡临床症状 | 第26-27页 |
2.3.2 硒和维生素E缺乏对雏鸡胰腺相关指标的影响 | 第27-28页 |
2.3.3 胰腺组织的病理诊断 | 第28-30页 |
2.3.4 胰腺组织的生理生化指标测定 | 第30-32页 |
2.4 讨论 | 第32-34页 |
2.4.1 硒和维生素E缺乏对雏鸡生长性能的影响 | 第32-33页 |
2.4.2 硒和维生素E缺乏对雏鸡胰腺形态和脏器指数的影响 | 第33页 |
2.4.3 硒和维生素E缺乏对雏鸡胰腺生理生化指标的影响 | 第33-34页 |
2.4.4 硒和维生素E缺乏对雏鸡胰腺线粒体生理生化指标的影响 | 第34页 |
2.5 小结 | 第34-35页 |
第三章 缺硒诱导雏鸡胰腺萎缩的转录组学分析 | 第35-50页 |
3.1 前言 | 第35页 |
3.2 材料与方法 | 第35-40页 |
3.2.1 所用数据库及分析平台 | 第35页 |
3.2.2 主要试剂与材料 | 第35-36页 |
3.2.3 实验方法 | 第36-40页 |
3.2.3.1 胰腺总RNA提取 | 第36-37页 |
3.2.3.2 RNA纯度检测 | 第37页 |
3.2.3.3 反转录cDNA | 第37页 |
3.2.3.4 反转录反应 | 第37-38页 |
3.2.3.5 数字基因表达谱 | 第38-39页 |
3.2.3.6 荧光定量PCR验证 | 第39-40页 |
3.2.3.7 数据分析 | 第40页 |
3.3 实验结果与分析 | 第40-48页 |
3.3.1 胰腺总RNA提取 | 第40-42页 |
3.3.2 基因表达量分析 | 第42页 |
3.3.3 显著性差异的基因分析柱状图 | 第42-43页 |
3.3.4 显著性差异的基因分布散点图 | 第43-44页 |
3.3.5 差异表达基因及聚类分析 | 第44-47页 |
3.3.6 表达差异基因涉及的信号通路显著性分析 | 第47-48页 |
3.4 讨论 | 第48-49页 |
3.4.1 表达谱测序验证 | 第48页 |
3.4.2 表达差异基因筛选 | 第48页 |
3.4.3 信号通路筛选 | 第48-49页 |
3.5 小结 | 第49-50页 |
第四章 缺硒诱导雏鸡胰腺萎缩关键差异基因及通路的验证 | 第50-64页 |
4.1 前言 | 第50页 |
4.2 材料与方法 | 第50-55页 |
4.2.1 主要试剂与材料 | 第50页 |
4.2.2 主要溶液配制 | 第50-51页 |
4.2.3 实验方法 | 第51-55页 |
4.2.3.1 荧光实时定量PCR法检测 | 第51-53页 |
4.2.3.2 Western blot | 第53-54页 |
4.2.3.3 免疫组化 | 第54-55页 |
4.2.3.4 数据分析 | 第55页 |
4.3 实验结果与分析 | 第55-61页 |
4.3.1 硒与维生素E的缺乏对硒蛋白基因mRNA表达的影响 | 第55-57页 |
4.3.2 硒和维生素E的缺乏对硒蛋白表达的影响 | 第57-58页 |
4.3.3 硒与维生素E的缺乏对线粒体凋亡通路蛋白表达的影响 | 第58-59页 |
4.3.4 GPx4蛋白在胰腺组织中的免疫组化 | 第59-60页 |
4.3.5 硒与维生素E的缺乏对胰腺凋亡的影响 | 第60-61页 |
4.4 讨论 | 第61-63页 |
4.4.1 硒缺乏对胰腺组织硒蛋白基因mRNA表达具有很强的调节作用 | 第61页 |
4.4.2 硒缺乏对胰腺组织主要硒蛋白表达调节作用 | 第61-62页 |
4.4.3 硒缺乏对线粒体凋亡通路蛋白表达调节作用 | 第62页 |
4.4.4 硒缺乏对胰腺组织硒蛋白GPx4免疫组化的影响 | 第62-63页 |
4.5 小结 | 第63-64页 |
第五章 GPx4在雏鸡胰腺萎缩中的机制研究 | 第64-84页 |
5.1 前言 | 第64页 |
5.2 材料与方法 | 第64-69页 |
5.2.1 主要仪器与设备 | 第64页 |
5.2.2 主要试剂与材料 | 第64-65页 |
5.2.3 主要溶液配制 | 第65-66页 |
5.2.4 实验方法 | 第66-69页 |
5.2.4.1 雏鸡原代腺泡细胞的提取 | 第66页 |
5.2.4.2 雏鸡原代腺泡细胞的鉴定 | 第66-67页 |
5.2.4.3 雏鸡原代腺泡细胞的传代 | 第67页 |
5.2.4.4 蛋白浓度的测定 | 第67页 |
5.2.4.5 Western blot | 第67页 |
5.2.4.6 细胞活性检测 | 第67页 |
5.2.4.7 细胞凋亡率检测 | 第67-68页 |
5.2.4.8 GST pull down实验 | 第68页 |
5.2.4.9 免疫沉淀 | 第68页 |
5.2.4.10 siRNA基因沉默实验 | 第68-69页 |
5.2.4.11 Gpx4基因过表达实验 | 第69页 |
5.2.4.12 数据分析 | 第69页 |
5.3 实验结果与分析 | 第69-81页 |
5.3.1 原代胰腺腺泡细胞的鉴定 | 第69-70页 |
5.3.2 Gpx4 siRNA基因沉默技术对线粒体凋亡信号通路的影响 | 第70-72页 |
5.3.3 Gpx4在原代胰腺腺泡细胞中过表达的影响 | 第72-75页 |
5.3.4 GPx4在原代胰腺腺泡细胞中亚细胞的定位 | 第75-76页 |
5.3.5 GPx4下游蛋白pull down实验 | 第76-77页 |
5.3.6 GPx4免疫共沉淀实验 | 第77-78页 |
5.3.7 GPx4和Pro Tα的共定位 | 第78-79页 |
5.3.8 ProTα siRNA沉默对胰腺腺泡细胞线粒体凋亡通路的影响 | 第79-81页 |
5.4 讨论 | 第81-83页 |
5.4.1 Gpx4 sRNA在原代胰腺细胞中的作用 | 第81页 |
5.4.2 Gpx4过表达在原代胰腺细胞中的作用 | 第81-82页 |
5.4.3 GPx4的下游靶点蛋白及在通路中作用 | 第82-83页 |
5.5 小结 | 第83-84页 |
第六章 GPx4在鸡胚胰腺生长发育中的作用 | 第84-95页 |
6.1 前言 | 第84页 |
6.2 材料与方法 | 第84-89页 |
6.2.1 主要仪器与设备 | 第84页 |
6.2.2 主要试剂与材料 | 第84页 |
6.2.3 主要溶液配制 | 第84-86页 |
6.2.4 实验方法 | 第86-89页 |
6.2.4.1 慢病毒载体制备 | 第86-87页 |
6.2.4.2 转EGFP基因嵌合体鸡生产及鉴定 | 第87-89页 |
6.2.4.3 蛋白浓度的测定 | 第89页 |
6.2.4.4 Western blot | 第89页 |
6.2.4.5 数据分析 | 第89页 |
6.3 实验结果与分析 | 第89-93页 |
6.3.1 载体测序鉴定 | 第89-90页 |
6.3.2 Anti-Gpx4-shRNA转基因鸡胚的鉴定 | 第90-91页 |
6.3.3 Anti-Gpx4-shRNA转基因鸡胚胰腺病理组织学和脏器指数测定 | 第91-92页 |
6.3.4 Anti-Gpx4-shRNA转基因鸡胚胰腺Cytc-caspase 9-caspase 3通路蛋白表达的测定 | 第92-93页 |
6.4 讨论 | 第93-94页 |
6.4.1 Gpx4 shRNA转基因鸡的制备 | 第93页 |
6.4.2 Gpx4 shRNA对鸡胚胰腺病理组织学和脏器指数的影响 | 第93-94页 |
6.4.3 Gpx4 shRNA对鸡胚胰腺Cytc-caspase 9-capase 3表达的影响 | 第94页 |
6.5 小结 | 第94-95页 |
第七章 全文结论与展望 | 第95-97页 |
7.1 全文结论 | 第95-96页 |
7.1.1 缺硒性胰腺萎缩与线粒体损伤相关 | 第95页 |
7.1.2 缺硒性胰腺萎缩相关的差异基因和信号通路 | 第95页 |
7.1.3 GPx4是胰腺萎缩的主要关键基因 | 第95页 |
7.1.4 ProTα与GPx4相互作用,参与线粒体凋亡通路 | 第95-96页 |
7.1.5 Gpx4 shRNA转基因鸡的研究 | 第96页 |
7.2 论文的创新点 | 第96页 |
7.3 展望 | 第96-97页 |
参考文献 | 第97-102页 |
致谢 | 第102-103页 |
附录 | 第103-106页 |
个人简历 | 第106页 |