| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 英文缩写表 | 第8-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-22页 |
| 1 蛋白质降解 | 第12-14页 |
| 1.1 泛素-蛋白酶体途径 | 第12-13页 |
| 1.2 溶酶体途径 | 第13-14页 |
| 2 泛素-蛋白酶体的组成 | 第14-16页 |
| 2.1 26S | 第14-15页 |
| 2.2 E2 | 第15页 |
| 2.3 E3 | 第15-16页 |
| 3 泛素-蛋白酶体通路的研究意义 | 第16-18页 |
| 3.1 F-box与肿瘤的关系 | 第17-18页 |
| 4 PRMT6研究概述 | 第18-20页 |
| 4.1 PRMT6主要功能 | 第18-19页 |
| 4.2 PRMT6与肿瘤形成的机制 | 第19-20页 |
| 4.3 PRMT6研究进展 | 第20页 |
| 5 本课题的研究意义 | 第20-22页 |
| 第二章 敲除PRMT6导致肺癌细胞增殖抑制 | 第22-36页 |
| 本章前言 | 第22页 |
| 1 本章研究内容 | 第22页 |
| 2 实验材料 | 第22-23页 |
| 2.1 细胞 | 第22-23页 |
| 2.2 仪器 | 第23页 |
| 2.3 主要试剂 | 第23页 |
| 3 构建敲除PRMT6的H1299稳定细胞株 | 第23-36页 |
| 3.1 确定敲除PRMT6靶序列，设计三对sg RNA引物 | 第23-24页 |
| 3.2 敲除H1299细胞中PRMT6的CRISPR-Cas9质粒的构建 | 第24-28页 |
| 3.3 敲除PRMT6的稳定细胞株的加药筛选 | 第28-31页 |
| 3.4 克隆形成试验分析敲除PRMT6对细胞增殖能力的影响 | 第31页 |
| 3.5 稳定敲除PRMT6对H1299细胞迁移和侵袭能力的影响 | 第31-32页 |
| 3.6 生存分析 | 第32-33页 |
| 3.7 实验结果 | 第33-36页 |
| 第三章 PRMT6在细胞中通过泛素蛋白酶体途径降解 | 第36-70页 |
| 本章前言 | 第36页 |
| 1 实验材料 | 第36-37页 |
| 1.1 细胞培养 | 第36页 |
| 1.2 仪器 | 第36-37页 |
| 2 PRMT6在H1299细胞中经泛素-蛋白酶体途径降解 | 第37-41页 |
| 2.1 本节研究内容 | 第38页 |
| 2.2 PRMT6在H1299细胞中稳定性研究 | 第38页 |
| 2.3 H1299细胞中过表达ubiquitin对PRMT6降解的影响 | 第38-39页 |
| 2.4 免疫共沉淀实验检测PRMT6在细胞内存在多泛素化修饰 | 第39页 |
| 2.5 实验结果 | 第39-41页 |
| 2.6 本节讨论 | 第41页 |
| 3 FBXO24蛋白诱导PRMT6通过泛素-蛋白酶体途径降解 | 第41-46页 |
| 3.1 本节研究内容 | 第41-42页 |
| 3.2 免疫共沉淀实验证明FBXO24与PRMT6之间的相互作用 | 第42页 |
| 3.3 过表达FBXO24蛋白对PRMT6在H1299细胞内水平的影响 | 第42页 |
| 3.4 筛选Knock-down FBXO24效果最好的sh RNA质粒 | 第42页 |
| 3.5 Knock-down FBXO24后PRMT6及FBXO24的蛋白水平 | 第42-43页 |
| 3.6 实验结果 | 第43-45页 |
| 3.7 本节讨论 | 第45-46页 |
| 4 Lys 369 是PRMT6泛素化修饰的位点 | 第46-57页 |
| 4.1 本节研究内容 | 第46页 |
| 4.2 PRMT6N-末端和C-末端截短突变体的构建 | 第46-52页 |
| 4.3 H1299细胞中表达PRMT6 N-末端和C-末端缺失突变体 | 第52页 |
| 4.4 H1299细胞中共表达FBXO24与PRMT6的点突变体 | 第52-54页 |
| 4.5 Half-life实验研究PRMT6点突变体蛋白稳定性 | 第54-55页 |
| 4.6 实验结果 | 第55-57页 |
| 5 FBXO24结合在PRMT6上的VGGRF氨基酸序列 | 第57-62页 |
| 5.1 本节研究内容 | 第57页 |
| 5.2 PRMT6截短突变体的构建 | 第57-58页 |
| 5.3 FBXO24与PRMT6截短突变体结合实验 | 第58-59页 |
| 5.4 实验结果 | 第59-62页 |
| 6 PRMT6影响H1299细胞的细胞周期 | 第62-70页 |
| 6.1 本节研究内容 | 第62-63页 |
| 6.2 PRMT6点突变体在稳定敲除PRMT6的H1299细胞中的稳定性研究 | 第63页 |
| 6.3 通过流式细胞术研究PRMT6对H1299细胞周期的影响 | 第63-64页 |
| 6.4 构建稳定过表达FBXO24的H1299细胞株 | 第64-65页 |
| 6.5 稳定过表达FBXO24的H1299细胞株中PRMT6和FBXO24的表达水平 | 第65页 |
| 6.6 克隆形成实验研究过表达 FBXO24 对 H1299 细胞增殖能力的影响 | 第65页 |
| 6.7 过表达FBXO24对H1299细胞迁移和侵袭能力的影响 | 第65-66页 |
| 6.8 实验结果 | 第66-70页 |
| 第四章 全文总结及展望 | 第70-73页 |
| 1 结论 | 第70-71页 |
| 2 本研究的主要创新点 | 第71-72页 |
| 3 展望 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-80页 |
| 硕士期间发表论文及专利 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
