| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 文献综述 | 第11-20页 |
| 第一章 MicroRNA的研究现状 | 第11-16页 |
| 1.1 miRNAs的产生及作用机制 | 第11页 |
| 1.2 miRNAs对卵母细胞成熟的影响 | 第11-12页 |
| 1.3 miRNAs与精子发生 | 第12-13页 |
| 1.4 miRNAs对胚胎发育的影响 | 第13-15页 |
| 1.5 miR-301a研究进展 | 第15-16页 |
| 第二章 TGF-β通路与早期胚胎发育 | 第16-20页 |
| 2.1 Activin与早期胚胎发育 | 第16-17页 |
| 2.2 BMP信号与早期胚胎发育 | 第17-18页 |
| 2.3 Nodal信号与早期胚胎发育 | 第18-19页 |
| 2.4 研究的目的及意义 | 第19-20页 |
| 试验部分 | 第20-54页 |
| 第三章 Bta-miR-301a精源性验证及靶基因预测 | 第20-32页 |
| 3.1 试验仪器和材料 | 第20-21页 |
| 3.1.1 试验仪器 | 第20-21页 |
| 3.1.2 试剂与耗材 | 第21页 |
| 3.1.3 溶液配制 | 第21页 |
| 3.2 试验方法 | 第21-25页 |
| 3.2.1 牛卵母细胞的收集及成熟培养 | 第21页 |
| 3.2.2 体外受精 | 第21页 |
| 3.2.3 miScript单细胞定量qPCR体系 | 第21-23页 |
| 3.2.4 靶基因预测 | 第23页 |
| 3.2.5 靶基因通路分析 | 第23-24页 |
| 3.2.6 MII期卵母细胞靶基因表达水平检测 | 第24-25页 |
| 3.3 试验结果 | 第25-29页 |
| 3.3.1 bta-miR-301a精源性验证 | 第25-26页 |
| 3.3.2 bta-miR-301a靶基因预测及通路分析 | 第26-29页 |
| 3.4 讨论 | 第29-31页 |
| 3.5 结论 | 第31-32页 |
| 第四章 Bta-miR-301a靶基因验证 | 第32-46页 |
| 4.1 试验仪器与材料 | 第32-34页 |
| 4.1.1 试验仪器与耗材 | 第32-33页 |
| 4.1.2 试验试剂 | 第33-34页 |
| 4.2 试验方法 | 第34-40页 |
| 4.2.1 载体构建 | 第34-38页 |
| 4.2.2 脂质体转染 | 第38页 |
| 4.2.3 双荧光报告基因检测 | 第38-40页 |
| 4.3 试验结果 | 第40-44页 |
| 4.3.1 靶基因报告载体构建 | 第40-41页 |
| 4.3.2 靶基因突变载体构建 | 第41-42页 |
| 4.3.3 双荧光报告基因验证结果 | 第42-43页 |
| 4.3.4 荧光定量PCR结果 | 第43-44页 |
| 4.3.5 WesternBlot检测miR-301a对ACVR1蛋白的影响 | 第44页 |
| 4.4 讨论 | 第44-45页 |
| 4.5 结论 | 第45-46页 |
| 第五章 Bta-miR-301a对早期胚胎发育的影响 | 第46-54页 |
| 5.1 试验仪器与材料 | 第46页 |
| 5.1.1 试验仪器 | 第46页 |
| 5.1.2 试验试剂与耗材 | 第46页 |
| 5.2 试验方法 | 第46-48页 |
| 5.2.1 MII期卵母细胞的获得 | 第46页 |
| 5.2.2 体细胞核移植 | 第46-47页 |
| 5.2.3 孤雌激活 | 第47页 |
| 5.2.4 显微注射 | 第47页 |
| 5.2.5 定量PCR | 第47页 |
| 5.2.6 免疫荧光染色 | 第47-48页 |
| 5.3 试验结果 | 第48-52页 |
| 5.3.1 ACVR1在NT、PA、IVF中的表达情况 | 第48-49页 |
| 5.3.2 miR-301amimic注射浓度的确定 | 第49-50页 |
| 5.3.3 注射后胚胎卵裂率与囊胚率统计 | 第50-51页 |
| 5.3.4 miR-301a对胚胎卵裂时间的影响 | 第51-52页 |
| 5.4 讨论 | 第52-53页 |
| 5.5 结论 | 第53-54页 |
| 全文结论 | 第54页 |
| 创新点和后续研究 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-64页 |
| 附录 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 作者简介 | 第66页 |
