| 致谢 | 第6-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 绪论 | 第14-26页 |
| 1.1 双生病毒概述 | 第14-15页 |
| 1.2 番茄黄化曲叶病毒的研究概述 | 第15-18页 |
| 1.2.1 番茄黄化曲叶病毒的危害范围及危害程度 | 第15-16页 |
| 1.2.2 番茄黄曲叶病毒的基因结构和蛋白功能 | 第16-17页 |
| 1.2.3 番茄黄化曲叶病毒的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.3 蛋白质组学定量技术 | 第18-23页 |
| 1.3.1 基于凝胶电泳的蛋白质组学定量 | 第19-20页 |
| 1.3.2 基于质谱的蛋白质组学定量 | 第20-23页 |
| 1.3.2.1 iTRQA技术 | 第20-22页 |
| 1.3.2.2 生物信息学分析技术 | 第22-23页 |
| 1.3.2.3 iTRAQ技术其他研究上的应用 | 第23页 |
| 1.4 植物半胱氨酸蛋白酶抑制剂的的研究概述 | 第23-24页 |
| 1.5 本研究目的及意义 | 第24-25页 |
| 1.6 本研究技术路线 | 第25-26页 |
| 2 实验方法 | 第26-44页 |
| 2.1 常规克隆技术 | 第26-31页 |
| 2.1.1 PCR技术 | 第26-27页 |
| 2.1.2 PCR产物纯化 | 第27-28页 |
| 2.1.3 连接反应 | 第28-29页 |
| 2.1.4 感受态细胞的制备 | 第29-30页 |
| 2.1.5 热激转化 | 第30页 |
| 2.1.6 菌落PCR筛斑 | 第30页 |
| 2.1.7 质粒的提取 | 第30-31页 |
| 2.1.8 重组质粒的酶切验证 | 第31页 |
| 2.1.9 阳性克隆序列分析 | 第31页 |
| 2.2 重组质粒导入根癌农杆菌及接种 | 第31-32页 |
| 2.2.1 根癌农杆菌感受态细胞的制备 | 第31-32页 |
| 2.2.2 重组质粒电击转化根癌农杆菌 | 第32页 |
| 2.2.3 农杆菌的浸润及接种 | 第32页 |
| 2.3 植物总RNA小量提取、RT-PCR、RT-qPCR | 第32-35页 |
| 2.3.1 植物总RNA的小量提取 | 第32-33页 |
| 2.3.2 反转录RT-PCR及RT-qPCR | 第33-35页 |
| 2.4 CTAB法小量抽提植物总DNA及Southern blot分析 | 第35-38页 |
| 2.4.1 CTAB法小量抽提植物总DNA | 第35-36页 |
| 2.4.2 Southern blot分析 | 第36-38页 |
| 2.4.2.1 探针标记 | 第36页 |
| 2.4.2.2 DNA转膜 | 第36-37页 |
| 2.4.2.3 杂交 | 第37页 |
| 2.4.2.4 免疫显色检测(所有操作均在摇床上摇动) | 第37-38页 |
| 2.5 iTRAQ实验方法 | 第38-43页 |
| 2.5.1 样品制备 | 第38页 |
| 2.5.2 SDS-SAGE电泳 | 第38-39页 |
| 2.5.3 FASP酶解和肽段定量 | 第39页 |
| 2.5.4 肽段标记 | 第39页 |
| 2.5.5 强阳离子交换分馏(SCX) | 第39-40页 |
| 2.5.6 质谱分析与鉴定 | 第40-41页 |
| 2.5.7 生物信息学分析 | 第41-43页 |
| 2.5.7.1 质谱数据分析及数据库的选择 | 第41页 |
| 2.5.7.2 Mascot搜索及蛋白质定量分析 | 第41-43页 |
| 2.6 质粒转化酵母菌株Gold(LiAc法) | 第43-44页 |
| 3 研究结果 | 第44-75页 |
| 3.1 iTRAQ技术分析番茄黄化曲叶病毒侵染本氏烟的差异表达蛋白 | 第44-64页 |
| 3.1.1 材料与方法 | 第44-46页 |
| 3.1.1.1 材料 | 第44页 |
| 3.1.1.2 TYLCV浸润接种本氏烟 | 第44页 |
| 3.1.1.3 植物样品拍照及取样 | 第44页 |
| 3.1.1.4 iTRAQ | 第44-45页 |
| 3.1.1.5 TRV病毒诱导的基因沉默 | 第45-46页 |
| 3.1.1.6 沉默接种TYLCV后病毒积累量的检测 | 第46页 |
| 3.1.2 结果与讨论 | 第46-64页 |
| 3.1.2.1 TYLCV接种本氏烟 | 第46-47页 |
| 3.1.2.2 iTRAQ技术蛋白鉴定及分析 | 第47-53页 |
| 3.1.2.3 差异表达蛋白功能分析 | 第53-57页 |
| 3.1.2.4 差异蛋白转录本表达分析 | 第57-59页 |
| 3.1.2.5 沉默候选基因接种TYLCV后本氏烟症状 | 第59-64页 |
| 3.2 差异表达蛋白NbCPI负调控TYLCV侵染本氏烟 | 第64-75页 |
| 3.2.1 材料与方法 | 第64-68页 |
| 3.2.1.1 材料 | 第65-66页 |
| 3.2.1.2 Southern blot | 第66页 |
| 3.2.1.3 共聚焦显微镜观察NbCPI蛋白亚细胞定位 | 第66页 |
| 3.2.1.4 双分子荧光互补实验 | 第66-67页 |
| 3.2.1.5 酵母双杂交实验 | 第67-68页 |
| 3.2.1.5.1 质粒转化酵母菌株Gold(LiAc法) | 第67页 |
| 3.2.1.5.2 酵母互作及自激活活性的检测 | 第67-68页 |
| 3.2.2 结果与讨论 | 第68-75页 |
| 3.2.2.1 Southern blot检测沉默NbCPI后TYLCV的病毒积累量 | 第68页 |
| 3.2.2.2 NbCPI的亚细胞定位 | 第68-69页 |
| 3.2.2.3 NbCPI与TYLCV蛋白互作 | 第69-75页 |
| 4 全文小结 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-85页 |
| 附录A: 本论文所用缩写词及中英文对照 | 第85-87页 |
| 附录B: 常用缓冲液及培养基配方 | 第87-91页 |
