| 符号说明 | 第4-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1 前言 | 第13-25页 |
| 1.1 植物抗逆性研究进展 | 第13-16页 |
| 1.1.1 非生物胁迫对植物的伤害 | 第13页 |
| 1.1.2 植物在应对非生物胁迫下的生理反应 | 第13-14页 |
| 1.1.3 植物抗非生物胁迫分子机制研究进展 | 第14-16页 |
| 1.2 TLP(tubby-likeprotein)基因家族研究进展 | 第16-18页 |
| 1.2.1 动物TLP的功能研究 | 第16-17页 |
| 1.2.2 植物TLP的功能研究 | 第17-18页 |
| 1.3 苹果基因组学研究进展 | 第18-21页 |
| 1.3.1 苹果概述 | 第18页 |
| 1.3.2 苹果基因组测序 | 第18-19页 |
| 1.3.3 生物信息学研究进展 | 第19-21页 |
| 1.3.3.1 生物信息学概述 | 第19-20页 |
| 1.3.3.2 生物信息学数据库 | 第20页 |
| 1.3.3.3 生物信息学软件的主要功能简介 | 第20-21页 |
| 1.4 基因转录水平差异表达研究方法 | 第21-23页 |
| 1.4.1 Northern印迹杂交技术 | 第22页 |
| 1.4.2 RCR技术 | 第22页 |
| 1.4.3 高通量技术 | 第22-23页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第23-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-28页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第25页 |
| 2.1.2 材料的处理 | 第25页 |
| 2.1.3 菌株和质粒 | 第25-26页 |
| 2.1.4 酶、试剂盒与各种试剂 | 第26页 |
| 2.1.5 引物 | 第26-27页 |
| 2.1.6 软件和数据库资源 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-40页 |
| 2.2.1 苹果基因组中TLP基因的鉴定和分析 | 第28-30页 |
| 2.2.1.1 苹果基因组中TLP基因的鉴定 | 第28-29页 |
| 2.2.1.2 苹果、拟南芥、水稻、玉米TLP基因进化分析 | 第29页 |
| 2.2.1.3 额外结构域的鉴定和蛋白质亚细胞定位 | 第29页 |
| 2.2.1.4 MdTLPs染色体定位信息和基因结构 | 第29-30页 |
| 2.2.1.5 保守Motif的鉴定和tubby结构域同源建模 | 第30页 |
| 2.2.1.6 MdTLPs的启动子分析 | 第30页 |
| 2.2.2 实时荧光定量PCR | 第30-32页 |
| 2.2.2.1 苹果组织总RNA的提取以及纯度、浓度及完整性检测 | 第30-31页 |
| 2.2.2.2 RNA的纯度、浓度及完整性检测 | 第31页 |
| 2.2.2.3 RNA反转录 | 第31-32页 |
| 2.2.2.4 实时荧光定量PCR | 第32页 |
| 2.2.3 植物表达载体的构建 | 第32-35页 |
| 2.2.3.1 目的片段的获得 | 第32-33页 |
| 2.2.3.2 目的片段与载体pBI121双酶切回收产物连接 | 第33-35页 |
| 2.2.4 植物表达载体转化农杆菌 | 第35页 |
| 2.2.4.1 根瘤农杆菌GV3101感受态的制备 | 第35页 |
| 2.2.4.2 质粒DNA转化农杆菌细胞 | 第35页 |
| 2.2.5 农杆菌介导的拟南芥花絮侵染 | 第35-36页 |
| 2.2.6 微量快速提取拟南芥基因组 | 第36页 |
| 2.2.7 转基因植株的获得及筛选 | 第36-37页 |
| 2.2.8 MdTLP7点突变原核表达载体的构建 | 第37-40页 |
| 2.2.8.1 目的片段的获取 | 第37-38页 |
| 2.2.8.2 大肠杆菌Rosetta感受态细胞的制备 | 第38页 |
| 2.2.8.3 消化产物转化大肠杆菌Rosetta感受态细胞 | 第38页 |
| 2.2.8.4 阳性克隆的筛选 | 第38-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-57页 |
| 3.1 在苹果基因组中鉴定了9个TLP编码基因 | 第40-42页 |
| 3.2 MdTLPs基因家族中鉴定出一个额外的功能结构域F-box结构域 | 第42-43页 |
| 3.3 MdTLPs基因染色体定位和基因结构 | 第43-45页 |
| 3.4 MdTLPs的保守Motif预测和同源建模及亚细胞定位预测 | 第45-47页 |
| 3.5 苹果TLP基因响应非生物胁迫 | 第47-50页 |
| 3.6 苹果TLP基因的组织表达模式 | 第50-51页 |
| 3.7 苹果MdTLP7的抗性研究 | 第51-57页 |
| 3.7.0 转基因拟南芥的获得 | 第51-52页 |
| 3.7.1 超表达MdTLP7能够增强拟南芥植株的抗性 | 第52-54页 |
| 3.7.2 保守氨基酸KXR突变影响MdTLP7的抗胁迫能力 | 第54-57页 |
| 4 讨论 | 第57-60页 |
| 5 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 附录 | 第68-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 攻读学位期间发表的论文及成果 | 第74页 |
