| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 縮略语表 | 第10-11页 |
| 1 引言 | 第11-16页 |
| 1.1 奶牛乳房炎的类型 | 第11-12页 |
| 1.1.1 临床型乳房炎 | 第11页 |
| 1.1.2 非临床型乳房炎 | 第11-12页 |
| 1.1.3 慢性乳房炎 | 第12页 |
| 1.2 奶牛乳房炎的诊断 | 第12-13页 |
| 1.2.1 临床检查 | 第12页 |
| 1.2.2 乳汁体细胞直接检测方法 | 第12页 |
| 1.2.3 乳汁体细胞间接检测方法 | 第12-13页 |
| 1.2.4 乳汁理化性质检测 | 第13页 |
| 1.2.5 乳汁病原微生物检测法 | 第13页 |
| 1.3 金黄色葡萄球菌 | 第13-15页 |
| 1.3.1 金黄色葡萄球菌的生物学特性 | 第13-14页 |
| 1.3.2 金黄色葡萄球菌的毒力因子 | 第14-15页 |
| 1.3.3 金黄色葡萄球菌致病机理 | 第15页 |
| 1.4 金黄色葡萄球菌疫苗研究进展 | 第15-16页 |
| 1.4.1 全菌灭活苗 | 第15页 |
| 1.4.2 单位疫苗 | 第15-16页 |
| 1.4.3 核酸疫苗 | 第16页 |
| 1.5 展望 | 第16页 |
| 2 目的基因的克隆 | 第16-29页 |
| 2.1 试验材料 | 第16-18页 |
| 2.1.1 菌株 | 第16页 |
| 2.1.2 载体与试剂 | 第16页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第16-17页 |
| 2.1.4 主要溶液的配制 | 第17-18页 |
| 2.1.5 试验流程图 | 第18页 |
| 2.2 试验方法 | 第18-24页 |
| 2.2.1 金黄色葡萄球菌基因组DNA的提取 | 第18-19页 |
| 2.2.2 FnBPA-A、FnBPA-D基因的PCR扩增 | 第19-20页 |
| 2.2.3 PCR产物的琼脂糖凝胶电泳检测 | 第20页 |
| 2.2.4 FnBPA-A、FnBPA-D基因的回收、纯化 | 第20-21页 |
| 2.2.5 重组质粒pMD19T-FnBPA-A、pMD19T-FnBPA-D的构建 | 第21页 |
| 2.2.6 重组质粒的PCR鉴定 | 第21-22页 |
| 2.2.7 重组质粒的提取 | 第22-23页 |
| 2.2.8 重组质粒的双酶切鉴定 | 第23-24页 |
| 2.2.9 重组质粒的序列测定 | 第24页 |
| 2.3 结果 | 第24-28页 |
| 2.3.1 FnBPA-A、FnBPA-D基因的PCR扩增 | 第24-25页 |
| 2.3.2 重组质粒的双酶切鉴定 | 第25-26页 |
| 2.3.3 序列测定及相关分析 | 第26-28页 |
| 2.4 讨论 | 第28-29页 |
| 3 目的基因的原核表达 | 第29-40页 |
| 3.1 试验材料 | 第29-32页 |
| 3.1.1 表达载体 | 第29-30页 |
| 3.1.2 试剂 | 第30页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第30页 |
| 3.1.4 主要溶液的配制 | 第30-32页 |
| 3.1.5 试验流程图 | 第32页 |
| 3.2 试验方法 | 第32-36页 |
| 3.2.1 重组表达质粒pET32a- FnBPA-A、pET32a-FnBPA-D的构建 | 第32-33页 |
| 3.2.2 目的蛋白FnBPA-A、FnBPA-D的诱导表达 | 第33-36页 |
| 3.3 结果 | 第36-40页 |
| 3.3.1 重组表达质粒的双酶切鉴定 | 第36-37页 |
| 3.3.2 目的蛋白最佳诱导时间的确定 | 第37-39页 |
| 3.3.3 目的蛋白的可溶性鉴定 | 第39-40页 |
| 3.4 讨论 | 第40页 |
| 4 重组目的蛋白FnBPA-A、FnBPA-D免疫试验研究 | 第40-52页 |
| 4.1 试验材料 | 第40-41页 |
| 4.1.1 试验动物 | 第40页 |
| 4.1.2 试剂 | 第40-41页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第41页 |
| 4.1.4 试验流程图 | 第41页 |
| 4.2 试验方法 | 第41-44页 |
| 4.2.1 目的蛋白浓度测定 | 第41-42页 |
| 4.2.2 疫苗的制备 | 第42页 |
| 4.2.3 免疫动物 | 第42页 |
| 4.2.4 免疫血清特异性抗体检测 | 第42-43页 |
| 4.2.5 目的蛋白的Western Blot检测 | 第43页 |
| 4.2.6 T淋巴细胞增殖试验 | 第43-44页 |
| 4.2.7 吞噬调理试验 | 第44页 |
| 4.2.8 细胞因子水平检测 | 第44页 |
| 4.3 结果 | 第44-51页 |
| 4.3.1 重组蛋白浓度测定结果 | 第44-45页 |
| 4.3.2 免疫血清IgG抗体水平检测结果 | 第45-46页 |
| 4.3.3 血清抗体效价检测结果 | 第46页 |
| 4.3.4 Western Blot分析结果 | 第46-47页 |
| 4.3.5 T淋巴细胞增殖试验结果 | 第47页 |
| 4.3.6 吞噬调理试验结果 | 第47-49页 |
| 4.3.7 细胞因子检测结果 | 第49-51页 |
| 4.4 讨论 | 第51-52页 |
| 5 结论 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 作者简介 | 第59页 |
