| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 英文缩略词表 | 第12-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-22页 |
| 1.1 酶法脱墨 | 第13-14页 |
| 1.1.1 废纸脱墨的现状 | 第13页 |
| 1.1.2 酶法脱墨的原理 | 第13-14页 |
| 1.2 内切纤维素酶及其在脱墨中的应用 | 第14-16页 |
| 1.2.1 内切纤维素酶的来源 | 第14-15页 |
| 1.2.2 内切纤维素酶的结构 | 第15页 |
| 1.2.3 内切纤维素酶在废纸脱墨中的应用 | 第15-16页 |
| 1.3 甾醇酯酶及其在脱墨中的应用 | 第16-19页 |
| 1.3.1 甾醇酯酶的来源 | 第16-17页 |
| 1.3.2 甾醇酯酶的催化机理 | 第17-18页 |
| 1.3.3 甾醇酯酶在废纸脱墨中的应用 | 第18-19页 |
| 1.4 毕赤酵母表达系统 | 第19-20页 |
| 1.4.1 毕赤酵母表达系统的优势 | 第19页 |
| 1.4.2 毕赤酵母高效表达外源蛋白策略 | 第19-20页 |
| 1.5 本课题研究的意义及内容 | 第20-22页 |
| 1.5.1 本课题的研究意义 | 第20-21页 |
| 1.5.2 本课题的主要研究内容 | 第21-22页 |
| 第二章 内切纤维素酶EG1在毕赤酵母中的高表达和酶学性质分析 | 第22-58页 |
| 2.1 引言 | 第22页 |
| 2.2 材料与方法 | 第22-26页 |
| 2.2.1 菌株和质粒 | 第22页 |
| 2.2.2 主要仪器与设备 | 第22-23页 |
| 2.2.3 主要实验试剂 | 第23-24页 |
| 2.2.4 培养基与溶液的配制 | 第24-26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-44页 |
| 2.3.1 菌株的培养与保存方法 | 第26-27页 |
| 2.3.2 重组载体pPICZαA/EG1的构建 | 第27-31页 |
| 2.3.3 多拷贝重组质粒的构建 | 第31-34页 |
| 2.3.4 EG1重组毕赤酵母菌株的构建 | 第34-36页 |
| 2.3.5 重组毕赤酵母菌株目的基因拷贝数鉴定 | 第36-38页 |
| 2.3.6 重组毕赤酵母菌株的诱导发酵和酶活检测 | 第38-40页 |
| 2.3.7 重组蛋白EG1的SDS-PAGE及蛋白浓度分析 | 第40-41页 |
| 2.3.8 转录因子HAC1或和P180的重组载体的获取和构建 | 第41-42页 |
| 2.3.9 过表达转录因子高拷贝GS115/EG1_(8)重组菌株构建 | 第42页 |
| 2.3.10 重组菌株GS115/EG1_(8c)-HAC1/p180的诱导发酵和酶活检测 | 第42页 |
| 2.3.11 重组菌株GS115/EG1_(8c)-HAC1稳定性分析 | 第42-43页 |
| 2.3.12 重组菌株GS115/EG1_(8c)-HAC1的3L罐诱导发酵和酶活检测 | 第43页 |
| 2.3.13 重组蛋白EG1的酶学性质分析 | 第43-44页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第44-56页 |
| 2.4.1 重组载体pPICZαA/EG1的构建 | 第44页 |
| 2.4.2 多拷贝重组质粒的构建 | 第44-45页 |
| 2.4.3 重组多拷贝毕赤酵母菌株的筛选与鉴定 | 第45-46页 |
| 2.4.4 重组毕赤酵母菌株目的基因拷贝数鉴定 | 第46-48页 |
| 2.4.5 多拷贝重组菌株的诱导发酵和酶活检测 | 第48-49页 |
| 2.4.6 重组蛋白EG1的SDS-PAGE及蛋白浓度分析 | 第49-50页 |
| 2.4.7 转录因子HAC1或P180的重组载体构建 | 第50-51页 |
| 2.4.8 过表达转录因子高拷贝GS115/EG1_(8c)重组菌株构建 | 第51页 |
| 2.4.9 重组菌株GS115/EG1_(8c)-HAC1/p180的诱导发酵和酶活检测 | 第51-53页 |
| 2.4.10 重组菌株GS115/EG1_(8c)-HAC1稳定性分析 | 第53页 |
| 2.4.11 重组菌株GS115/EG1_(8c)-HAC13L罐诱导发酵和酶活检测 | 第53-54页 |
| 2.4.12 重组蛋白EG1的酶学性质分析 | 第54-56页 |
| 2.5 本章小结 | 第56-58页 |
| 第三章 链霉菌甾醇酯酶CHE在毕赤酵母中的高效表达及酶学性质分析 | 第58-70页 |
| 3.1 引言 | 第58页 |
| 3.2 材料与方法 | 第58-59页 |
| 3.2.1 菌株和质粒 | 第58页 |
| 3.2.2 主要仪器与设备 | 第58页 |
| 3.2.3 主要实验试剂 | 第58页 |
| 3.2.4 培养基与溶液的配制 | 第58-59页 |
| 3.3 实验方法 | 第59-62页 |
| 3.3.1 菌株的培养和保存方法 | 第59页 |
| 3.3.2 重组载体的构建 | 第59-60页 |
| 3.3.3 重组毕赤酵母菌株x33/CHE、G115/CHE的构建 | 第60-61页 |
| 3.3.4 重组毕赤酵母菌株的诱导发酵和酶活检测 | 第61页 |
| 3.3.5 重组蛋白CHE的SDS-PAGE分析和浓度检测 | 第61页 |
| 3.3.6 重组蛋白CHE的酶学性质分析 | 第61-62页 |
| 3.4 结果及讨论 | 第62-68页 |
| 3.4.1 重组载体pPICZαA/CHE1、pPICHKA/CHE的构建 | 第62-63页 |
| 3.4.2 CHE重组毕赤酵母菌株的筛选与鉴定 | 第63-64页 |
| 3.4.3 重组毕赤酵母菌株的诱导发酵和酶活检测 | 第64-66页 |
| 3.4.4 重组蛋白CHE的SDS-PAGE及蛋白浓度分析 | 第66页 |
| 3.4.5 重组蛋白CHE的酶学性质分析 | 第66-68页 |
| 3.5 本章小结 | 第68-70页 |
| 结论与展望 | 第70-72页 |
| 结论 | 第70页 |
| 创新点 | 第70页 |
| 展望 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-77页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 附件 | 第79页 |
