| 摘要 | 第3-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 第一章 绪论 | 第15-26页 |
| 1.1 概述 | 第15-16页 |
| 1.2 虫草无性型及其分类鉴定 | 第16-17页 |
| 1.3 虫草的有效成分及其应用研究 | 第17-20页 |
| 1.4 虫草的人工栽培与发酵培养 | 第20-22页 |
| 1.5 虫草交配型基因与TAIL-PCR技术 | 第22-25页 |
| 1.6 研究的目的和意义 | 第25-26页 |
| 第二章 雪峰虫草菌的生物学特性 | 第26-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-28页 |
| 2.1.1 菌种及其来源 | 第26-27页 |
| 2.1.2 仪器与试剂 | 第27页 |
| 2.1.3 培养基 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-30页 |
| 2.2.1 雪峰虫草菌株的分离 | 第28页 |
| 2.2.2 雪峰虫草形态学鉴定 | 第28页 |
| 2.2.3 雪峰虫草基因组DNA的制备 | 第28页 |
| 2.2.3.1 雪峰虫草基因组DNA的抽提 | 第28页 |
| 2.2.3.2 凝胶电泳检测抽提的基因组DNA质量 | 第28页 |
| 2.2.3.3 测定抽提的基因组DNA的OD_(260)、OD_(280)值 | 第28页 |
| 2.2.4 ITS区段的扩增与序列分析 | 第28-30页 |
| 2.2.4.1 ITS区段的扩增与克隆 | 第29页 |
| 2.2.4.2 切胶回收目的片段 | 第29页 |
| 2.2.4.3 目的片段克隆、转化与测序 | 第29-30页 |
| 2.2.4.4 序列分析 | 第30页 |
| 2.2.5 雪峰虫草交配型的快速鉴定 | 第30页 |
| 2.2.6 雪峰虫草菌株子实体的培养 | 第30页 |
| 2.3 结果与分析 | 第30-36页 |
| 2.3.1 雪峰虫草的分离鉴定 | 第30-35页 |
| 2.3.1.1 雪峰虫草菌的形态特征 | 第31-32页 |
| 2.3.1.2 雪峰虫草的ITS序列分析 | 第32-33页 |
| 2.3.1.3 交配型基因在雪峰虫草中的分布 | 第33-35页 |
| 2.3.2 雪峰虫草菌株子座的培养 | 第35-36页 |
| 2.4 讨论 | 第36-38页 |
| 第三章 雪峰虫草液体发酵与人工培育 | 第38-53页 |
| 3.1 实验材料 | 第38-39页 |
| 3.1.1 菌种及其来源 | 第38页 |
| 3.1.2 主要仪器与试剂 | 第38页 |
| 3.1.3 培养基 | 第38-39页 |
| 3.2 实验方法 | 第39-41页 |
| 3.2.1 菌丝体液体发酵培养基优化试验设计 | 第39-40页 |
| 3.2.1.1 单因子筛选和Plackett-Burman设计 | 第39-40页 |
| 3.2.1.2 响应曲面分析 | 第40页 |
| 3.2.1.3 菌丝体生物量的测定 | 第40页 |
| 3.2.1.4 统计分析 | 第40页 |
| 3.2.2 雪峰虫草菌株子座培养条件的优化 | 第40-41页 |
| 3.2.2.1 固体培养基的配制与灭菌 | 第40页 |
| 3.2.2.2 接种与培养 | 第40-41页 |
| 3.2.2.3 正交实验探索获得子座的最佳培养条件 | 第41页 |
| 3.2.2.4 最适生长条件的确证 | 第41页 |
| 3.3 结果与分析 | 第41-51页 |
| 3.3.1 菌丝体液体发酵培养基优化 | 第41-50页 |
| 3.3.1.1 不同碳源对菌丝体生物量的影响 | 第41-42页 |
| 3.3.1.2 不同氮源对菌丝体生物量的影响 | 第42-44页 |
| 3.3.1.3 七水硫酸镁对菌丝体生物量的影响 | 第44-45页 |
| 3.3.1.4 Plackett-Burman设计筛选重要影响因素 | 第45-46页 |
| 3.3.1.5 中心组合优化实验结果 | 第46-50页 |
| 3.3.2 雪峰虫草菌株子座的人工培养 | 第50-51页 |
| 3.4 讨论 | 第51-53页 |
| 第四章 雪峰虫草核苷类成分含量分析 | 第53-68页 |
| 4.1 材料与方法 | 第53-56页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第53-54页 |
| 4.1.1.1 材料 | 第53-54页 |
| 4.1.1.2 试剂与仪器 | 第54页 |
| 4.1.2 实验方法 | 第54-56页 |
| 4.1.2.1 核苷与碱基组成分析 | 第54-55页 |
| 4.1.2.2 氨基酸分析 | 第55页 |
| 4.1.2.3 脂肪酸与挥发性成分分析 | 第55页 |
| 4.1.2.4 虫草酸含量测定 | 第55-56页 |
| 4.2 结果与分析 | 第56-66页 |
| 4.2.1 核苷与碱基组成分析 | 第56-63页 |
| 4.2.1.1 方法验证 | 第56-58页 |
| 4.2.1.2 雪峰虫草不同组织中核苷和碱基的分析结果 | 第58-60页 |
| 4.2.1.3 虫草素的鉴定 | 第60-63页 |
| 4.2.2 其它有效成分检测结果 | 第63-66页 |
| 4.3 讨论 | 第66-68页 |
| 第五章 雪峰虫草交配型基因的克隆与分析 | 第68-95页 |
| 5.1 材料、试剂与仪器 | 第69页 |
| 5.2 实验方法 | 第69-77页 |
| 5.2.1 生物信息学分析的主要软件与数据库 | 第69-70页 |
| 5.2.2 雪峰虫草交配型MAT1-1和MAT1-2序列的全长克隆 | 第70-74页 |
| 5.2.2.1 hiTAIL-PCR巢式特异引物的设计 | 第70-71页 |
| 5.2.2.2 hiTAIL-PCR反应体系 | 第71-73页 |
| 5.2.2.3 hiTAIL-PCR反应程序 | 第73-74页 |
| 5.2.2.4 目标片段测序 | 第74页 |
| 5.2.3 Southern印迹杂交方法 | 第74-76页 |
| 5.2.3.1 溶液配制 | 第74页 |
| 5.2.3.2 实验用引物序列 | 第74-75页 |
| 5.2.3.3 DNA酶切和电泳 | 第75页 |
| 5.2.3.4 转膜、杂交、洗膜与信号检测 | 第75-76页 |
| 5.2.4 RNA制备和cDNA合成 | 第76-77页 |
| 5.3 结果与分析 | 第77-92页 |
| 5.3.1 雪峰虫草交配型MAT1-1的克隆和分析 | 第77-86页 |
| 5.3.1.1 雪峰虫草交配型MAT1-1-1的分析 | 第79-82页 |
| 5.3.1.2 雪峰虫草交配型MAT1-1-2的分析 | 第82-84页 |
| 5.3.1.3 雪峰虫草交配型MAT1-1-3的分析 | 第84-86页 |
| 5.3.2 雪峰虫草交配型MAT1-2的克隆和分析 | 第86-90页 |
| 5.3.3 雪峰虫草交配型MAT基因座的分析 | 第90-92页 |
| 5.4 讨论 | 第92-95页 |
| 第六章 结论与展望 | 第95-97页 |
| 6.1 研究结论 | 第95-96页 |
| 6.2 特色与创新之处 | 第96页 |
| 6.3 展望 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-111页 |
| 附录 | 第111-127页 |
| 论文发表情况 | 第127-128页 |
| 致谢 | 第128-130页 |
