| 中文摘要 | 第4-10页 |
| abstract | 第10-16页 |
| 英文缩略词表 | 第27-29页 |
| 第1章 绪论 | 第29-53页 |
| 1.1 糖尿病视网膜病变的发病机制概述 | 第29-34页 |
| 1.1.1 糖尿病视网膜病变简介 | 第29页 |
| 1.1.2 视网膜血管：从发育到糖尿病的早期变化 | 第29-30页 |
| 1.1.3 周细胞的重要性 | 第30-31页 |
| 1.1.4 血管退化的影响 | 第31页 |
| 1.1.5 早期糖尿病视网膜病变模型的建立 | 第31-32页 |
| 1.1.6 糖尿病视网膜病变的生化研究 | 第32-33页 |
| 1.1.7 糖尿病视网膜病变中的反应性代谢物 | 第33-34页 |
| 1.2 microRNA在糖尿病视网膜病变中的研究进展 | 第34-46页 |
| 1.2.1 microRNA简介 | 第34-35页 |
| 1.2.2 糖尿病视网膜病变中异常表达的miRNAs | 第35-37页 |
| 1.2.3 在糖尿病视网膜病变中参与不同通路的特定miRNA及其靶基因 | 第37-45页 |
| 1.2.4 miRNA参与糖尿病视网膜病变的机制研究小结与前景展望 | 第45-46页 |
| 1.3 Robo4在糖尿病视网膜病变中的研究现况 | 第46-53页 |
| 1.3.1 Robo4简介 | 第46-47页 |
| 1.3.2 Robo4在血管形成中发挥的作用 | 第47-49页 |
| 1.3.3 Robo4参与糖尿病视网膜病变的机制及影响 | 第49页 |
| 1.3.4 在糖尿病视网膜病变中,HIF-1α/SP1与Robo4的调控关系 | 第49-53页 |
| 第2章 HIF-1α、SP1、Robo4和miRNAs在糖尿病大鼠视网膜的表达及定位情况 | 第53-69页 |
| 2.1 实验材料 | 第53-56页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第53-54页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第54-55页 |
| 2.1.3 实验器材 | 第55页 |
| 2.1.4 溶液配制 | 第55-56页 |
| 2.2 实验方法和步骤 | 第56-60页 |
| 2.2.1 STZ诱导的糖尿病大鼠模型的建立和观察 | 第56-57页 |
| 2.2.2 检测各组大鼠视网膜中的HIF-1α、SP1和Robo4的表达水平 | 第57-59页 |
| 2.2.3 检测各组大鼠视网膜中的miRNAs的表达水平 | 第59-60页 |
| 2.2.4 数据统计分析 | 第60页 |
| 2.3 实验结果 | 第60-65页 |
| 2.3.1 STZ诱导的糖尿病大鼠模型的建立和观察 | 第60-63页 |
| 2.3.2 HIF-1α、SP1和Robo4在正常大鼠和糖尿病大鼠视网膜中的表达水平 | 第63-65页 |
| 2.3.3 糖尿病大鼠视网膜中的miRNAs的表达变化 | 第65页 |
| 2.4 讨论 | 第65-69页 |
| 第3章 人视网膜色素上皮细胞在高糖环境下HIF-1α、SP1、Robo4和miRNAs的表达研究 | 第69-83页 |
| 3.1 实验材料 | 第69-71页 |
| 3.1.1 人视网膜色素上皮细胞 | 第69-70页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第70页 |
| 3.1.3 实验器材 | 第70-71页 |
| 3.1.4 溶液配制 | 第71页 |
| 3.2 实验方法和步骤 | 第71-75页 |
| 3.2.1 ARPE-19的常规培养 | 第71页 |
| 3.2.2 ARPE-19细胞系的STR鉴定 | 第71页 |
| 3.2.3 ARPE-19的高糖培养和实验分组 | 第71-72页 |
| 3.2.4 高糖环境下ARPE-19细胞中的HIF-1α、SP1、Robo4和miRNAs的mRNA表达水平检测 | 第72-73页 |
| 3.2.5 Western blot法检测高糖环境下ARPE-19细胞中HIF-1α、SP1和Robo4的蛋白表达水平 | 第73-74页 |
| 3.2.6 高糖环境下ARPE-19细胞中的HIF-1α、SP1和Robo4的免疫荧光双染 | 第74-75页 |
| 3.2.7 数据统计分析 | 第75页 |
| 3.3 实验结果 | 第75-80页 |
| 3.3.1 ARPE-19细胞系STR鉴定 | 第75-76页 |
| 3.3.2 高糖环境下RPE细胞中的HIF-1α、SP1和Robo4的mRNA表达水平 | 第76-77页 |
| 3.3.3 高糖环境下RPE细胞中的miRNAs表达情况 | 第77-78页 |
| 3.3.4 高糖环境下RPE细胞中的HIF-1α、SP1和Robo4的蛋白表达情况 | 第78-79页 |
| 3.3.5 高糖环境下RPE细胞中的HIF-1α、SP1和Robo4的免疫荧光双重染色 | 第79-80页 |
| 3.4 讨论 | 第80-83页 |
| 第4章 人视网膜色素上皮细胞在低氧环境下HIF-1α、SP1、Robo4和miRNA-146a-5p的表达研究 | 第83-89页 |
| 4.1 实验材料 | 第83-84页 |
| 4.1.1 人视网膜色素上皮细胞 | 第83页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第83-84页 |
| 4.1.3 实验器材 | 第84页 |
| 4.1.4 溶液配制 | 第84页 |
| 4.2 实验方法和步骤 | 第84-85页 |
| 4.2.1 ARPE-19的低氧培养与实验分组 | 第84页 |
| 4.2.2 人视网膜色素上皮细胞在低氧环境下HIF-1α、SP1、Robo4和miR-146a-5p的mRNA表达水平 | 第84页 |
| 4.2.3 Western blot法检测低氧环境下ARPE-19细胞中的HIF-1α、SP1和Robo4的蛋白表达水平 | 第84-85页 |
| 4.2.4 数据统计分析 | 第85页 |
| 4.3 实验结果 | 第85-87页 |
| 4.3.1 低氧环境下RPE细胞中HIF-1α、SP1、Robo4和miR-146a-5p的转录水平变化 | 第85-86页 |
| 4.3.2 低氧环境下RPE细胞中HIF-1α、SP1和Robo4的蛋白水平变化 | 第86-87页 |
| 4.4 讨论 | 第87-89页 |
| 第5章 人视网膜色素上皮细胞在高糖或低氧环境下,HIF-1α可通过SP1调控Robo4的表达变化 | 第89-99页 |
| 5.1 实验材料 | 第89-90页 |
| 5.1.1 人视网膜色素上皮细胞 | 第89-90页 |
| 5.1.2 实验试剂 | 第90页 |
| 5.1.3 实验器材 | 第90页 |
| 5.1.4 溶液配制 | 第90页 |
| 5.2 实验方法和步骤 | 第90-94页 |
| 5.2.1 ARPE-19细胞常规培养、高糖培养和实验分组 | 第90-91页 |
| 5.2.2 ARPE-19细胞常规培养、低氧培养和实验分组 | 第91-92页 |
| 5.2.3 设计及合成siRNA | 第92页 |
| 5.2.4 ARPE-19的siRNA转染 | 第92-93页 |
| 5.2.5 RT-qPCR法检测ARPE-19在高糖或低氧环境下转染siRNA后，HIF-1α、SP1和Robo4的mRNA水平 | 第93页 |
| 5.2.6 Western blot检测ARPE-19在高糖或低氧环境下转染siRNA后，HIF-1α、SP1和Robo4的蛋白水平变化 | 第93页 |
| 5.2.7 数据统计分析 | 第93-94页 |
| 5.3 实验结果 | 第94-97页 |
| 5.3.1 ARPE-19在高糖环境下转染小干扰RNA后,HIF-1α、SP1和Robo4的转录水平变化 | 第94-95页 |
| 5.3.2 ARPE-19在高糖环境下转染小干扰RNA后,HIF-1α、SP1和Robo4的蛋白表达情况 | 第95-96页 |
| 5.3.3 低氧环境下,ARPE-19转染小干扰RNA后,HIF-1α、SP1和Robo4的mRNA水平变化 | 第96页 |
| 5.3.4 低氧环境下,ARPE-19转染小干扰RNA后,HIF-1α、SP1和Robo4的蛋白表达变化 | 第96-97页 |
| 5.4 讨论 | 第97-99页 |
| 第6章 miR-125b-5p直接靶向调控高糖环境下人视网膜色素上皮细胞中的SP1和Robo | 第99-109页 |
| 6.1 实验材料 | 第99-101页 |
| 6.1.1 细胞 | 第99-100页 |
| 6.1.2 实验试剂 | 第100页 |
| 6.1.3 实验器材 | 第100页 |
| 6.1.4 溶液配制 | 第100-101页 |
| 6.2 实验方法和步骤 | 第101-105页 |
| 6.2.1 ARPE-19细胞常规培养、高糖培养和实验分组 | 第101页 |
| 6.2.2 293T细胞常规培养 | 第101页 |
| 6.2.3 合成成熟的miRNAmimic | 第101-102页 |
| 6.2.4 构建野生型/突变型SP1或Robo4质粒 | 第102页 |
| 6.2.5 293T细胞实验分组 | 第102页 |
| 6.2.6 ARPE-19在高糖下的miRNAmimic转染 | 第102-103页 |
| 6.2.7 293T细胞的质粒转染 | 第103-104页 |
| 6.2.8 双荧光素酶检测 | 第104页 |
| 6.2.9 RT-qPCR法检测ARPE-19在高糖环境下转染miRNAmimic后,SP1和Robo4的mRNA水平 | 第104页 |
| 6.2.10 Westernblot检测ARPE-19在高糖环境下转染miRNAmimic后,SP1和Robo4的蛋白水平变化 | 第104-105页 |
| 6.2.11 数据统计分析 | 第105页 |
| 6.3 实验结果 | 第105-108页 |
| 6.3.1 ARPE-19在高糖环境下转染miRNAmimic后miR-125b-5p的表达变化 | 第105-106页 |
| 6.3.2 ARPE-19在高糖环境下转染miRNAmimic后SP1和Robo4的表达变化 | 第106-107页 |
| 6.3.3 miR-125b-5p与SP1和Robo4的结合位点验证 | 第107-108页 |
| 6.4 讨论 | 第108-109页 |
| 第7章 miR-146a-5p直接靶向调控低氧环境下人视网膜色素上皮细胞中的HIF-1α和Robo | 第109-117页 |
| 7.1 实验材料 | 第109-110页 |
| 7.1.1 细胞 | 第109-110页 |
| 7.1.2 实验试剂 | 第110页 |
| 7.1.3 实验器材 | 第110页 |
| 7.1.4 溶液配制 | 第110页 |
| 7.2 实验方法和步骤 | 第110-112页 |
| 7.2.1 ARPE-19细胞常规培养、低氧培养和实验分组 | 第110-111页 |
| 7.2.2 合成成熟的miRNAmimic | 第111页 |
| 7.2.3 构建野生型/突变型HIF-1α或Robo4质粒 | 第111页 |
| 7.2.4 293T细胞实验分组 | 第111页 |
| 7.2.5 ARPE-19的miRNAmimic转染后低氧处置 | 第111-112页 |
| 7.2.6 293T细胞的质粒转染 | 第112页 |
| 7.2.7 双荧光素酶检测 | 第112页 |
| 7.2.8 RT-qPCR法检测ARPE-19在低氧下转染miRNAmimic后,HIF-1α和Robo4的mRNA水平 | 第112页 |
| 7.2.9 Westernblot检测ARPE-19在低氧下转染miRNAmimic后,HIF-1α和Robo4的蛋白水平变化 | 第112页 |
| 7.2.10 数据统计分析 | 第112页 |
| 7.3 实验结果 | 第112-115页 |
| 7.3.1 低氧下ARPE-19转染miRNAmimic后miR-146a-5p的表达变化 | 第112-113页 |
| 7.3.2 低氧下ARPE-19转染miRNAmimic后HIF-1α和Robo4的表达变化 | 第113-114页 |
| 7.3.3 Luciferaseassay验证miR-146a-5p与HIF-1α和Robo4的结合位点 | 第114-115页 |
| 7.4 讨论 | 第115-117页 |
| 第8章 HIF-1α/SP1或miR-125b-5p/miR-146a-5p调控的Robo4对人视网膜色素上皮细胞功能的影响 | 第117-131页 |
| 8.1 实验材料 | 第117-118页 |
| 8.1.1 人视网膜色素上皮细胞 | 第117页 |
| 8.1.2 实验试剂 | 第117-118页 |
| 8.1.3 实验器材 | 第118页 |
| 8.1.4 溶液配制 | 第118页 |
| 8.2 实验方法和步骤 | 第118-122页 |
| 8.2.1 ARPE-19的常规培养、高糖培养和实验分组 | 第118-119页 |
| 8.2.2 ARPE-19的常规培养、低氧培养和实验分组 | 第119-120页 |
| 8.2.3 siRNA和miRNAmimic的设计及合成 | 第120页 |
| 8.2.4 ARPE-19的siRNA或miRNAmimic转染 | 第120页 |
| 8.2.5 MTS检测ARPE-19细胞在不同状态下的细胞活力 | 第120页 |
| 8.2.6 ARPE-19细胞在不同状态下的细胞通透性检测 | 第120-121页 |
| 8.2.7 Transwell小室法检测ARPE-19在不同状态下的细胞迁移能力 | 第121-122页 |
| 8.2.8 数据统计分析 | 第122页 |
| 8.3 实验结果 | 第122-128页 |
| 8.3.1 miRNA介导的HIF-1α/SP1下调Robo4对ARPE-19细胞活力的影响 | 第122-123页 |
| 8.3.2 miRNA介导的HIF-1α/SP1下调Robo4对ARPE-19单层细胞通透性的影响 | 第123-124页 |
| 8.3.3 miRNA介导的HIF-1α/SP1下调Robo4对紧密连接蛋白表达的影响 | 第124-127页 |
| 8.3.4 miRNA介导的HIF-1α/SP1下调Robo4对ARPE-19细胞迁移能力的影响 | 第127-128页 |
| 8.4 讨论 | 第128-131页 |
| 第9章 全文结论 | 第131-133页 |
| 参考文献 | 第133-151页 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 | 第151-153页 |
| 致谢 | 第153页 |
