| 项目资助 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-19页 |
| 1.1 番茄灰霉病的研究 | 第10-12页 |
| 1.1.1 番茄灰霉病生物学特征 | 第10-11页 |
| 1.1.2 番茄灰霉病防治研究 | 第11-12页 |
| 1.1.3 灰霉病的分子研究 | 第12页 |
| 1.2 miRNA 的研究 | 第12-17页 |
| 1.2.1 小分子 RNA | 第12页 |
| 1.2.2 miRNA 研究进展 | 第12-17页 |
| 1.3 miRNA 的研究方法 | 第17-18页 |
| 1.3.1 miRNA 文库构建及克隆 | 第17页 |
| 1.3.2 高通量测序 | 第17-18页 |
| 1.3.3 northern 杂交分析 | 第18页 |
| 1.3.4 生物信息学预测 | 第18页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 第二章 材料与方法 | 第19-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-21页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第19页 |
| 2.1.2 菌株与载体 | 第19页 |
| 2.1.3 培养基与抗生素 | 第19-20页 |
| 2.1.4 其它各种溶液 | 第20-21页 |
| 2.1.5 各种酶、Marker 及试剂盒 | 第21页 |
| 2.1.6 主要仪器 | 第21页 |
| 2.1.7 其它试剂 | 第21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-31页 |
| 2.2.1 植物的种植 | 第21-22页 |
| 2.2.2 植物表达载体的构建 | 第22-26页 |
| 2.2.3 瞬时表达与稳定表达 | 第26-27页 |
| 2.2.4 功能分析 | 第27页 |
| 2.2.5 表达分析 | 第27-29页 |
| 2.2.6 miRNA 靶基因分析 | 第29-31页 |
| 第三章 结果与分析 | 第31-41页 |
| 3.1 植物表达载体的构建 | 第31-34页 |
| 3.1.1 植物基因组 DNA 提取 | 第31页 |
| 3.1.2 miRNA 前体扩增 | 第31-32页 |
| 3.1.3 表达载体 pbin438 质粒提取及双酶切 | 第32-33页 |
| 3.1.4 连接产物的阳性克隆筛选 | 第33页 |
| 3.1.5 农杆菌转化 | 第33-34页 |
| 3.2 瞬时表达 | 第34-35页 |
| 3.3 稳定表达 | 第35-36页 |
| 3.4 功能鉴定 | 第36页 |
| 3.5 表达分析 | 第36-37页 |
| 3.5.1 探针标记 | 第36-37页 |
| 3.5.2 组织特异性分析 | 第37页 |
| 3.6 靶基因鉴定 | 第37-40页 |
| 3.6.1 反转录 | 第37-38页 |
| 3.6.2 靶基因分析 | 第38-40页 |
| 3.7 结论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 作者简介 | 第48页 |