| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 缩略语表 | 第7-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-29页 |
| ·壳聚糖的研究 | 第11页 |
| ·壳聚糖内切酶的研究进展 | 第11-15页 |
| ·壳聚糖内切酶的发现 | 第11页 |
| ·壳聚糖内切酶的分类 | 第11-12页 |
| ·壳聚糖内切酶的分布 | 第12-13页 |
| ·壳聚糖内切酶的理化性质 | 第13-14页 |
| ·壳聚糖内切酶的应用 | 第14-15页 |
| ·毕赤酵母表达系统的研究进展 | 第15-28页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第15-20页 |
| ·外源蛋白在毕赤酵母中的表达 | 第20-28页 |
| ·本课题的研究目的、意义与创新点 | 第28-29页 |
| 第二章 壳聚糖内切酶基因在毕赤酵母中的重组及筛选多重组子 | 第29-41页 |
| ·实验材料 | 第29-33页 |
| ·菌株与质粒 | 第29页 |
| ·酶 | 第29页 |
| ·引物 | 第29-30页 |
| ·主要试剂 | 第30页 |
| ·主要培养基 | 第30-31页 |
| ·主要溶液 | 第31页 |
| ·酵母表达常用溶液母液的配制 | 第31-32页 |
| ·主要设备 | 第32-33页 |
| ·实验方法 | 第33-37页 |
| ·载体pPIC9K-Csn 的线性化 | 第33-35页 |
| ·酵母菌的电转化 | 第35页 |
| ·毕赤酵母重组子甲醇利用表型的鉴定 | 第35页 |
| ·煮—冻—煮法鉴定阳性克隆子 | 第35-36页 |
| ·多克隆子的筛选 | 第36-37页 |
| ·菌种保存 | 第37页 |
| ·实验结果 | 第37-40页 |
| ·pPIC9K-Csn 线性化 | 第37页 |
| ·重组子的筛选 | 第37-38页 |
| ·高抗性重组菌株的筛选 | 第38-39页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40页 |
| ·重组质粒pPIC9K-Csn 线性化原因 | 第40页 |
| ·巴斯德毕赤酵母的转化方法的选择 | 第40页 |
| ·表达系统的选择 | 第40页 |
| ·小结 | 第40-41页 |
| 第三章 酵母重组子的诱导表达和分析 | 第41-49页 |
| ·实验材料 | 第41-43页 |
| ·菌株 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41页 |
| ·主要培养基 | 第41-42页 |
| ·主要溶液 | 第42-43页 |
| ·主要设备 | 第43页 |
| ·实验方法 | 第43-46页 |
| ·酵母重组子的诱导表达和分析 | 第43-45页 |
| ·诱导产物的SDS-PAGE 电泳检测 | 第45-46页 |
| ·实验结果 | 第46-48页 |
| ·重组酵母菌株生长曲线的测定 | 第46-47页 |
| ·重组菌株诱导表达产物的酶活性的测定 | 第47页 |
| ·重组菌株诱导表达产物SDS-PAGE 的测定 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48页 |
| ·小结 | 第48-49页 |
| 第四章 重组毕赤酵母发酵条件的优化 | 第49-65页 |
| ·实验材料 | 第49页 |
| ·主要试剂 | 第49页 |
| ·主要培养基 | 第49页 |
| ·主要设备 | 第49页 |
| ·实验方法 | 第49-54页 |
| ·酵母细胞密度测定 | 第49页 |
| ·酶活测定 | 第49页 |
| ·碳源的影响 | 第49-50页 |
| ·氮源的影响 | 第50-51页 |
| ·培养基pH 值的影响 | 第51页 |
| ·接种量的影响 | 第51-52页 |
| ·通气量对菌体生物量和产酶的影响 | 第52-53页 |
| ·温度对菌体生物量和产酶的影响 | 第53页 |
| ·甲醇对菌体生物量和产酶的影响 | 第53-54页 |
| ·正交实验优化发酵条件 | 第54页 |
| ·正交实验的验证 | 第54页 |
| ·实验结果 | 第54-63页 |
| ·碳源对生长期菌体和诱导期产酶的影响 | 第54-56页 |
| ·氮源对生长期菌体和诱导期产酶的影响 | 第56-57页 |
| ·培养基pH 值对生长期菌体和诱导期产酶的影响 | 第57-58页 |
| ·接种量对生长期菌体和诱导期产酶的影响 | 第58-59页 |
| ·通气量对菌体生物量和诱导期产酶的影响 | 第59-60页 |
| ·温度对菌体生物量和诱导期产酶的影响 | 第60-61页 |
| ·甲醇对菌体生物量和诱导期产酶的影响 | 第61-62页 |
| ·正交实验优化发酵条件 | 第62-63页 |
| ·正交实验的验证 | 第63页 |
| ·讨论 | 第63-64页 |
| ·诱导阶段甘油含量 | 第63页 |
| ·诱导阶段接种量 | 第63页 |
| ·诱导阶段甲醇含量 | 第63-64页 |
| ·诱导时间 | 第64页 |
| ·小结 | 第64-65页 |
| 总结 | 第65-66页 |
| 展望 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 硕士期间在校发表论文和参与的科研情况 | 第74页 |