| 摘要 | 第3-5页 |
| abstract | 第5-7页 |
| 第1章 引言 | 第12-20页 |
| 1.1 禽流感病毒 | 第12-14页 |
| 1.1.1 禽流感简介 | 第12-13页 |
| 1.1.2 禽流感病毒的结构分类及功能 | 第13-14页 |
| 1.2 流感病毒分子生物学检测技术 | 第14-15页 |
| 1.2.1 基于PCR的检测技术 | 第14页 |
| 1.2.2 基于核酸序列的检测技术 | 第14-15页 |
| 1.2.3 基于环介导等温扩增的检测技术 | 第15页 |
| 1.3 滚环扩增技术的分类和特性 | 第15-17页 |
| 1.3.1 线性和指数滚环扩增 | 第15-16页 |
| 1.3.2 锁式探针滚环扩增 | 第16页 |
| 1.3.3 自生成引物滚环扩增 | 第16-17页 |
| 1.4 适体概述 | 第17-18页 |
| 1.5 可视化检测 | 第18页 |
| 1.6 本课题来源、研究思路与内容 | 第18-20页 |
| 1.6.1 本课题的来源与研究意义 | 第18-19页 |
| 1.6.2 本课题的研究思路 | 第19页 |
| 1.6.3 本课题的主要内容 | 第19-20页 |
| 第2章 滚环扩增方法的研究 | 第20-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-23页 |
| 2.1.1 实验试剂与耗材 | 第20-22页 |
| 2.1.2 试剂配制 | 第22-23页 |
| 2.2 检测技术通用步骤 | 第23-25页 |
| 2.2.1 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第23-24页 |
| 2.2.2 琼脂糖核酸电泳 | 第24-25页 |
| 2.3 最佳成环条件探索 | 第25-26页 |
| 2.4 最佳扩增条件探索 | 第26-28页 |
| 2.4.1 bstDNA聚合酶和phi29DNA聚合酶扩增效果比较 | 第26-27页 |
| 2.4.2 环用量探索 | 第27页 |
| 2.4.3 检测时间和灵敏度优化 | 第27-28页 |
| 2.5 H7N9特征基因检测 | 第28-29页 |
| 2.5.1 H7N9特征基因的获取 | 第28页 |
| 2.5.2 锁式探针成环检测H7N9特征基因 | 第28-29页 |
| 2.6 结果与分析 | 第29-36页 |
| 2.6.1 最佳成环条件分析 | 第29-30页 |
| 2.6.2 最佳扩增条件分析 | 第30-34页 |
| 2.6.3 H7N9检测验证分析 | 第34-36页 |
| 2.7 小结和讨论 | 第36-37页 |
| 2.7.1 小结 | 第36页 |
| 2.7.2 讨论 | 第36-37页 |
| 第3章 自生成引物滚环扩增方法的研究 | 第37-55页 |
| 3.1 实验材料 | 第37-39页 |
| 3.1.1 实验试剂与耗材 | 第37-39页 |
| 3.1.2 试剂配制 | 第39页 |
| 3.2 引物三通PG-RCA可行性分析 | 第39-41页 |
| 3.3 引物三通PG-RCA扩增条件优化 | 第41-43页 |
| 3.3.1 改变扩增体系buffer | 第41页 |
| 3.3.2 降低dNTP和酶浓度 | 第41页 |
| 3.3.3 稀释模板浓度、探针浓度和酶浓度 | 第41页 |
| 3.3.4 改变bst和Nb.Bsml的比例和用量 | 第41页 |
| 3.3.5 改变探针序列 | 第41-43页 |
| 3.4 PG-RCA影响因素探索 | 第43-45页 |
| 3.4.1 排查PG-RCA影响因素 | 第43-44页 |
| 3.4.2 换用限制性切口酶 | 第44-45页 |
| 3.5 结果与分析 | 第45-54页 |
| 3.5.1 PG-RCA可行性分析 | 第45-47页 |
| 3.5.2 PG-RCA扩增条件优化分析 | 第47-50页 |
| 3.5.3 PG-RCA影响因素分析 | 第50-54页 |
| 3.6 小结和讨论 | 第54-55页 |
| 3.6.1 小结 | 第54页 |
| 3.6.2 讨论 | 第54-55页 |
| 第4章 可视化检测 | 第55-69页 |
| 4.1 实验材料 | 第55-56页 |
| 4.1.1 实验试剂与耗材 | 第55页 |
| 4.1.2 试剂配制 | 第55-56页 |
| 4.2 HNB和EBT显色条件探索 | 第56-58页 |
| 4.2.1 Mg~(2+)浓度和pH对显色的影响 | 第56-57页 |
| 4.2.2 dNTP浓度对显色的影响 | 第57-58页 |
| 4.3 扩增反应验证最佳显色条件 | 第58-60页 |
| 4.3.1 最佳Mg~(2+)和dNTP浓度探索 | 第58-60页 |
| 4.3.2 验证最佳显色条件 | 第60页 |
| 4.4 用HNB显色法检测RCA扩增的特异性和灵敏度 | 第60-61页 |
| 4.4.1 特异性检测 | 第60-61页 |
| 4.4.2 检测限探索 | 第61页 |
| 4.5 结果与分析 | 第61-67页 |
| 4.5.1 显色条件探索结果 | 第61-64页 |
| 4.5.2 扩增反应探索最佳条件 | 第64-66页 |
| 4.5.3 RCA扩增技术特异性和检测限分析 | 第66-67页 |
| 4.6 小结和讨论 | 第67-69页 |
| 4.6.1 小结 | 第67-68页 |
| 4.6.2 讨论 | 第68-69页 |
| 第5章 适体初探 | 第69-85页 |
| 5.1 实验材料 | 第69-70页 |
| 5.1.1 实验试剂与耗材 | 第69-70页 |
| 5.1.2 试剂配制 | 第70页 |
| 5.2 石英晶体微天平通用步骤 | 第70-71页 |
| 5.3 方案设计 | 第71-76页 |
| 5.3.1 检测病毒方案设计 | 第71-73页 |
| 5.3.2 找寻合适适体 | 第73-75页 |
| 5.3.3 初步鉴定方案的可行性 | 第75-76页 |
| 5.4 检测适体和靶标结合力 | 第76-77页 |
| 5.4.1 凝胶阻滞验证 | 第76-77页 |
| 5.4.2 石英晶体微天平验证 | 第77页 |
| 5.5 结果与分析 | 第77-83页 |
| 5.5.1 初步分析方案的可行性 | 第77-80页 |
| 5.5.2 凝胶阻滞实验分析 | 第80-81页 |
| 5.5.3 石英晶体微天平实验分析 | 第81-83页 |
| 5.6 小结和讨论 | 第83-85页 |
| 5.6.1 小结 | 第83-84页 |
| 5.6.2 讨论 | 第84-85页 |
| 第6章 结论 | 第85-87页 |
| 6.1 研究总结 | 第85-86页 |
| 6.2 创新点 | 第86页 |
| 6.3 需进一步开展的研究 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 个人简历及研究成果 | 第92页 |
