| 致谢 | 第6-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 文献综述 | 第13-24页 |
| 1.1 水稻细菌性褐条病概况 | 第13-16页 |
| 1.1.1 发生与危害 | 第13页 |
| 1.1.2 病原 | 第13-14页 |
| 1.1.3 病原菌形态 | 第14页 |
| 1.1.4 病害主要症状 | 第14-15页 |
| 1.1.5 发病条件 | 第15页 |
| 1.1.6 防治 | 第15-16页 |
| 1.2 水稻褐条病菌的致病机制 | 第16-24页 |
| 1.2.1 致病生化因子 | 第17-18页 |
| 1.2.2 分泌系统 | 第18-21页 |
| 1.2.3 噬菌体 | 第21-24页 |
| 2 研究内容与目的意义 | 第24-25页 |
| 3 材料与方法 | 第25-51页 |
| 3.1 实验材料 | 第25-31页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第25-29页 |
| 3.1.2 主要试剂(盒)、酶及抗生素 | 第29页 |
| 3.1.3 培养基及缓冲液、电泳凝胶 | 第29-31页 |
| 3.2 生物信息学分析 | 第31页 |
| 3.3 同源重组法 | 第31-33页 |
| 3.4 突变体的构建 | 第33-40页 |
| 3.4.1 菌株和质粒准备 | 第33-34页 |
| 3.4.2 引物设计 | 第34-35页 |
| 3.4.3 扩增获得目的基因片段 | 第35-36页 |
| 3.4.4 酶切和回收目的片段 | 第36-37页 |
| 3.4.5 目的片段与自杀质粒片段连接 | 第37页 |
| 3.4.6 CaCl_2法制备大肠杆菌感受态及热击 | 第37-38页 |
| 3.4.7 重组质粒基因突变菌株的筛选与鉴定 | 第38页 |
| 3.4.8 电击感受态的制备与电击 | 第38-40页 |
| 3.4.9 基因突变菌株的筛选、鉴定与保存 | 第40页 |
| 3.5 回补体的构建 | 第40-46页 |
| 3.5.1 回补基因的选择 | 第40-41页 |
| 3.5.2 菌株和质粒准备 | 第41页 |
| 3.5.3 引物设计 | 第41-42页 |
| 3.5.4 扩增和回收获得回补体目的基因片段 | 第42-43页 |
| 3.5.5 单酶切pRADK质粒 | 第43页 |
| 3.5.6 同源重组质粒的构建和鉴定 | 第43-44页 |
| 3.5.7 大肠杆菌DH5α感受态的热击转化 | 第44页 |
| 3.5.8 重组质粒基因突变菌株的筛选与鉴定 | 第44-45页 |
| 3.5.9 电击感受态的制备与电击 | 第45-46页 |
| 3.5.10 回补体菌株的筛选、鉴定与保存 | 第46页 |
| 3.6 突变体和回补体菌株毒力相关表型的测定 | 第46-51页 |
| 3.6.1 致病性测定 | 第46-47页 |
| 3.6.2 生长曲线测定 | 第47页 |
| 3.6.3 生物膜形成测定 | 第47-48页 |
| 3.6.4 游动性测定 | 第48页 |
| 3.6.5 胞外多糖产生测定 | 第48页 |
| 3.6.6 胞外酶活性测定 | 第48-50页 |
| 3.6.7 过氧化氢耐受性测定 | 第50页 |
| 3.6.8 噬菌体侵染能力测定 | 第50页 |
| 3.6.9 全蛋白提取和质谱分析 | 第50-51页 |
| 4 结果 | 第51-78页 |
| 4.1 T4SS基因的预测 | 第51-52页 |
| 4.2 T4SS突变体的构建 | 第52-54页 |
| 4.2.1 基因的目的片段的扩增 | 第52-53页 |
| 4.2.2 T4SS基因重组自杀质粒的构建 | 第53-54页 |
| 4.2.3 T4SS基因突变株的筛选和鉴定 | 第54页 |
| 4.3 T4SS回补体的构建 | 第54-56页 |
| 4.3.1 T4SS基因目的片段的扩增 | 第54-55页 |
| 4.3.2 T4SS回补基因重组质粒的构建 | 第55-56页 |
| 4.3.3 T4SS基因回补体的筛选和鉴定 | 第56页 |
| 4.4 水稻幼苗致病性 | 第56-61页 |
| 4.5 生长曲线 | 第61-62页 |
| 4.6 生物膜形成 | 第62-64页 |
| 4.7 游动性 | 第64-67页 |
| 4.8 胞外多糖产生 | 第67-68页 |
| 4.9 胞外酶活性测定 | 第68-70页 |
| 4.9.1 胞外纤维素酶的活性测定 | 第68-69页 |
| 4.9.2 胞外淀粉酶的活性测定 | 第69-70页 |
| 4.9.3 胞外蛋白酶的活性测定 | 第70页 |
| 4.10 过氧化氢耐受性测定 | 第70-72页 |
| 4.11 噬菌体侵染能力测定 | 第72-73页 |
| 4.12 全蛋白质谱分析 | 第73-78页 |
| 4.12.1 蛋白分类 | 第73-77页 |
| 4.12.2 重要代谢路径分析 | 第77-78页 |
| 5 讨论 | 第78-83页 |
| 5.1 T4SS突变体和回补体构建策略 | 第79页 |
| 5.2 T4SS在病菌致病机制的作用 | 第79-81页 |
| 5.3 后续工作 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-91页 |
| 硕士期间研究成果 | 第91页 |