| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 引言 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-28页 |
| 1 锦鲤疱疹病毒病的研究进展 | 第13-20页 |
| 1.1 锦鲤疱疹病毒病简介 | 第13页 |
| 1.2 锦鲤疱疹病毒病的流行病学研究 | 第13-15页 |
| 1.2.1 锦鲤疱疹病毒的感染对象 | 第14页 |
| 1.2.2 锦鲤疱疹病毒病的流行范围及季节 | 第14页 |
| 1.2.3 锦鲤疱疹病毒的临床症状 | 第14-15页 |
| 1.2.4 锦鲤疱疹病毒的致病机理 | 第15页 |
| 1.2.5 锦鲤疱疹病毒的分类及命名 | 第15页 |
| 1.3 锦鲤疱疹病毒的特征及理化特性 | 第15-17页 |
| 1.3.1 锦鲤疱疹病毒的形态特征及分子结构 | 第15-16页 |
| 1.3.2 锦鲤疱疹病毒的理化特性 | 第16页 |
| 1.3.3 锦鲤疱疹病毒的基因组特征 | 第16-17页 |
| 1.3.4 锦鲤疱疹病毒（KHV）敏感细胞系的研究 | 第17页 |
| 1.4 锦鲤疱疹病毒的诊断方法 | 第17-20页 |
| 1.4.1 细胞培养 | 第17-18页 |
| 1.4.2 组织病理学 | 第18页 |
| 1.4.3 透射电镜观察 | 第18页 |
| 1.4.4 PCR检测 | 第18-19页 |
| 1.4.5 环介导等温扩增技术（LAMP）检测 | 第19页 |
| 1.4.6 免疫荧光检测 | 第19页 |
| 1.4.7 酶联免疫吸附技术（ELISA） | 第19-20页 |
| 1.4.8 免疫学技术 | 第20页 |
| 1.4.9 核酸探针检测 | 第20页 |
| 2 交叉引物等温扩增（CPA）技术原理及应用 | 第20-26页 |
| 2.1 交叉引物等温扩增技术概述 | 第20-25页 |
| 2.1.1 交叉引物等温扩增（CPA）技术的扩增原理 | 第22-23页 |
| 2.1.2 SCPA的引物设计原则 | 第23页 |
| 2.1.3 CPA反应的条件及体系 | 第23页 |
| 2.1.4 CPA扩增的结果分析 | 第23-25页 |
| 2.1.5 CPA的技术特点 | 第25页 |
| 2.2 CPA技术的应用现状 | 第25-26页 |
| 2.3 CPA技术的应用前景及产品开发 | 第26页 |
| 3 本论文研究的目的与意义 | 第26-28页 |
| 第二章 锦鲤疱疹病毒SPH基因标准质粒的构建 | 第28-38页 |
| 1 材料与方法 | 第28-34页 |
| 1.1 主要仪器与设备 | 第28页 |
| 1.2 实验材料与试剂 | 第28-29页 |
| 1.3 溶液配制 | 第29页 |
| 1.4 模板制备 | 第29-31页 |
| 1.4.1 锦鲤鳍条组织细胞（Koi-Fin）的传代培养 | 第29-30页 |
| 1.4.2 锦鲤疱疹病毒（KHV）的增殖 | 第30页 |
| 1.4.3 锦鲤疱疹病毒的电镜观察 | 第30页 |
| 1.4.4 病毒DNA提取 | 第30-31页 |
| 1.5 Sph基因标准质粒DNA的构建 | 第31-34页 |
| 1.5.1 待测目的基因的选择 | 第31页 |
| 1.5.2 目的片段PCR扩增 | 第31-32页 |
| 1.5.3 目的片段回收 | 第32页 |
| 1.5.4 PCR产物的克隆与验证 | 第32-34页 |
| 2 结果与分析 | 第34-37页 |
| 2.1 KHV的细胞培养与电镜观察 | 第34-35页 |
| 2.2 PCR产物的克隆与测序分析 | 第35-37页 |
| 3 讨论 | 第37-38页 |
| 第三章 锦鲤疱疹病毒单交叉引物等温扩增检测体系的建立与优化 | 第38-59页 |
| 1 材料与方法 | 第38-47页 |
| 1.1 仪器与设备 | 第38-39页 |
| 1.2 实验材料与试剂 | 第39页 |
| 1.3 所用软件 | 第39页 |
| 1.4 溶液配制 | 第39页 |
| 1.5 引物设计 | 第39-40页 |
| 1.6 KHV-SCPA检测体系建立及条件的优化 | 第40-46页 |
| 1.6.1 KHV-SCPA基础扩增体系的建立 | 第40-41页 |
| 1.6.2 不同交叉引物浓度组合的优化 | 第41-42页 |
| 1.6.3 Mg~(2+)浓度的优化 | 第42-43页 |
| 1.6.4 dNTPs浓度的优化 | 第43页 |
| 1.6.5 Betaine浓度的优化 | 第43-44页 |
| 1.6.6 Bst酶的优化 | 第44-45页 |
| 1.6.7 反应温度的优化 | 第45-46页 |
| 1.6.8 反应时间的优化 | 第46页 |
| 1.7 反应结果的判定 | 第46页 |
| 1.7.1 电泳观察 | 第46页 |
| 1.7.2 酶切鉴定 | 第46页 |
| 1.8 KHV-SCPA方法的特异性检测 | 第46-47页 |
| 1.9 灵敏度检测 | 第47页 |
| 1.9.1 KHV-SCPA的灵敏度检测 | 第47页 |
| 1.9.2 常规PCR的灵敏度检测 | 第47页 |
| 2 结果与分析 | 第47-56页 |
| 2.1 KHV-SCPA检测方法的建立及条件优化 | 第47-53页 |
| 2.1.1 KHV-SCPA基础扩增体系的建立 | 第47-48页 |
| 2.1.2 交叉引物浓度组合的优化 | 第48-49页 |
| 2.1.3 Mg~(2+)浓度的优化 | 第49页 |
| 2.1.4 dNTPs浓度的优化 | 第49-50页 |
| 2.1.5 Betaine浓度的优化 | 第50-51页 |
| 2.1.6 Bst酶的优化 | 第51页 |
| 2.1.7 反应温度的优化 | 第51-52页 |
| 2.1.8 反应时间的优化 | 第52-53页 |
| 2.2 反应结果的判定 | 第53-54页 |
| 2.2.1 电泳观察 | 第53页 |
| 2.2.2 酶切鉴定 | 第53-54页 |
| 2.3 特异性实验 | 第54页 |
| 2.4 灵敏度实验 | 第54-56页 |
| 2.4.1 KHV-SCPA灵敏度检测 | 第54-55页 |
| 2.4.2 常规PCR灵敏度检测 | 第55-56页 |
| 3 讨论 | 第56-59页 |
| 3.1 引物浓度对KHV-SCPA扩增效果的影响 | 第56-57页 |
| 3.2 Mg~(2+)浓度对KHV-SCPA扩增效果的影响 | 第57页 |
| 3.3 dNTPs对KHV-SCPA扩增效果的影响 | 第57页 |
| 3.4 Betaine对KHV-SCPA扩增效果的影响 | 第57页 |
| 3.5 Bst酶对KHV-SCPA扩增效果的影响 | 第57-58页 |
| 3.6 温度对KHV-SCPA扩增效果的影响 | 第58页 |
| 3.7 时间对KHV-SCPA扩增效果的影响 | 第58-59页 |
| 第四章 核酸试纸条可视化检测 | 第59-65页 |
| 1 材料与方法 | 第59-61页 |
| 1.1 仪器与设备 | 第59页 |
| 1.2 实验材料与试剂 | 第59-60页 |
| 1.3 所用软件 | 第60页 |
| 1.4 溶液配制 | 第60页 |
| 1.5 引物设计 | 第60-61页 |
| 1.6 核酸快速检测试纸条检测 | 第61页 |
| 1.6.1 特异性实验 | 第61页 |
| 1.6.2 灵敏度实验 | 第61页 |
| 2 结果与分析 | 第61-63页 |
| 2.1 核酸试纸条特异性检测 | 第61-62页 |
| 2.2 核酸试纸条灵敏度检测 | 第62-63页 |
| 3 讨论 | 第63-65页 |
| 3.1 KHV-SCPA法与常规PCR检测方法的比较 | 第63页 |
| 3.2 污染问题 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 附录一 | 第70-72页 |
| 附录二 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
