| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略词表 | 第12-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-24页 |
| 1.1 毕赤酵母表面展示系统 | 第13-16页 |
| 1.1.1 毕赤酵母表面展示特点 | 第13-14页 |
| 1.1.2 毕赤酵母表面展示应用 | 第14-15页 |
| 1.1.3 脂肪酶在毕赤酵母表面展示及应用 | 第15-16页 |
| 1.2 基于絮凝素的表面展示系统 | 第16-20页 |
| 1.2.1 絮凝素分子结构 | 第16-17页 |
| 1.2.2 絮凝功能区 FFD | 第17-19页 |
| 1.2.3 絮凝素展示系统 | 第19-20页 |
| 1.3 增强型绿色荧光蛋白 EGFP | 第20-22页 |
| 1.3.1 EGFP 结构与功能 | 第20-22页 |
| 1.3.2 EGFP 应用 | 第22页 |
| 1.4 论文研究背景与研究意义 | 第22-23页 |
| 1.5 本论文的主要研究内容 | 第23-24页 |
| 第二章 基于 FFD 锚定的毕赤酵母表面展示蛋白的定量 | 第24-54页 |
| 2.1 前言 | 第24-25页 |
| 2.2 | 第25-29页 |
| 2.2.1 主要仪器与设备 | 第25-26页 |
| 2.2.2 质粒与菌株 | 第26页 |
| 2.2.3 主要试剂与酶 | 第26-27页 |
| 2.2.4 培养基与缓冲液 | 第27-29页 |
| 2.3 技术路线 | 第29-30页 |
| 2.4 实验方法 | 第30-38页 |
| 2.4.1 酵母表面展示 EGFP、CALB 载体的构建 | 第30-35页 |
| 2.4.2 毕赤酵母感受态细胞的制备与转化 | 第35-36页 |
| 2.4.3 毕赤酵母转化子的筛选与诱导表达 | 第36页 |
| 2.4.4 重组菌的拷贝数检测 | 第36-37页 |
| 2.4.5 CALB 的酶活检测方法 | 第37页 |
| 2.4.6 荧光显微镜、多功能酶标仪与流式细胞仪检测荧光 | 第37页 |
| 2.4.7 细胞壁蛋白的提取 | 第37-38页 |
| 2.4.8 聚丙烯酰胺凝胶电泳检测胞壁和上清蛋白 | 第38页 |
| 2.4.9 蛋白量检测 | 第38页 |
| 2.5 实验结果与讨论 | 第38-52页 |
| 2.5.1 GS115/pKFS-EGFP、GS115/pKFS-EGFP-CALB、GS115/pKFS-CALB-EGFP 酵母表面展示载体的构建 | 第38-42页 |
| 2.5.2 重组酵母表面展示酶活与上清酶活的鉴定 | 第42-44页 |
| 2.5.3 重组酵母表面展示荧光的鉴定 | 第44-49页 |
| 2.5.4 重组酵母的蛋白量检测 | 第49-51页 |
| 2.5.5 蛋白与荧光强度定量关系确立 | 第51-52页 |
| 2.6 本章小结 | 第52-54页 |
| 第三章 培养基中甘露糖浓度与初始 pH 对 FFD 锚定系统展示效果的影响 | 第54-72页 |
| 3.1 前言 | 第54页 |
| 3.2 实验材料与方法 | 第54-56页 |
| 3.2.1 主要仪器与设备 | 第54页 |
| 3.2.2 质粒与菌株 | 第54-55页 |
| 3.2.3 主要试剂和酶 | 第55页 |
| 3.2.4 培养基与缓冲液 | 第55-56页 |
| 3.3 技术路线 | 第56-57页 |
| 3.4 实验方法 | 第57-58页 |
| 3.4.1 组成型 GAP 启动子的酵母表面展示载体构建 | 第57-58页 |
| 3.4.2 重组酵母的 CALB 酶活、荧光强度检测 | 第58页 |
| 3.5 实验结果与讨论 | 第58-71页 |
| 3.5.1 GS115/pPICZA-GAP-FS-EGFP 表面展示系统的构建 | 第58-61页 |
| 3.5.2 培养基中的甘露糖对 FFD 展示系统展示外源蛋白效果的影响 | 第61-63页 |
| 3.5.3 在不同初始培养 pH 下重组菌的展示外源蛋白效果的变化 | 第63-71页 |
| 3.6 本章小结 | 第71-72页 |
| 第四章 FS 重复区 A 重复单元缺失对 FFD 系统展示外源蛋白效果的影响 | 第72-86页 |
| 4.1 前言 | 第72-73页 |
| 4.2 实验材料与方法 | 第73-74页 |
| 4.2.1 主要仪器与设备 | 第73页 |
| 4.2.2 质粒与菌株 | 第73页 |
| 4.2.3 主要试剂和酶 | 第73页 |
| 4.2.4 培养基与缓冲液 | 第73-74页 |
| 4.3 技术路线 | 第74-75页 |
| 4.4 实验方法 | 第75-77页 |
| 4.4.1 不同 FS 重复区 A 重复单元缺失的毕赤酵母表面突变株的构建 | 第75-76页 |
| 4.4.2 缺失 FS 重复区 A 突变株的诱导检测方法 | 第76页 |
| 4.4.3 缺失 FS 重复区 A 突变株絮凝能力的检测 | 第76-77页 |
| 4.5 实验结果与讨论 | 第77-85页 |
| 4.5.1 缺失 FS 重复区 A 重复单元的酵母表面展示外源蛋白突变株构建 | 第77-78页 |
| 4.5.2 各缺失 FS 重复区 A 突变株展示外源蛋白的效果对比 | 第78-85页 |
| 4.6 本章小结 | 第85-86页 |
| 结论与展望 | 第86-89页 |
| 结论 | 第86-87页 |
| 本论文创新点 | 第87-88页 |
| 展望 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-94页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
| 附件 | 第96页 |
